STAT3在胰腺癌輔助診斷及預(yù)后中的價(jià)值*

陳姜 向洪洲 李政 張瑩

中國(guó)胰腺癌發(fā)生率呈快速上升趨勢(shì)，年發(fā)生率約為7/10萬，已成為十大惡性腫瘤之一[1]。胰腺癌預(yù)后較差，死亡率較高，早期診斷困難，缺乏特異性癥狀、體征，診斷時(shí)多進(jìn)入晚期，喪失根治機(jī)會(huì)，5年生存率僅1%～3%[2]。胰腺癌分子病理學(xué)研究是惡性腫瘤的研究熱點(diǎn)，目前已發(fā)現(xiàn)多個(gè)傳導(dǎo)通路在胰腺癌發(fā)生、進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3 是一種DNA結(jié)合蛋白，大量研究顯示在食管癌、肺癌等惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，現(xiàn)有資料顯示其參與調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、惡性轉(zhuǎn)化[3-5]。本文采用實(shí)驗(yàn)研究，收集2014年2月～2016年8月醫(yī)院肝膽外科已手術(shù)的胰腺癌患者74例，良性胰腺腫瘤、胰腺炎80例（各40例）手術(shù)獲得樣本，分析STAT3表達(dá)情況，評(píng)價(jià)STAT3在胰腺癌輔助診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)中的價(jià)值，為臨床提供參考依據(jù)。

資料與方法

1 一般資料 2014年2月～2016年8月，收集醫(yī)院肝膽外科進(jìn)行手術(shù)的胰腺癌患者74例，其中男50例、女24例，年齡（60.4±8.5）歲。胰腺癌癥發(fā)生部位：胰頭頸癌55例，胰體尾癌19例。胰腺癌組織學(xué)分級(jí)：高分化7例、中分化35例、低分化32例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性25例、陰性49例。良性胰腺腫瘤40例（胰腺腺瘤11例、胰島細(xì)胞瘤15例、脂肪瘤8例、其他6例）、胰腺炎40例手術(shù)獲得樣本，其中男53例、女27例，年齡（57.4±11.3）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①獲得的組織樣本保存完好；②患者和/或家屬知情同意；③明確病理診斷。

2 方法 儀器試劑主要包括LEICA切片機(jī)、烤片機(jī)、石蠟包埋機(jī)、自動(dòng)脫水機(jī)、組織微矩陣儀、光學(xué)顯微機(jī)、恒溫水浴箱、兔抗人STAT3單克隆抗體、DAB顯色劑、抗原修復(fù)液等。免疫組化分析采用SABC法，采用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，進(jìn)行內(nèi)源性過氧化物酶活性阻斷后抗原修復(fù)。采用PH6.0枸櫞酸鈉抗原修復(fù)液處理切片，微波爐加熱，100℃ 2 min，30℃7 min，冷卻至室溫，蒸餾水吸2次，PBS緩沖液浸泡2 min/4次。采用山羊血清封閉液孵育20 min，封閉非免疫抗原，依次滴加一抗、二抗、DAB顯色劑，蘇木素復(fù)染、氨水返藍(lán)、脫水、脫敏、封片、鏡檢。以PBS溶液代替一抗作為陰性對(duì)照。采用免疫印跡法檢測(cè)蛋白p-STAT3相對(duì)表達(dá)，取抗原修復(fù)組織，研磨，4℃下1×104r/min離心5 min，取上清，G250蛋白定量，取蛋白樣70μg，SD-PAGE電泳檢測(cè)，AB顯色，軟件分析蛋白灰度值，以beta-actin作為內(nèi)參。

3 觀察指標(biāo) 對(duì)比胰腺癌、良性疾病對(duì)象的STAT3表達(dá)與p-STAT3相對(duì)表達(dá)，評(píng)價(jià)STAT3表達(dá)的診斷效用。分析STAT3陽(yáng)性、陰性對(duì)象的胰腺癌分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。以24個(gè)月為觀察期，對(duì)比胰腺癌預(yù)后不良（出現(xiàn)擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)）對(duì)象32例、預(yù)后良好胰腺癌對(duì)象42例的STAT3。

4 療效判定 細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色的顆粒為陽(yáng)性，STAT3蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)，表達(dá)強(qiáng)度采用積分制。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS20.0軟件，p-STAT3水平服從正態(tài)分布，多組間對(duì)比采用F檢驗(yàn)，陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)，分期、表達(dá)強(qiáng)度分級(jí)比較采用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 表達(dá)情況 胰腺癌組織STAT3表達(dá)率高于癌旁組織、癌旁組織高于良性胰腺疾病，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=219.735、8.614，P＜0.001）。STAT3診斷胰腺癌的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、符合率分別為70.3%（52/74）、86.2%（69/80）、82.5%（52/63）、75.8%（69/91）、78.6%（121/154）。見表1。胰腺癌組織、癌旁組織、良性胰腺組織中的p-STAT3表達(dá)水平分別為（5.4±2.1）、（3.1±1.2）、（2.8±0.8），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.105、P＜0.001）。

2 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與分期 胰腺癌組織中STAT3陽(yáng)性對(duì)象的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移高于STAT3陰性者，按照胰腺癌腫瘤分期[6]，胰腺癌組織中STAT3陽(yáng)性對(duì)象的臨床分期與STAT3陰性者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。以24個(gè)月為觀察期，胰腺癌預(yù)后不良（出現(xiàn)擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、死亡）對(duì)象32例、預(yù)后良好胰腺癌對(duì)象42例。陽(yáng)性對(duì)象預(yù)后不良率高于陰性對(duì)象，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

3 STAT3表達(dá)與預(yù)后之間的關(guān)系 以24個(gè)月為觀察期，比較胰腺癌預(yù)后不良（出現(xiàn)擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、死亡）對(duì)象32例、預(yù)后良好胰腺癌42例的STAT3表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=5.541、P＜0.001）。見表3。

表1 胰腺癌組織、癌旁組織、良性胰腺疾病STAT3表達(dá)情況[n（%）]

表2 胰腺癌STAT3陽(yáng)性與陰性對(duì)象的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與分期對(duì)比[n（%）]

表3 24個(gè)月預(yù)后不良與良好對(duì)象STAT3表達(dá)情況對(duì)比[n（%）]

討 論

胰腺癌已成為我國(guó)十大惡性腫瘤之一，生存時(shí)間短、預(yù)后差。STAT3是一種DNA結(jié)合蛋白，是JAK-STAT3途徑的中JAK的底物，STAT3參與誘導(dǎo)Bcl-2、Bcl-xL表達(dá)，阻斷惡性腫瘤細(xì)胞凋亡、通過調(diào)節(jié)IL-6等細(xì)胞因子誘導(dǎo)Bcl-xL表達(dá)，間接抑制惡性腫瘤細(xì)胞凋亡，通過IL-11上調(diào)存活素表達(dá)而促細(xì)胞有絲分裂、阻斷拮抗細(xì)胞凋亡[7]。STAT3與腫瘤轉(zhuǎn)移、免疫逃逸關(guān)系密切，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究顯示STAT3高表達(dá)可增加腫瘤細(xì)胞侵襲性，若阻斷STAT3相關(guān)通路，可提升抗腫瘤療效，增加腫瘤細(xì)胞凋亡率，抑制STAT3活性可嘗試多種抗腫瘤藥物[8]。

研究顯示STAT3在惡性腫瘤中呈高表達(dá)，陽(yáng)性率在50%～100%，本研究顯示本組對(duì)象的胰腺組織STAT3陽(yáng)性率70.27%處于正常水平，其他文獻(xiàn)報(bào)道顯示STAT3陽(yáng)性率在40%～100%，反映了胰腺癌臨床特點(diǎn)的差異[9]。STAT3在胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)與VEGF、MMP-2、細(xì)胞增殖指數(shù)、凋亡指數(shù)等相關(guān)指標(biāo)關(guān)系密切，提示STAT3與胰腺癌細(xì)胞株的侵襲性、細(xì)胞周期活動(dòng)關(guān)系密切，高表達(dá)時(shí)會(huì)增加細(xì)胞株的侵襲性，同時(shí)降低凋亡指數(shù)[10]。研究顯示，胰腺癌組織、癌旁組織、良性胰腺組織中的p-STAT3表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），胰腺癌組織中p-STAT3表達(dá)水平最高。p-STAT3是STAT3與JAK結(jié)合活化的產(chǎn)物，誘導(dǎo)靶基因轉(zhuǎn)錄活化，以控制細(xì)胞轉(zhuǎn)化、阻斷凋亡效應(yīng)，提示STAT3高表達(dá)阻斷了凋亡效應(yīng)、增加惡性病變風(fēng)險(xiǎn)的作用。

從診斷情況看，STAT3診斷胰腺癌的靈敏度、特異度、符合率分別為70.3%、86.2%、78.6%，相關(guān)報(bào)道較少，STAT3在良性胰腺中也可表達(dá)，但為低表達(dá)，有報(bào)道顯示其在正常胰腺組織中表達(dá)非常低，可以為0%。STAT3在正常情況下胰腺細(xì)胞表達(dá)率極低，但其在大腦、心臟、肝臟、睪丸、胸腺正常細(xì)胞組織也有較高表達(dá)，STAT3在早期胚胎發(fā)育、許多組織分化中發(fā)揮重要作用[11]。因此，有研究認(rèn)為STATS可能與胰腺原癌有關(guān)，持續(xù)活化會(huì)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲與轉(zhuǎn)移，胰腺腫瘤活動(dòng)對(duì)STAT3依賴性很強(qiáng)，在診斷胰腺癌中有較高價(jià)值[10]。

本研究中，胰腺癌組織中STAT3陽(yáng)性對(duì)象的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率40.38%高于STAT3陰性對(duì)象的9.09%（P＜0.05），不同研究的整體轉(zhuǎn)移率存在一定的差異，陽(yáng)性者轉(zhuǎn)移率是陰性者的4～10倍[12，13]。胰腺癌STAT3表達(dá)也與分期有關(guān)，研究中陽(yáng)性對(duì)象臨床分期明顯高于STAT3陰性者（P＜0.05），特別是Ⅲ期對(duì)象表達(dá)率為100.0%，Ⅱ期對(duì)象也是陰性對(duì)象的2倍，這與STAT3高表達(dá)提示腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移特性更強(qiáng)有關(guān)。有關(guān)STAT3表達(dá)的相關(guān)信號(hào)、細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)研究較多，從現(xiàn)有研究來看，STAT3異常激活可能與胰腺癌細(xì)胞的惡性表現(xiàn)有關(guān)，主要定位于胞漿，隨著分期的上升，STAT3異常激活明顯增強(qiáng)，高表達(dá)與胰腺癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)。STAT3是許多信號(hào)通路的交匯點(diǎn)，一定程度上可以反映細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)活動(dòng)，從而表現(xiàn)惡性腫瘤細(xì)胞信號(hào)網(wǎng)絡(luò)狀態(tài)，以判斷惡性腫瘤的嚴(yán)重程度。

有關(guān)胰腺癌預(yù)后的陰性因素分析并不少見，大量研究顯示患者預(yù)后與腫瘤大小、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素有關(guān)，本組對(duì)象24個(gè)月預(yù)后良好率達(dá)到56.8%,處于較好水平，優(yōu)于其他文獻(xiàn)回顧性分析。本組對(duì)象為回顧性、臨床資料完整的手術(shù)對(duì)象，入選對(duì)象本身排除了無法手術(shù)姑息治療的，這些對(duì)象生存時(shí)間較短，這可能是本組對(duì)象更好的主要原因[14]。對(duì)于那些姑息治療的對(duì)象，生存期更容易受到姑息治療方式特別是靶向治療藥物的應(yīng)用、自身心態(tài)、基礎(chǔ)狀況等因素影響。STAT3高表達(dá)導(dǎo)致預(yù)后不佳，主要與其與手術(shù)分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)，高分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是預(yù)后不良的主要危險(xiǎn)因素。高表達(dá)STAT3，其活化可使JAK-STAT3信號(hào)通路持續(xù)過度激活，調(diào)節(jié)細(xì)胞基質(zhì)成分，從而明顯增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力、抗凋亡能力，達(dá)到影響療效。STAT3高表達(dá)與胃癌等惡性腫瘤預(yù)后不良有關(guān)[15]。STAT3表達(dá)檢測(cè)不僅可作為胰腺癌治療的潛在靶點(diǎn)，而且可用作新藥篩選、耐藥分子機(jī)制分析等領(lǐng)域。STAT3活性的下降，還可能會(huì)導(dǎo)致相關(guān)耐藥基因發(fā)生改變，影響拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ、腫瘤壞死因子凋亡誘導(dǎo)相關(guān)配體、Ras腫瘤基因家族成員等表達(dá)，這為胰腺癌治療提供了新的思路[15]。

綜上，STAT3在胰腺癌輔助診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)中有一定的參考價(jià)值。胰腺癌組織中往往呈現(xiàn)STAT3高表達(dá)，而STAT3高表達(dá)也與患者預(yù)后不良、高分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。