桂枝湯加減對(duì)制馬錢(qián)子毒性影響的實(shí)驗(yàn)研究

王淑靜 婁玉鈐

【摘 要】目的：研究制馬錢(qián)子分別配伍不同劑量的白芍桂枝湯、赤芍桂枝湯、赤白芍桂枝湯后對(duì)其毒性的影響，為制馬錢(qián)子與桂枝湯的配伍提供藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)，更為臨床安全有效地應(yīng)用制馬錢(qián)子提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：通過(guò)急性毒性實(shí)驗(yàn)，用加權(quán)概率單位法（Bliss氏法）計(jì)算出制馬錢(qián)子及其與不同比例的白芍桂枝湯、赤芍桂枝湯、赤白芍桂枝湯配伍后的半數(shù)致死量（LD50），并計(jì)算出解毒率。

結(jié)果：制馬錢(qián)子的LD50為258.00 mg·kg-1;制馬錢(qián)子配伍白芍桂枝湯的高、低2個(gè)劑量組的LD50分別為1642.59 mg·kg-1、8218.21 mg·kg-1;制馬錢(qián)子配伍赤芍桂枝湯的高、中、低3個(gè)劑量組的LD50分別為2064.06 mg·kg-1、3485.07 mg·kg-1、9335.06 mg·kg-1;制馬錢(qián)子配伍赤白芍桂枝湯的高、中、低3個(gè)劑量組的LD50分別為1792.80 mg·kg-1、2972.45 mg·kg-1、8228.82 mg·kg-1。結(jié)論：制馬錢(qián)子與不同劑量組的桂枝湯配伍，其減毒率不同，為臨床安全有效地運(yùn)用制馬錢(qián)子提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 制馬錢(qián)子;桂枝湯加減;配伍;毒性;小鼠;實(shí)驗(yàn)研究

《本草綱目》記載馬錢(qián)子“味苦，寒，無(wú)毒。主治傷寒熱病，咽喉痹痛，消痞塊。并含之咽汁，或磨水噙咽?！睂?duì)于其無(wú)毒，后世醫(yī)家產(chǎn)生了質(zhì)疑，《本草匯言》認(rèn)為其“有毒”，《本草原始》載其“味苦、寒，有大毒”。2015版《中華人民共和國(guó)藥典》認(rèn)為馬錢(qián)子味苦、微溫，有大毒，歸肝脾經(jīng);可通絡(luò)止痛，散結(jié)消腫;臨床用于跌打損傷，骨折腫痛，風(fēng)濕頑痹，麻木癱瘓，癰疽瘡毒，咽喉腫痛。炮制后入丸散，每服0.3～0.6 g。全國(guó)名老中醫(yī)婁多峰臨床善于運(yùn)用制馬錢(qián)子治療風(fēng)濕病，并發(fā)現(xiàn)配伍桂枝湯能提高臨床療效并降低不良反應(yīng)[1-3]。基于大量臨床用藥經(jīng)驗(yàn)，本研究選擇桂枝湯加減配伍制馬錢(qián)子，觀察配伍前后對(duì)制馬錢(qián)子毒性的影響，為臨床更加安全有效地使用制馬錢(qián)子提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)[4-5]。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

1.1.1 制馬錢(qián)子粉 生產(chǎn)批號(hào)20120125，按照2015版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定的砂燙法將馬錢(qián)子粉碎10 min，過(guò)200目篩，炮制成制馬錢(qián)子，用高效液相色譜儀測(cè)得士的寧含量為14.43 mg·g-1，馬錢(qián)子堿含量為4.79 mg·g-1。

1.1.2 白芍桂枝湯浸膏粉末 生產(chǎn)批號(hào)201201GZ，藥物組成：桂枝9 g、白芍9 g、甘草6 g、生姜9 g、大棗3枚（9 g）。制作方法：將藥物按比例放入煎藥機(jī)中，加10倍量水，煎煮1 h，濃縮后干燥粉碎即得，后過(guò)200目篩。1 g干浸膏粉相當(dāng)于原生藥6.0 g。

1.1.3 赤芍桂枝湯浸膏粉末 生產(chǎn)批號(hào)201202GZ，藥物組成：桂枝9 g、赤芍9 g、甘草6 g、生姜9 g、大棗3枚（9 g）。制作方法同1.1.2。

1 g干浸膏粉相當(dāng)于原生藥5.9 g。

1.1.4 赤白芍桂枝湯浸膏粉末 生產(chǎn)批號(hào)201203GZ，藥物組成：桂枝9 g、赤芍4.5 g、白芍4.5 g、甘草6 g、生姜9 g、大棗3枚（9 g）。制作方法同1.1.2。1 g干浸膏粉相當(dāng)于原生藥6.4 g。

以上藥物飲片由河南風(fēng)濕病醫(yī)院統(tǒng)一購(gòu)買(mǎi)于河南省藥材公司，由河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院劉雅敏統(tǒng)一制備，密閉保存使用。另外考慮樣品制備損耗等因素，3個(gè)處方均按1 g干浸膏相當(dāng)于原生藥6 g計(jì)算。本實(shí)驗(yàn)制馬錢(qián)子配伍桂枝湯高、中、低劑量中，馬錢(qián)子粉的含量分別為13.41%、7.19%、3.72%。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（豫）2010-0002。統(tǒng)一飼養(yǎng)于河南省藥檢所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，輻照條形飼料，單籠喂養(yǎng)，自由飲水，每籠5只。實(shí)驗(yàn)室溫度（23.0±2.0）℃，濕度50%～65%。

2 數(shù)據(jù)處理

所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用加權(quán)概率單位法（Bliss氏法），首先通過(guò)NDST軟件計(jì)算各組半數(shù)致死量（LD50），其次分別按照減毒率公式計(jì)算出各自的減毒率，最后進(jìn)行比較分析。

3 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果

3.1 單純制馬錢(qián)子LD50實(shí)驗(yàn) 經(jīng)過(guò)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)，得出制馬錢(qián)子Dm（最小100%死亡量）為450 mg·kg-1，Dn（最大0不死量）為200 mg·kg-1，然后在Dm和Dn范圍內(nèi)選擇6個(gè)劑量組，組間劑量比為0.85。取雌雄各半、體質(zhì)量18～22 g的昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只。實(shí)驗(yàn)前禁食12 h以上，自由飲水，將制馬錢(qián)子粉用蒸餾水按質(zhì)量等比級(jí)數(shù)依次配制成6個(gè)劑量的混懸液，按每10克小鼠體質(zhì)量給予0.3 mL藥液量灌胃給藥。

經(jīng)過(guò)多次預(yù)實(shí)驗(yàn)及文獻(xiàn)報(bào)道可知馬錢(qián)子的中毒特點(diǎn)主要表現(xiàn)為煩躁、呼吸增強(qiáng)、心跳加速、四肢抽搐，直到死亡[6-8]。達(dá)到中毒劑量后小鼠一般在10 min內(nèi)死亡，死亡狀態(tài)為四肢及尾巴強(qiáng)直性僵直、抽搐。灌胃給藥后30 min內(nèi)存活的小鼠，基本1 h內(nèi)逐漸恢復(fù)正常。因此，實(shí)驗(yàn)采用一次給藥的方式，給藥后將存活的小鼠以給藥前的飼養(yǎng)方式飼養(yǎng)，連續(xù)觀察7 d，每天詳細(xì)記錄小鼠中毒癥狀、死亡數(shù)及死亡狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清點(diǎn)各組死亡數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)見(jiàn)表1，運(yùn)用Bliss氏法計(jì)算后得知本實(shí)驗(yàn)所用制馬錢(qián)子LD50為258 mg·kg-1，95%可信限為236.44～277.65 mg·kg-1。

預(yù)算知制馬錢(qián)子與白芍桂枝湯、赤芍桂枝湯、赤白芍桂枝湯配伍后的3個(gè)混懸液組，即13.41%馬錢(qián)子的Dm為2545 mg·kg-1，Dn為1271 mg·kg-1;7.19%馬錢(qián)子的Dm為5100 mg·kg-1，Dn為2781 mg·kg-1;3.72%馬錢(qián)子的Dm為14 258 mg·kg-1，Dn為5730 mg·kg-1。取昆明種小鼠540只，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，隨機(jī)分為9組，即3種混懸液的3個(gè)劑量組（13.41%馬錢(qián)子、7.19%馬錢(qián)子、3.72%馬錢(qián)子），每組60只。在每組的Dm和Dn范圍內(nèi)按各自的組間比選取6個(gè)劑量組，每個(gè)劑量組隨機(jī)分10只小鼠。在禁食不禁水12 h后，將制馬錢(qián)子粉分別與3個(gè)桂枝湯浸膏粉用蒸餾水按等比級(jí)數(shù)依次配制成混懸液，灌胃量為每10克小鼠體質(zhì)量給藥0.3 mL。仍然采用一次給藥后連續(xù)觀察7 d的實(shí)驗(yàn)方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清點(diǎn)各組死亡數(shù)。運(yùn)用Bliss氏法計(jì)算出各組LD50及95%可信限范圍，然后計(jì)算出減毒率，減毒率（%）=（混合物L(fēng)D50-馬錢(qián)子LD50）/馬錢(qián)子LD50。（注：公式的混合物中馬錢(qián)子與純馬錢(qián)子換算為同一比例）。結(jié)果見(jiàn)表2、表3、表4。

4 討 論

馬錢(qián)子具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛效果，臨床上用于治療風(fēng)濕頑痹效果顯著。然其藥性猛烈，走竄力強(qiáng)，大大限制了臨床使用范圍。桂枝湯是《傷寒論》群方之首，功能解肌發(fā)表，調(diào)和營(yíng)衛(wèi)。在臨床上使用桂枝湯配伍馬錢(qián)子抗炎鎮(zhèn)痛效果顯著，因此桂枝湯配伍馬錢(qián)子對(duì)馬錢(qián)子應(yīng)用于臨床具有很大的指導(dǎo)意義。桂枝湯中選擇白芍或赤芍，學(xué)者各有見(jiàn)地[9-11]。赤芍、白芍始分于梁代，多數(shù)醫(yī)家認(rèn)為，“白補(bǔ)而赤瀉，白收而赤散”[12]。白芍味甘，酸，微寒，歸肝、脾、心經(jīng)，功效補(bǔ)血，平肝陽(yáng)，緩急止血，止汗。赤芍味多甘，寒，歸心、肝經(jīng)，功效清熱涼血，解毒，透疹。李曉麗等[13]研究表明，馬錢(qián)子赤芍配伍組與馬錢(qián)子單煎組比較，馬錢(qián)子堿和士的寧含量均明顯降低。胡錫琴等[14]研究表明，配伍赤芍的藥量越大，越可以減輕馬錢(qián)子的毒性，并能增強(qiáng)其鎮(zhèn)痛作用，為赤芍與馬錢(qián)子配伍提供很好的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。吳鵬等[15]發(fā)現(xiàn)，赤芍中赤芍總苷能顯著增加小鼠耳廓毛細(xì)血管開(kāi)放量、細(xì)動(dòng)脈和細(xì)靜脈血管口徑，其中7.5 mg·kg-1、25 mg·kg-1作用比較明顯。

通過(guò)本實(shí)驗(yàn)可知，制馬錢(qián)子配伍3種桂枝湯后，制馬錢(qián)子所占混懸液13.41%、7.19%、3.72%的3個(gè)比例中，以3.72%時(shí)3種桂枝湯均對(duì)其有明顯的減毒作用;縱向分析，不同的桂枝湯配伍制馬錢(qián)子后，赤芍桂枝湯減毒效果最佳。桂枝湯配伍馬錢(qián)子經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明既能減輕制馬錢(qián)子毒性，又能增加其藥效作用，因此值得進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)僅從減毒效果觀察桂枝湯配伍馬錢(qián)子后的減毒率，關(guān)于更深一步的作用機(jī)制，還需對(duì)桂枝湯與制馬錢(qián)子配伍的毒效動(dòng)力學(xué)及分子細(xì)胞影響進(jìn)行更深層次的研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 李朝陽(yáng)，婁玉鈐，苗根旺，等.配伍肉桂、桂枝對(duì)馬錢(qián)子毒性影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2012，1（6）：28-30.

[2] 苗根旺，婁玉鈐，李朝陽(yáng)，等.配伍生地黃、熟地黃對(duì)制馬錢(qián)子毒性影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2012，1（5）：19-22.

[3] 婁玉鈐，成廣超，李朝陽(yáng)，等.配伍甘草對(duì)制馬錢(qián)子毒性影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2012，1（2）：40-42，50.

[4] 王淑靜，婁玉鈐.配伍對(duì)馬錢(qián)子的減毒增效研究概述[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2014，3（2）：78-80.

[5] 王淑靜.桂枝湯對(duì)馬錢(qián)子減毒及抗炎鎮(zhèn)痛作用影響的實(shí)驗(yàn)研究[D].鄭州：河南中醫(yī)學(xué)院，2015.

[6] 李朝陽(yáng)，邱海彥，婁玉鈐，等.配伍肉桂、桂枝對(duì)制馬錢(qián)子抗炎鎮(zhèn)痛影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2013，2（5）：17-20.

[7] 苗根旺，婁玉鈐，李朝陽(yáng)，等.配伍生地黃、熟地黃對(duì)制馬錢(qián)子抗炎、鎮(zhèn)痛影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2013，2（3）：21-24.

[8] 李朝陽(yáng).馬錢(qián)子在治療風(fēng)濕病中的配伍減毒與增效研究[D].鄭州：河南中醫(yī)學(xué)院，2012.

[9] 王秋玲.赤芍與白芍質(zhì)量差異及其形成機(jī)制研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[10] 吳金雄.白芍、赤芍化學(xué)成分與活血功效的比較研究[D].廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[11] 王巧.芍藥質(zhì)量控制方法與白芍總苷藥物動(dòng)力學(xué)研究[D].沈陽(yáng)：沈陽(yáng)藥科大學(xué)，2005.

[12] 裴艷霞.略談赤芍白芍的異同點(diǎn)[J].光明中醫(yī)，2011，26（9）：1934.

[13] 李曉麗，宋振華，秦林.馬錢(qián)子配伍赤芍前后毒性及鎮(zhèn)痛抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1998，18（S1）：286-289.

[14] 胡錫琴，喬雷，林飛，等.配伍赤芍對(duì)馬錢(qián)子LD50和鎮(zhèn)痛作用的影響[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，32（2）：57-58.

[15] 吳鵬，魏盼，李戀曲，等.桂枝湯通過(guò)抑制淋巴細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化抑制變應(yīng)性接觸性皮炎[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2019，35（10）：1461-1466.

收稿日期：2020-08-20;修回日期：2020-09-25