抗黃萎病番茄種質(zhì)材料的篩選

王明耀 王學(xué)穎 鹿秀云 張桂海 張釗 黃志輝 田慶武 王長(zhǎng)浩 馬德明

摘要?通過對(duì)117份番茄種質(zhì)材料（品種或品系）斷根后分別接種1×107番茄黃萎病菌、1×107茄子黃萎病菌、清水（對(duì)照），并進(jìn)行田間檢測(cè)，篩選出高抗黃萎病的番茄種質(zhì)材料15份、感黃萎病的種質(zhì)材料2份，經(jīng)對(duì)17份材料29個(gè)樣本的DNA分子檢測(cè)，結(jié)果與田間抗性表現(xiàn)的吻合度為75.86%。該研究為篩選適合茄子生產(chǎn)用抗黃萎病砧木（番茄）育種提供抗源材料，并為實(shí)驗(yàn)室番茄抗性DNA分子檢測(cè)提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞?番茄種質(zhì)，抗黃萎病篩選，DNA抗性分子檢測(cè)

中圖分類號(hào)?S641.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼?A

文章編號(hào)?0517-6611（2020）06-0048-02

Abstract?117 tomato germplasm materials （varieties or strains） were inoculated with 1×107 tomato verticillium，wilt bacteria 1×107 eggplant verticillium ，wilt bacteria water （control） and field test， respectively，15 tomato germplasm materials with high resistance to verticillium wilt and 2 tomato germplasm materials with high resistance to verticillium wilt were selected. Through the DNA molecular detection of 29 samples of 17 materials， the result and the resistance performance in the field were 75.86%.The study provides antisource materials for screening rootstock breeding suitable for eggplant production，and theoretical basis for laboratory tomato resistant DNA molecular detection.

Key words?Tomato germplasm，Resistance to verticillium wilt screening，DNA resistance molecular detection

茄子是我國(guó)主要蔬菜作物，栽培面積居世界前列[1]。生產(chǎn)中，因茄子抗黃萎病種質(zhì)資源匱乏[2]和重茬、連作，茄子黃萎病發(fā)生普遍，一般減產(chǎn)20%～30%，危害嚴(yán)重的達(dá)60%[3]。茄子黃萎病屬土傳病害，其病菌在土壤中通常存活4～5年，一般常規(guī)植保方法很難根治，選用抗病品種能有效防治茄子黃萎病[4]。采用優(yōu)良的抗病砧木嫁接茄子對(duì)黃萎病的防治效果顯著[5]。

番茄與茄子同科異屬，其抗黃萎病種質(zhì)材料較多。我國(guó)在20世紀(jì)90年代以來(lái)陸續(xù)有以番茄品種作砧木與茄子嫁接進(jìn)行栽培且有效防治茄子黃萎病、增加茄子產(chǎn)能的報(bào)道。目前，國(guó)內(nèi)尚無(wú)茄子專用番茄抗黃萎病砧木育成的報(bào)道，菜農(nóng)用于茄子嫁接砧木用的番茄多為自行留種或相互交換而來(lái)，存在混雜嚴(yán)重、種源和抗性不穩(wěn)的難題，制約茄子產(chǎn)業(yè)發(fā)展[6]。為此，廊坊市農(nóng)林科學(xué)院立項(xiàng)番茄屬茄子抗病砧木種質(zhì)資源創(chuàng)新課題，培育適合茄子嫁接用抗黃萎病的番茄品種，2018年對(duì)117份番茄種質(zhì)材料進(jìn)行黃萎病抗性田間鑒定，并經(jīng)實(shí)驗(yàn)室DNA分子檢測(cè)，從中篩選出15份符合育種要求的種質(zhì)材料，旨在為選育茄子嫁接用番茄抗黃萎病砧木品種提供了抗源材料。

1?材料與方法

1.1?材料?番茄品種8個(gè)：中研紅2號(hào)、東風(fēng)一號(hào)、白果強(qiáng)豐、銀劍312、迪奧、銀魅、科砧1號(hào)、科砧2號(hào)，番茄品系109個(gè)。

病原菌：茄子黃萎病病原菌，由北京市農(nóng)林科學(xué)院惠贈(zèng)，番茄黃萎病病原菌ENAUTVD-1，由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)贈(zèng)予。

1.2?番茄秧苗培育

在日光溫室中，采用50孔塑料穴盤填裝由草炭和蛭石混配的無(wú)土育苗基質(zhì)育苗。2018年3月8日播種，4月9日育成有3片真葉的健壯秧苗。

1.3?病原菌分生孢子懸浮液制備

在超凈工作臺(tái)上，將茄子黃萎病病原菌和番茄黃萎病病原菌ENAUTVD-1分別接種在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）平板上進(jìn)行活化，25 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，挑取菌落邊緣的新鮮菌絲塊（直徑5 mm）4～5塊分別轉(zhuǎn)接于馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液（PDB）中，25 ℃、180 r/min 條件下恒溫振蕩培養(yǎng)5 d，培養(yǎng)液用2層滅菌紗布濾去菌絲得到分生孢子懸浮液[7]，在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板檢查濾液中分生孢子數(shù)量，并用滅菌水將其濃度調(diào)整為1.0×107孢子/mL，備用。

1.4?病原菌人工接種

采用斷根法[8]接種茄子黃萎病病原菌和番茄黃萎病病原菌。試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)處理，同一個(gè)番茄種質(zhì)材料秧苗分成數(shù)量相等的3份，每份50棵秧苗，其中一份接種茄子黃萎病病原菌分生孢子懸浮液，一份接種番茄黃萎病病原菌分生孢子懸浮液，另一份接種等量清水。接種時(shí)，先將長(zhǎng)滿番茄秧苗根系的苗坨逐棵從50孔穴盤中整體取出，隨即用鋒利的剪刀在距離苗坨底部1/3處橫向?qū)⒎迅岛兔幺缫徊⒓舻?，將上?/3苗坨連同秧苗一起栽到事先已經(jīng)填充且壓實(shí)1.5 cm厚無(wú)土育苗基質(zhì)的50孔穴盤中，之后用注射器每穴加注10 mL的1.0×107/mL病原菌分生孢子懸浮液或清水。

1.5?番茄苗栽植培養(yǎng)

接種后放置24 h，使接種番茄秧苗的根系和苗坨充分吸收加注的孢子懸浮液，之后取出秧苗和苗坨整體定植在日光溫室內(nèi)的普通土壤中。在日光溫室中栽植，每份番茄種質(zhì)材料設(shè)置為一個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)栽植3行，每個(gè)處理栽種1行，每行50株，平均行距0.7 m、株距0.1 m。其中，1行栽植接種番茄黃萎病菌的秧苗，1行栽植接種茄子黃萎病菌的秧苗，1行栽植清水處理的秧苗（對(duì)照）。

1.6?番茄黃萎病調(diào)查方法與抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

自秧苗定植后第7天開始，采用6級(jí)分級(jí)法每7 d調(diào)查一次番茄黃萎病發(fā)病情況，計(jì)算病情指數(shù)，按照病情指數(shù)劃分番茄對(duì)黃萎病的抗病性。番茄對(duì)黃萎病的抗病性劃分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

番茄黃萎病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)，無(wú)病癥，1級(jí)，發(fā)病株有≤10%的葉子發(fā)病，病葉現(xiàn)淡黃色病斑，2級(jí)，病株有11%～25%的病葉，發(fā)病葉顯現(xiàn)淡黃色病斑，3級(jí)，病株上病葉達(dá)26%～50%，病斑淡黃色和黃褐色，4級(jí)，病株有50%以上的病葉，現(xiàn)淡黃色和黃褐色病斑，5級(jí)，病株葉片全部染病，植株萎蔫或死亡[9]。

病情指數(shù)=100×Σ（病級(jí)×該病級(jí)株數(shù)）/（最高級(jí)值×總株數(shù)）

1.7?番茄植株黃萎病抗性檢測(cè)

2018年8月10日播種當(dāng)年篩選的部分優(yōu)異番茄種質(zhì)材料41份，育成健壯秧苗，在秧苗達(dá)3片真葉時(shí)采用上述接種方法接種番茄黃萎病病原菌菌ENAUTVD-1分生孢子懸浮液，當(dāng)植株達(dá)3穗果膨大期，從其中的17份番茄種質(zhì)材料中隨機(jī)抽取29株，每株取嫩枝1份做樣本分別標(biāo)號(hào)后送河北科技大學(xué)進(jìn)行番茄黃萎病抗性檢測(cè)。

2?結(jié)果與分析

2.1?番茄品種（品系）對(duì)2種病菌引發(fā)的黃萎病的抗性評(píng)價(jià)

通過對(duì)117份栽植在日光溫室中分別接種了茄子黃萎病菌、番茄黃萎病菌2種致病菌的番茄種質(zhì)材料的田間調(diào)查，篩選出對(duì)2種黃萎病免疫的種質(zhì)材料5份：FY-9-5-7-4-1、FY-6-7-6-4-2、Z2-7-2-6-7-4、WM2-4-5-9-3、26-12-9-7-5-4，高抗材料 10份：17B-5-3-6-7-3、QX-4-10-9-5-2、LH-4-9-7-10-6、L8-6-3-11-6-5、L9-7-4-1-9-2-4、KR-9-2-17-6-5-4、XXA-6-12-8-6-4、GPM6-6-5-7-9-1、KN-9-11-8-6-7-3、KC-2-10-6-7-2，感病材料2份：53-6-11-6-4-1、11-7-12-9-5-7（表2）。

2.1.1?田間番茄種質(zhì)材料對(duì)茄子黃萎病的抗性表現(xiàn)。

接種茄子黃萎病菌的117份番茄種質(zhì)材料在日光溫室中栽培，抗性表現(xiàn)可分5種類型。其中，免疫材料7份、高抗材料33份、中抗材料42份、耐病22份、感病材料13份。

2.1.2?田間番茄種質(zhì)材料對(duì)番茄黃萎病的抗性表現(xiàn)。

接種番茄黃萎病菌的117份番茄種質(zhì)材料在日光溫室中栽培，抗性表現(xiàn)也有5類。其中，免疫材料5份、高抗材料10份、中抗材料26份、耐病40份、感病材料36份。

2.2?番茄種質(zhì)抗黃萎病的DNA分子檢測(cè)?2018年11月，在3穗果膨大期從15份抗病番茄材料和2份感病番茄材料中隨機(jī)選取29株，每株取嫩枝1份送河北科技大學(xué)進(jìn)行抗黃萎病DNA分子檢測(cè)，其結(jié)果與在日光溫室中的田間調(diào)查結(jié)果吻合度達(dá)75.86%（表3）。

3?結(jié)論與討論

（1）抗番茄黃萎病的番茄種質(zhì)材料全部抗茄子黃萎病，抗茄子黃萎病的番茄種質(zhì)材料中只有部分材料表現(xiàn)抗番茄黃萎病。感病番茄黃萎病的番茄種質(zhì)材料，全部感病茄子黃萎病，感病茄子黃萎病的番茄種質(zhì)材料，多數(shù)感病番茄黃萎病。該試驗(yàn)結(jié)果表明番茄種質(zhì)中僅有部分材料表現(xiàn)抗黃萎病，抗性表現(xiàn)因染病病原菌的不同而有所不同。

（2）抗性DNA檢測(cè)對(duì)田間篩選抗性番茄材料有較強(qiáng)的引導(dǎo)作用，可縮減田間篩選范圍和數(shù)量，提高篩選精度，加速選育速度[10]。因DNA檢測(cè)結(jié)果與田間調(diào)查結(jié)果吻合度尚未達(dá)到100%，故經(jīng)DNA檢測(cè)出的番茄抗性材料仍需經(jīng)田間接種檢驗(yàn)證明具有相應(yīng)的抗性后才能作為抗性育種種質(zhì)材料使用。

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