國(guó)產(chǎn)精子計(jì)數(shù)板在長(zhǎng)白公豬精液檢測(cè)上的應(yīng)用研究

崔小榮，陳志林，黃梅，師曉杰，陳興榮，梁振華，陳斌燦，嚴(yán)廣寬

（溫氏食品集團(tuán)股份有限公司，國(guó)家生豬種業(yè)工程技術(shù)研究中心，廣東 云浮 527400）

精液的常規(guī)檢測(cè)是評(píng)價(jià)公豬精液質(zhì)量的一項(xiàng)基本檢查。近年來，養(yǎng)豬行業(yè)逐漸出現(xiàn)一些新的自動(dòng)檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用在精液的常規(guī)分析檢測(cè)中，如CASA(Computer-aided sperm analysis)分析系統(tǒng)、EasyCyte分析儀、Magapor GESIPOR 分析系統(tǒng)等。然而這些精液分析儀配套的精子計(jì)數(shù)板存在價(jià)格高、不便清洗等缺點(diǎn)[1]。此試驗(yàn)主要以精子計(jì)數(shù)板為研究對(duì)象，研究國(guó)產(chǎn)的精子計(jì)數(shù)板產(chǎn)品代替進(jìn)口的精子計(jì)數(shù)板產(chǎn)品的可行性，以期為豬的精液檢測(cè)節(jié)省費(fèi)用并提供參考與借鑒。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)動(dòng)物來自溫氏食品集團(tuán)股份有限公司山東聊城地區(qū)種豬場(chǎng)，共計(jì)81 頭長(zhǎng)白溫系公豬，公豬不同生理階段飼糧營(yíng)養(yǎng)水平依據(jù)中國(guó)《豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 65—2004）。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采集于2019 年6 月至2019年10 月，試驗(yàn)過程主要對(duì)公豬的耳號(hào)、精液采集時(shí)間及采精量、精子密度、精子活力、正常及異常精子數(shù)量等指標(biāo)進(jìn)行記錄。

1.2 試驗(yàn)主要材料

豬精液的質(zhì)量分析采用進(jìn)口的自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)（如圖1），其中進(jìn)口的精液自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)、進(jìn)口的精子計(jì)數(shù)板、移液槍等采購于西班牙某公司；國(guó)產(chǎn)的精子計(jì)數(shù)板則由廣州某公司提供，國(guó)產(chǎn)精子計(jì)數(shù)池的深度設(shè)計(jì)為10 μm。

1.3 試驗(yàn)方法

公豬站采精人員每天上下午各采精1次，具體操作時(shí)間如表1所示。采精完成后，精液檢測(cè)步驟如以下：1）對(duì)原精進(jìn)行稱重，并記錄參數(shù)；2）打開自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)GESIPOR3.0，在頁面中的相應(yīng)位置輸入公豬耳號(hào)，并打開采精檢測(cè)頁面；3）點(diǎn)擊公豬、采精員，并錄入相應(yīng)信息；4）把原精輕輕地?cái)嚢?，使其均質(zhì)，再取100 ul 原精和900 ul 稀釋液在等溫37 ℃下稀釋混合；5）混合均質(zhì)后取3.5 ul 滴到相應(yīng)的精子計(jì)數(shù)板上；6）用10 倍物鏡和10X 光圈檢測(cè)活力、對(duì)屏幕視野進(jìn)行拍照分析，隨機(jī)分析3 個(gè)不同視野，然后再點(diǎn)擊活力、密度和正常形態(tài)等分析，同時(shí)在采精頁面讀取檢測(cè)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2010 進(jìn)行整理篩選，精子數(shù)、精子密度、精子活力等指標(biāo)使用SPSS 19.0 軟件的單因素方差分析LSD 法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果均使用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤的形式表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同精子計(jì)數(shù)板對(duì)長(zhǎng)白公豬精液參數(shù)的影響

由表2 可知，不同的精子計(jì)數(shù)板對(duì)長(zhǎng)白公豬精液的精子密度、精子活力、正常精子比例等參數(shù)沒有產(chǎn)生顯著差異性。進(jìn)口組精子計(jì)數(shù)板測(cè)得的隨機(jī)3 個(gè)視野平均精子數(shù)、精子密度、精子活力、正常精子比例分別為566.06個(gè)、249.56×106/ml、92.65%、71.52%；國(guó)產(chǎn)組則對(duì)應(yīng)測(cè)得為577.02 個(gè)、252.68×106/ml、91.32%、72.65%，以上兩組的同一指標(biāo)相比均差異不顯著。綜合以上，相比進(jìn)口的精子計(jì)數(shù)板，國(guó)產(chǎn)的精子計(jì)數(shù)板在長(zhǎng)白公豬精液的各項(xiàng)參數(shù)間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；國(guó)產(chǎn)的精子計(jì)數(shù)板替代進(jìn)口的精子計(jì)數(shù)板是可行的。

表1 公豬站采精時(shí)間

表2 不同精子計(jì)數(shù)板對(duì)長(zhǎng)白公豬精液參數(shù)的影響

3 討論

精子計(jì)數(shù)板作為精液常規(guī)分析的必備工具已在養(yǎng)豬生產(chǎn)上廣泛使用。不論是傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡分析還是新的自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)分析，精液必須滴入精子計(jì)數(shù)池后才能進(jìn)行分析[2]。而不同廠家配套的精子計(jì)數(shù)池其深度一般不統(tǒng)一，以10 μm和20 μm 深度的計(jì)數(shù)池最為常見。此試驗(yàn)的國(guó)產(chǎn)精子計(jì)數(shù)池深度為10 μm，用以分析精液的精子密度、精子活力、正常精子比例等參數(shù)，探討其代替進(jìn)口的不可重復(fù)使用的精子計(jì)數(shù)板產(chǎn)品的可行性。試驗(yàn)結(jié)果表明，與進(jìn)口的精子計(jì)數(shù)板產(chǎn)品相比，國(guó)產(chǎn)的精子計(jì)數(shù)板產(chǎn)品在長(zhǎng)白公豬精液的各項(xiàng)參數(shù)間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；國(guó)產(chǎn)的精子計(jì)數(shù)板產(chǎn)品可替代進(jìn)口的精子計(jì)數(shù)板產(chǎn)品在養(yǎng)豬生產(chǎn)中應(yīng)用。

此外，國(guó)產(chǎn)計(jì)數(shù)板產(chǎn)品對(duì)于降低使用成本上也有一定優(yōu)勢(shì)。當(dāng)前，精液自動(dòng)分析儀配套的進(jìn)口精子計(jì)數(shù)板產(chǎn)品一般存在價(jià)格高、不可重復(fù)使用等問題，其一般市場(chǎng)售價(jià)為5 ～6 元/腔，25 ～30 元/板；而此試驗(yàn)的國(guó)產(chǎn)計(jì)數(shù)板產(chǎn)品的市場(chǎng)價(jià)格 一 般 在2 ～3 元/腔，10 ～15元/板，且可重復(fù)使用2 ～3 次。因此，使用國(guó)產(chǎn)計(jì)數(shù)板產(chǎn)品更加經(jīng)濟(jì)適用，有利于降低公豬精液的檢測(cè)成本。