凍精制作工藝流程

方焱秋，汪雪燁，顧達(dá)夫

長(zhǎng)春新牧科技有限公司，吉林長(zhǎng)春 130000

1 稀釋液的配制

1.1 自配稀釋液：第一液：蒸餾水100 mL、檸檬酸鈉2.97 g，卵黃10 mL。第二液：取配好的第一液41.75 mL，加入果糖2.5 g，甘油7 mL。配置好的稀釋液，每100 mL加青霉素5～10萬(wàn)U，鏈霉素5～10萬(wàn)U。

1.2 進(jìn)口稀釋液根據(jù)稀釋液說(shuō)明進(jìn)行配制。

2 器械的清洗和消毒

玻璃器皿使用前(或新購(gòu)置的)，用自來(lái)水浸泡洗滌時(shí)先在加有洗滌劑的溫?zé)崛芤褐羞M(jìn)行刷試，然后用流水反復(fù)沖洗3次以上，直到干凈為止，最后用蒸餾水沖洗，直至器皿光亮，無(wú)水滴附著。

將清洗干凈的玻璃器皿放入鼓風(fēng)干燥箱，溫度設(shè)置為160 ℃，干燥箱達(dá)到160 ℃后恒溫2 h，自然冷卻后待用。

檢查精液的載玻片和蓋玻片，用水沖洗干凈后，浸泡于75%酒精后，用柔軟的布擦試干凈備用。

塑料細(xì)管、指拇管、吸頭、紗布袋、膠塞、細(xì)管用冷凍架紫外線消毒30 min后方可使用。

3 采精前的準(zhǔn)備

3.1 各種儀器預(yù)熱調(diào)試，達(dá)到所需溫度和最佳狀態(tài)。

3.2 凡是接觸精液的器械均應(yīng)放在33～35 ℃恒溫箱中，配置好的稀釋液應(yīng)放在32～34 ℃恒溫水浴鍋中備用。

4 采集精液的處理

4.1 外觀檢查

主要是觀察精液有無(wú)異常現(xiàn)象：如血精、膿精、異物等，不正常精液棄掉。

4.2 精液量

分為測(cè)量法和稱量法兩種。

4.2.1 測(cè)量法：集精杯先通過(guò)儀器校對(duì)后，直接讀取毫升刻度數(shù)。

4.2.2 稱量法：通過(guò)稱重確定精液的量，按照精液的比重（1.04）換算成毫升。本方法是對(duì)精液的總量通過(guò)稱重確定，比目測(cè)集精管刻度確定精液的總量更為精確。

4.3 密度測(cè)定

通過(guò)專用窗口將采集的精液傳遞入精液處理室后，使用密度儀來(lái)檢測(cè)精液的密度值。

4.4 鏡檢活力

用移液器取精液中段一小滴精液置于載玻片上，加上蓋玻片，將載玻片放置在38 ℃恒溫裝置的相差顯微鏡上，通過(guò)電視熒光屏放大500倍的圖像來(lái)判定活力，鏡檢合格者方可進(jìn)行下一步的稀釋。

4.5 記錄

及時(shí)記錄牛號(hào)、采精量、精子密度、精子活力、可制作細(xì)管數(shù)和所加稀釋量等有關(guān)數(shù)據(jù)。

5 稀釋

根據(jù)原精量、密度、活力、預(yù)測(cè)凍后活力等，確定稀釋液加入量。稀釋方法：用量筒先取精液的三倍稀釋液，等溫、沿集精杯壁傾斜，緩慢沖洗至少3次，至稀釋瓶中，降溫20 min后，再加入剩余稀釋液量，緩慢輕輕搖勻后，送至封裝機(jī)封裝。

6 封裝

將稀釋好的精液放在20 ℃實(shí)驗(yàn)室操作臺(tái)上用噴墨打印一體機(jī)進(jìn)行細(xì)管分裝操作。該設(shè)備自動(dòng)化程度高，并且對(duì)細(xì)管精液的衛(wèi)生質(zhì)量保證極為有利。

7 平衡

將分裝好的細(xì)管精液放置于不透光的塑料盒內(nèi)，然后把塑料盒放入4 ℃低溫平衡柜中平衡3～4 h。并在平衡柜邊沿蓋上毛巾，避免強(qiáng)光進(jìn)入低溫平衡柜內(nèi)。

8 精液冷凍

8.1 上架：將平衡后的細(xì)管精液，上架碼放，同時(shí)進(jìn)行計(jì)數(shù)。碼放時(shí)注意細(xì)管擺放的方向一致，棉塞封口端靠近操作者，便于裝入指拇管。

8.2 冷凍：將冷凍機(jī)調(diào)至-120 ℃，將風(fēng)扇轉(zhuǎn)速調(diào)至70，待冷凍機(jī)溫度降至-120 ℃時(shí)，持續(xù)5 min，風(fēng)扇轉(zhuǎn)速調(diào)至30后，把以排滿待凍細(xì)管的架子，迅速放入冷凍機(jī)內(nèi)蓋嚴(yán)蓋子，將風(fēng)扇轉(zhuǎn)速調(diào)至70，溫度達(dá)到-120 ℃時(shí)，冷凍8 min。

9 解凍

把水浴鍋加熱至38 ℃穩(wěn)定后，將冷凍后的細(xì)管精液迅速浸泡入38 ℃水中并晃動(dòng)，待完全解凍后立即取出，用紗布或吸水紙擦干水珠，進(jìn)行顯微鏡下檢測(cè)，活力判定在35%以上保留。

10 分裝

按包裝要求，每袋100支，填寫紗布袋標(biāo)簽信息，快速包裝，包裝好的細(xì)管精液放入液氮罐中儲(chǔ)存，設(shè)專人保管，每周定時(shí)加氮。

11 整理計(jì)錄

生產(chǎn)結(jié)束后，按品種、牛號(hào)、生產(chǎn)量整理好原始記錄，填寫生產(chǎn)記錄上報(bào)，原始記錄存檔。

12 出庫(kù)

將一周生產(chǎn)的凍精，通過(guò)質(zhì)量、數(shù)量檢查，與銷售人員通過(guò)核對(duì)后，辦理交接手續(xù)。

（注：生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程按GB 4143-2008 NY/T 1234-2006 GB/ T 30396-2013執(zhí)行）