牡丹江地區(qū)芍藥根中主要活性成分的研究與探討

李鳳玉，曹陽(yáng)，韓行舟

(黑龍江農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)職業(yè)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157041)

芍藥(PaeonialactifloraPall.)隸屬于芍藥科(Paeoniaceae)芍藥屬(Paeonia)，多年生草本，株高80～120 cm。根系肥大，呈圓柱形或紡錘形。莖直立，葉互生?；ü诖?，單生于花莖及分枝頂端，單支花莖有1～5朵花。蓇葖果1～10數(shù)枚或無(wú)，在牡丹江地區(qū)栽培芍藥花期6月中旬，8月中旬種子成熟。干燥的芍藥根呈圓柱形，根的粗細(xì)均勻，并且平直。表面棕色，去皮根粉白色，平坦，或有明顯的縱皺及須根痕，質(zhì)堅(jiān)實(shí)而重，不易折斷。切斷面灰白色或微帶棕色，木部放射線呈菊花心狀，味微苦。

我國(guó)栽培芍藥的歷史悠久，并具有豐富的品種資源，不僅可以藥用，還可觀賞，被廣為栽培。在以往藥用芍藥的研究中，主要是對(duì)芍藥的生物學(xué)藥用價(jià)值和藥理成分進(jìn)行研究。按著《中藥現(xiàn)代化發(fā)展綱要》的要求，芍藥這種藥材的需求也將日益增大，芍藥的大面積栽培將成為發(fā)展的方向，并且將觀賞和藥用結(jié)合起來(lái)發(fā)展栽培，為中藥材的生產(chǎn)拓寬了發(fā)展前景和資源途徑。

本文以種子繁殖不同齡實(shí)生苗芍藥根為試驗(yàn)材料，對(duì)其根的幾種代謝產(chǎn)物(芍藥苷、總黃酮、三萜類(lèi)、多酚、總糖、蛋白質(zhì)、脂肪、及灰分)的含量了進(jìn)行測(cè)定，以期為芍藥這種中藥材的開(kāi)發(fā)與綜合利用提供新思路。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

采于黑龍江省牡丹江市西安區(qū)農(nóng)經(jīng)學(xué)院芍藥園，該芍藥園位于黑龍江省牡丹江市西安區(qū)溫春鎮(zhèn)，溫春鎮(zhèn)屬中溫帶大陸性季風(fēng)氣候，四季分明，年平均氣溫6.1 ℃，年活動(dòng)積溫2500～2700 ℃，年均降水量579.7 mm，年日照時(shí)數(shù)2339.8 h，年平均相對(duì)濕度64%，土壤類(lèi)型為暗棕壤。

2017年10月隨機(jī)采挖芍藥實(shí)生苗根2年生100株，3年生、5年生、7年生、10年生的各10株，鮮根去泥沙洗凈去芽頭裝網(wǎng)袋，掛于通風(fēng)陰涼處，自然風(fēng)干。切成0.5 cm的片，用四分法取樣200 g，用分析研磨機(jī)(IKAM20)全部粉碎，過(guò)100目篩，裝于樣品瓶中；取7年生的樣本20株，從粗到細(xì)至須根分成6個(gè)級(jí)別，每個(gè)級(jí)別取200 g粉碎，過(guò)100目篩，裝于樣品瓶中；處理好的樣本放置冰箱保鮮室中備用。

1.2 測(cè)定方法

1.2.1 芍藥苷含量的測(cè)定——高效液相色譜法(Agilent1260)。稱(chēng)取過(guò)100目篩的芍藥粉0.1 g(精確至0.0001 g)，置于25 mL容量瓶中，加50%乙醇20 mL，浸泡2 h，超聲處理30 min，超聲溫度為26 ℃。取出冷卻，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，取上清液用HPLC 測(cè)定，色譜條件：Agilent TC-C18色譜柱(4. 6 mm×150 mm，5 μm )，流動(dòng)相乙睛-0.1%磷酸溶液(12∶88)，檢測(cè)波長(zhǎng)235 nm，流速1. 0 mL/ min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL，得峰面積值，將其代入線性回歸方程計(jì)算出芍藥苷的濃度。

1.2.2 總黃酮含量的測(cè)定——紫外分光光度法(GARY-100)。稱(chēng)取過(guò)100目篩的芍藥粉0.1 g(精確至0.0001 g)，置于150 mL具塞三角瓶中，加入甲醇(7+3)20～30 mL，將三角瓶置于(65±2)℃的恒溫水浴振蕩器中在(160±10)r/min的振蕩頻率下振搖2 h，趁熱過(guò)濾，用甲醇定容于50 mL容量瓶中，準(zhǔn)確吸取1.0 mL定容液置于10 mL容量瓶中，分別加入氯化鋁、乙酸，用甲醇定容，搖勻，室溫下放置30 min。在4000 r/min速度下離心10 min，以試劑空白做參比，用紫外分光光度計(jì)于420 nm處測(cè)定吸光度值，將其代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算出總黃酮的濃度。

1.2.3 三萜類(lèi)含量的測(cè)定——紫外分光光度法(GARY-100)。稱(chēng)取過(guò)100目篩的芍藥粉0.1 g(精確至0.0001 g)，置于150 mL具塞三角瓶中，加入30 mL氯仿。60 ℃(±1 ℃)水浴回流2 h，常壓過(guò)濾，濾渣加入30 mL氯仿，再回流1 h，常壓過(guò)濾，合并濾液，常壓水浴蒸干，加入無(wú)水乙醇40 mL，70 ℃水浴加熱，并搖動(dòng)至完全溶解冷卻到室溫后用無(wú)水乙醇定容到50 mL，得待測(cè)液。吸取待測(cè)液1.00 mL于25 mL具塞比色管中，常壓水浴蒸干溶劑，加入5%香草醛-冰乙酸0.2 mL和高氯酸0.80 mL，搖勻。70 ℃水浴加熱15 min，取出，冰水冷卻5 min ，用自來(lái)水浴調(diào)到室溫。加冰乙酸5.00 mL稀釋?zhuān)瑩u勻，以試劑空白做參比，在30 min內(nèi)用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在545 nm處測(cè)吸光度值，通過(guò)線性回歸方程，算得樣液中三萜類(lèi)物質(zhì)的質(zhì)量。

1.2.4 多酚類(lèi)含量的測(cè)定——紫外分光光度法(GARY-100)。稱(chēng)取過(guò)100目篩的芍藥粉0.02 g(精確至0.0001 g)，置100 mL棕色容量瓶中，加入水適量，超聲使其完全溶解，冷卻至室溫，以水定容至刻度，搖勻。精密吸取 0.2 mL 待測(cè)溶液，置10 mL 棕色容量瓶中，各加入 3～4 mL 水，搖勻，加入 0.5 mL 福林酚試液，搖勻；在 1～8 min內(nèi)，各加入 1.5 mL Na2CO3溶液，搖勻。用水定容至刻度，搖勻，將各容量瓶置于 30 ℃水浴中保持 2 h。以試劑空白做參比，于 760 nm(10 min內(nèi))處測(cè)定吸光度，根據(jù)沒(méi)食子酸的線性回歸方程，計(jì)算出樣品溶液中的多酚濃度。

1.2.5 芍藥根營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定。取過(guò)100目篩的芍藥粉用全自動(dòng)水分灰分分析儀(Prep ASH229)測(cè)定水分、灰分的含量，用全自動(dòng)凱式定氮儀(FOSS-8400)測(cè)定蛋白質(zhì)的含量，用全自動(dòng)索氏萃取儀(SOXTEC 2050)測(cè)定脂肪的含量，樣品經(jīng)回流提取，用紫外分光光度計(jì)(GARY-100)測(cè)定總糖的含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)下表。注：計(jì)算值是干重(風(fēng)干重-風(fēng)干重×含水量%)。

2 結(jié)果與分析

2.1 芍藥根中幾種次生代謝產(chǎn)物的含量

對(duì)2年生、3年生、5年生、7年生、10年生芍藥根樣本芍藥苷、總黃酮、三萜、多酚含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1：

表1 不同株齡芍藥根中次生代謝產(chǎn)物的含量

從表1中可見(jiàn)，栽培2年、3年、5年、7年、10年生實(shí)生苗芍藥根中芍藥苷含量7年>5年>3年>2年，栽培前7年芍藥苷的含量隨著年份的增長(zhǎng)而增長(zhǎng)，栽培7年后芍藥苷的含量并沒(méi)有隨著年份的增長(zhǎng)而增長(zhǎng)。栽培2年、3年、5年、7年、10年生實(shí)生苗芍藥根中總黃酮、三萜類(lèi)、多酚類(lèi)含量變化不大，栽培5年后，總黃酮的含量并沒(méi)有隨著年份的增長(zhǎng)而增長(zhǎng)，栽培7年后，多酚的含量并沒(méi)有隨著年份的增長(zhǎng)而增長(zhǎng)。

表2 同齡芍藥不同根徑次生代謝產(chǎn)物的含量

同齡的芍藥根芍藥苷、總黃酮、三萜類(lèi)含量隨著根莖變細(xì)其含量逐漸增多。同齡的芍藥根多酚類(lèi)含量隨著根莖變細(xì)多酚類(lèi)含量是逐漸減少的，但是根須中多酚類(lèi)含量相對(duì)高一些。芍藥苷具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎、抗驚厥作用，對(duì)免疫系統(tǒng)也有一定作用，是芍藥作為藥材發(fā)揮其藥理作用的必要成分，其含量應(yīng)該多者為優(yōu)。

2.2 芍藥根中幾種初級(jí)代謝產(chǎn)物的含量

對(duì)2年生、3年生、5年生、7年生、10年生芍藥根樣本進(jìn)行灰分、蛋白質(zhì)、脂肪、總糖進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3，表4。

表3 不同株齡芍藥根中初級(jí)代謝產(chǎn)物的含量 g·100 g-1干重

表4 同齡芍藥不同根徑初級(jí)代謝產(chǎn)物的含量 g·100 g-1干重

從表3、表4中可看出：芍藥根的初級(jí)代謝產(chǎn)物中總糖含量較高，總糖是藥材生長(zhǎng)中積累的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之一，可以反映藥材的生長(zhǎng)情況，隨著栽培年限的增長(zhǎng)芍藥根中總糖、脂肪、灰分的含量隨著栽培年限的增長(zhǎng)而逐漸增高，芍藥根中蛋白質(zhì)的含量隨著栽培年限的增長(zhǎng)差別不大；同齡的芍藥根總糖、脂肪、蛋白質(zhì)、灰分4種營(yíng)養(yǎng)成分的含量隨著根莖變細(xì)總的趨勢(shì)是逐漸減少的。

3 結(jié)論(討論)

本研究通過(guò)對(duì)牡丹江地區(qū)2年生、3年生、5年生、7年生、10年生實(shí)生苗芍藥根樣本的根內(nèi)幾種次生代謝產(chǎn)物及初級(jí)代謝產(chǎn)物的含量進(jìn)行測(cè)定，得出不同苗齡栽培芍藥根中芍藥苷、總黃酮、三萜、多酚含量變化不大。同齡的芍藥根芍藥苷、黃酮、三萜含量隨著根莖變細(xì)其含量逐漸增高，而多酚類(lèi)含量隨著根莖變細(xì)含量是逐漸減少的，但是根須中多酚類(lèi)含量相對(duì)高一些。

芍藥根中初級(jí)代謝產(chǎn)物中總糖含量較高，芍藥根中總糖、脂肪、灰分的含量隨著栽培年限的增長(zhǎng)而逐漸增高；根中蛋白質(zhì)的含量在不同苗齡間差別不大。同齡的芍藥根總糖、脂肪、蛋白質(zhì)、灰分4種營(yíng)養(yǎng)成分的含量隨著根莖變細(xì)總的趨勢(shì)是逐漸減少的。

芍藥品種甚多，栽培種與野生種性狀差異明顯，不同種與品種間的主要活性成份可能存在差異，有待進(jìn)一步探討。