沿海地區(qū)人群高尿酸血癥患病率及其與SLC2A9基因rs2241480位點(diǎn)多態(tài)性的關(guān)系

魏曉珠 蘇維 陳望 劉愛(ài)玲

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)社會(huì)的發(fā)展，人民生活水平不斷提高，高嘌呤和高蛋白飲食攝入量不斷增加，特別是居住在沿海地區(qū)的人群，常年食入大量海鮮，導(dǎo)致人群血尿酸含量呈不斷上升趨勢(shì)。當(dāng)體內(nèi)血尿酸含量過(guò)高時(shí)會(huì)引起高尿酸血癥（hyperuricemia，HUA），長(zhǎng)時(shí)間高尿酸血癥會(huì)誘發(fā)人體急性或慢性痛風(fēng)，已成為威脅人類(lèi)健康的重要疾病之一，且其發(fā)病率在全球均呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)[1]，應(yīng)引起人們的廣泛重視。同時(shí)，據(jù)有關(guān)研究結(jié)果表明，人體中尿酸相關(guān)基因位點(diǎn)的多態(tài)性與HUA發(fā)病率具有密切相關(guān)性[2，3]，且不同地區(qū)、不同人群尿酸相關(guān)基因位點(diǎn)的多態(tài)性分布特征又存在一定的差異性。為此，本文對(duì)深圳沿海地區(qū)人群HUA患病率現(xiàn)狀及其與SLC2A9基因rs2241480位點(diǎn)多態(tài)性之間的相關(guān)性進(jìn)行調(diào)查分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

材料與方法

1 研究對(duì)象 隨機(jī)選取2018年3～7月居住在沿海地區(qū)的人群2 753例，年齡13～67歲，平均（37±14.62）歲，男1 593例，女1 160例。按不同年齡分為13～21歲372例（男209例，女163例）、22～30歲451例（男254例，女197例）、31～40歲503例（男297例，女206例）、41～50歲676例（男370例，女306例）、51～60歲425例（男245例，女180例）及＞60歲326例（男218例，女108例）等6組。排除標(biāo)準(zhǔn)：白血病、甲低及尿崩癥等可導(dǎo)致血尿酸含量繼發(fā)性升高的患者；近期服用影響尿酸含量的藥物（如呋塞米、吡嗪酰胺類(lèi)和乙胺丁醇等）的患者；肝、腎功能不全、血液疾病、甲亢和各種癌腫放療或化療后的患者。同時(shí)選取同地區(qū)UA含量正常的健康體檢人群120例為非HUA組，年齡14～70歲，平均（38±15.71）歲，確保兩組的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有研究對(duì)象均告知并簽定知情同意書(shū)，本研究經(jīng)同醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

2 儀器與試劑 AU5800全自動(dòng)生化分析儀、校正品、室內(nèi)質(zhì)控物及UA試劑由美國(guó)Bankman公司提供；Complete iPLEX Gold Genotyping Reagent Set、ABI7500 PCR、GeneScanTM 120均由美國(guó)ABI公司提供；DNA提取試劑盒由北京百泰克公司提供；質(zhì)譜點(diǎn)樣儀MassARRAY NanodisPenser SEQUENOM由美國(guó)Sequenom公司；質(zhì)譜分析儀MassARRAY Compact System SEQUENOM由美國(guó)Sequenom公司提供。

3 方法

3.1 標(biāo)本采集：所有研究對(duì)象均于清晨空腹用一次真空采血針管采集靜脈血6～8 mL，其中4 mL注入EDTA-k2抗凝管內(nèi)混勻，平分于2支EP管內(nèi)，并置于-80℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?，另外?～4 mL注入無(wú)抗凝劑的干燥管內(nèi)，室內(nèi)靜置30 min后于3 500 r/min離心機(jī)內(nèi)離心3～5 min，分離血清檢測(cè)尿酸。

3.2 血尿酸檢測(cè)：檢測(cè)前對(duì)AU5800全自動(dòng)生化分析進(jìn)行保養(yǎng)、校正及室內(nèi)質(zhì)室，待室內(nèi)結(jié)果在控后再行標(biāo)本檢測(cè)，所有操作均嚴(yán)格按照儀器、試劑盒說(shuō)明書(shū)及科室SOP文件進(jìn)行。 HUA診斷標(biāo)準(zhǔn)：我國(guó)根據(jù)血尿酸的調(diào)查結(jié)果制定高尿酸血癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：男性血尿酸濃度≥417 μmol／L（7.0 mg/mL），女性血尿酸＞357 μmol/L（6.0 mg/mL）判斷為HUA。

3.3 DNA提?。簢?yán)格按照尿酸基因DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行核酸提取操作，將提取到的核酸加到1.5 mL離心管內(nèi)，于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3.4 引物設(shè)計(jì)與合成：使用Sequenom MassARRAY As say Design 3.0 Software對(duì)SLC2A9基因rs2241480位點(diǎn)進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，F(xiàn)：5'-ACGTTGGATGCCACTACCTTCTCCCATCAC-3'，R：5'CGTTGGATGAATGAGGGGCTATAAGTCGG-3'，并由廣州達(dá)安生物技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行引物合成。

3.5 基因多態(tài)性分析：采用Sequenom MassARRAY iPLEX GOLD技術(shù)，對(duì)HUA組及非HUA組的SLC2A9基因rs2241480位點(diǎn)基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用GraphPad Prism 5軟件，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 HUA發(fā)病率 深圳沿海地區(qū)2 753例人群中檢出425例HUA，患病率為15.44%，其中男性18.27%（291/1 593），女性11.55%（134/1 160），男性高于女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.78，P＜0.05）。

2 不同年齡和性別人群HUA發(fā)病率 深圳沿海地區(qū)2 753例人群中＞60歲組的HUA患病率最高，為30.67%（100/326），其次為51～60歲組和41～50歲組，分別為21.18%（90/425）和15.09%（102/676），各年齡組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.17～3.42，P＜0.05）。60歲及以下各組男性HUA患病率均高于女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.76～3.91，P＜0.05），但＞60歲組女性HUA患病率高于男性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.04，P＜0.05），結(jié)果見(jiàn)表1。

3 SLC2A9基因rs2241480位點(diǎn)多態(tài)性與HUA相關(guān)性 425例HUA患者中SLC2A9基因rs2241480位點(diǎn)CC、CT及TT基因型的檢出率分別為44.71%（190/425）、30.82%（131/425）及24.47%（104/425），120例非HUA人群分別為18.33%（22/120）、37.50%（45/120）及44.17%（53/120），HUA人群中CC基因型檢出率高于非HUA人群，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.16，P＜0.05）。HUA人群C等位基因頻率為60.12%（511/850），明顯高于非HUA組的37.08%（89/240），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.60，P＜0.05）。

表1 不同年齡和性別人群HUA發(fā)病率[%（n）]

討 論

尿酸（Uric Acid，UA）為嘌呤代謝終末產(chǎn)物，在血液中以尿酸鹽的形式存在，其含量的穩(wěn)定主要依賴(lài)于尿酸的生成、排泄及重吸收過(guò)程之間的平衡，一旦UA形成和排泄中的任一過(guò)程發(fā)生失調(diào)或/紊亂，就會(huì)導(dǎo)致其生成增多或排出減少，引發(fā)HUA[5]。HUA是以血尿酸含量異常升高而引起的一種無(wú)明顯癥狀又易被患者所忽略的疾病，長(zhǎng)期保持高濃度血尿酸狀態(tài)，會(huì)誘發(fā)人體的急性或慢性痛風(fēng)，是痛風(fēng)發(fā)病最重要的危險(xiǎn)因素。另外，有文獻(xiàn)研究表明，血尿酸含量升高還可增加高血壓、心血管疾病、腎結(jié)石、慢性腎功能不全及代謝綜合征的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，加速這些疾病的進(jìn)展。隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展和人口老齡化進(jìn)程，HUA已成為全球人類(lèi)“第四高”疾病，其患病率在全球呈逐步上升趨勢(shì)，應(yīng)引起全球人類(lèi)的關(guān)注和重視[6-8]。

國(guó)內(nèi)外流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，我國(guó)HUA發(fā)病率呈逐步上升趨勢(shì)，且HUA發(fā)病率在不同地域、種族存在一定的差異性[9，10]，如我國(guó)大陸平均HUA患病率的13.3%[11]、美國(guó)為21.0%[12]、孫紅娟等[13]報(bào)道海南地區(qū)的22.6%、鄧子妮等[14]報(bào)道?？谑械?2.53%、史平等[15]報(bào)道北京的11.06%、劉曉琳等[16]報(bào)道上海的15.54%、吳偉戎等[17]報(bào)導(dǎo)廣州的20.73%、鄒貴勉等[18]報(bào)道廣西的23.5%及邵小飛等[19]報(bào)道珠海的32.41%。本研究結(jié)果顯示，深圳沿海地區(qū)人群HUA患病率為15.44%，處于國(guó)內(nèi)平均水平稍上，除了可能與不同地區(qū)人群的生活習(xí)慣、周?chē)h(huán)境及食品種類(lèi)等諸多因素不同有關(guān)外，還可能與人群遺傳背景不同有關(guān)。

據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，不同性別HUA患病率也存在很大的差異性[20]，如申洋等[21]報(bào)道西部某大型國(guó)企男性的高尿酸血癥患病率為21.5%，女性為4.0%，孫紅娟等[13]報(bào)道海南地區(qū)男性為29.5%，女性為9.2%，而本研究結(jié)果顯示，深圳沿海地區(qū)男性HUA患病率為18.27%，明顯高于女性的11.55%，且除了60歲以上老年人群以外，以男性高于女性，其中60歲及以下男性HUA患病率明顯高于女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這可能與男女間生理性差異有關(guān)，其中雄性激素有抑制體內(nèi)尿酸排泄作用，而雌激素可使細(xì)胞器的磷脂酶對(duì)尿酸鹽結(jié)晶有易感染性而引起細(xì)胞反應(yīng)，抵抗結(jié)晶沉淀，從而促進(jìn)尿酸的排泄[23]。此外，脂聯(lián)素水平與血尿酸含量呈負(fù)相關(guān)性，女性血清中脂聯(lián)素含量高于男性，而60歲以上老年人群男性HUA患病率低于女性，這可能與女性進(jìn)入圍絕經(jīng)期雌激素水平開(kāi)始下降、促進(jìn)尿酸排泄的保護(hù)作用逐漸減弱等有關(guān)[24]。

有研究表明，近年來(lái)HUA發(fā)病率呈現(xiàn)低齡化趨勢(shì)，且不同地區(qū)低齡人群HUA發(fā)病率也存在很大差異性，如雍雪蓮等[23]報(bào)道湖北大學(xué)生15.43%、郭丹丹等[25]報(bào)道北京中小學(xué)生的7.3%，而本研究13～21歲組HUA患病率只有5.91%，處于國(guó)內(nèi)較低水平，這可能與不同地區(qū)人群的生活水平、高嘌呤和高蛋白攝入及運(yùn)動(dòng)量等因素存在很大差別有關(guān)。但充分說(shuō)明了不同地區(qū)HUA患病率逐步呈現(xiàn)低齡化趨勢(shì)，應(yīng)引起社會(huì)和家庭高度重視。

高尿酸血癥是一種復(fù)雜性疾病，除了與周?chē)h(huán)境因素有關(guān)外，多種基因和多個(gè)位點(diǎn)都參與高尿酸血癥的發(fā)病，且在HUA發(fā)病中發(fā)揮重要作用。有研究結(jié)果表明，影響尿酸的遺傳因素占HUA發(fā)病率的40%～70%[26]。其中SLC2A9基因?yàn)槟蛩猁}轉(zhuǎn)運(yùn)子基因之一，其基因編碼葡萄糖載體GLUT9蛋白具有GLUT9L和GLUT9S 2種異構(gòu)體，這2種異構(gòu)體均有生理性轉(zhuǎn)運(yùn)尿酸鹽的作用[10]。有研究表明，SLC2A9基因有使尿酸水平增高和誘發(fā)痛風(fēng)的作用，是目前影響力最大的易感基因位點(diǎn)，且存在種族特異性[1，2]。本研究結(jié)果顯示，深圳沿海地區(qū)人群HUA人群中SLC2A9基因rs2241480位點(diǎn)CC基因型檢出率及C等位基因頻率均明顯高于非HUA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與國(guó)內(nèi)外有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的一致，這說(shuō)明了SLC2A9基因rs2241480位點(diǎn)CC基因型和C等位基因可能是導(dǎo)致本區(qū)人群HUA的致病基因。

綜上所述，深圳沿海地區(qū)人群有一定的HUA患病率，并呈現(xiàn)低齡化發(fā)病趨勢(shì)。不同地區(qū)、人群、性別及遺傳背景的人群中HUA患病率存在一定的差異性，且高尿酸相關(guān)基因位點(diǎn)呈多態(tài)性分布。因此，加強(qiáng)不同區(qū)域人群血中UA濃度篩查及HUA基因位點(diǎn)多態(tài)性分析，對(duì)早發(fā)現(xiàn)、早診斷及早預(yù)防HUA發(fā)病具有重要意義，同時(shí)基因多態(tài)性分析為靶向治療、預(yù)防藥物的研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。