胰頭癌患者尿激酶型纖溶酶原激活劑與增殖細(xì)胞核抗原Ki-67的相關(guān)性及其對預(yù)后的影響

賈富鑫，劉萌萌，劉江偉

(1.鄭州大學(xué)附屬洛陽中心醫(yī)院 肝膽外科，河南 洛陽 471000；2.洛陽市疾病預(yù)防控制中心 傳染病控制所，河南 洛陽 471002；3.新疆軍區(qū)總醫(yī)院 新疆特殊環(huán)境醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830000)

胰腺癌是一種消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤，約90%的胰腺癌發(fā)生于胰頭部，手術(shù)治療是患者唯一可獲得治愈機(jī)會的方式[1-2]。隨著外科技術(shù)的不斷進(jìn)步，胰頭癌外科手術(shù)切除率也不斷提高，但其診治現(xiàn)狀仍不樂觀，患者預(yù)后大多沒有得到顯著改善[3]。胰腺癌的早期診斷和預(yù)后評估尚缺乏靈敏度和特異度均較高的腫瘤標(biāo)志物[4]。研究發(fā)現(xiàn)，尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase-type plasminogen activator，uPA)、增殖細(xì)胞核抗原Ki-67均參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的過程[5-6]。為更確切地反映胰頭癌的生物學(xué)行為和預(yù)后，本研究聯(lián)合檢測胰頭癌患者uPA與Ki-67的表達(dá)水平，分析二者的相關(guān)性及其對預(yù)后的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料以2000年1月至2007年12月于新疆軍區(qū)總醫(yī)院(38例)及鄭州大學(xué)附屬洛陽中心醫(yī)院(34例)接受胰頭癌根治術(shù)的72例患者作為研究對象。男45例，女27例，年齡為28～79歲，平均(58.65±1.30)歲。腫瘤大小(瘤體最大徑)≤2 cm者2例，>2 cm且≤4 cm者50例，>4 cm者20例。高、中、低分化腺癌分別為24、34、14例。TNM(UICC 1997年版本)分期：Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期39例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43例，無轉(zhuǎn)移29例。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移12例，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移60例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理檢查確診為原發(fā)性胰腺導(dǎo)管腺癌；(2)無其他腫瘤史；(3)術(shù)前未接受化、放療及其他任何治療；(4)臨床及病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：胰體尾部癌、非原發(fā)于胰腺的轉(zhuǎn)移癌及多發(fā)癌除外。通過電話等方式進(jìn)行隨訪，獲取患者生存或死亡信息。本研究經(jīng)鄭州大學(xué)附屬洛陽中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 檢測方法uPA和Ki-67蛋白表達(dá)水平采用免疫組化SP法測定，uPA、Ki-67陽性切片(隨試劑一起包裝)作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。兔抗人uPA單克隆抗體(濃縮液)，工作濃度為1∶50，購自武漢博士德公司。鼠抗人Ki-67單克隆抗體(濃縮液)，工作濃度為1∶50，PV-9000試劑盒，DAB顯色液，均購自北京中杉金橋公司。由病理?？漆t(yī)生獨(dú)立觀察切片，每例切片在400倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行計(jì)算并取其平均值，uPA和Ki-67蛋白表達(dá)均以切片中染色細(xì)胞比例10%以下為陰性，大于或等于10%為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。生存分析采用Kaplan-Meier法，比較組間生存曲線采用Log-rank檢驗(yàn)。相關(guān)性分析應(yīng)用χ2檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)。多因素生存分析采用Cox回歸分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 隨訪結(jié)果72例患者中共有65例獲得完整隨訪，失訪率為9.7%(7/72)，隨訪時(shí)間為4～36個(gè)月，中位生存期為12個(gè)月，1年生存率為44.6%。

2.2 uPA和Ki-67蛋白的表達(dá)及相關(guān)性72例患者uPA和Ki-67陽性表達(dá)率分別為63.9%(46/72)及76.4%(55/72)，其中39例(54.2%)uPA(+)/Ki-67(+)，7例(9.7%)uPA(+)/Ki-67(-)組，16例(22.2%)uPA(-)/Ki-67(+)組，10例(13.9%)同時(shí)呈陰性表達(dá)，二者表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.263，P=0.026)。uPA和Ki-67蛋白均與腫瘤組織分化程度(χ2=9.841、4.844，P=0.007、0.029)、臨床分期(χ2=13.543、10.484，P=0.004、0.015)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=14.182、3.182，P<0.001、P=0.044)有關(guān)，Ki-67與腫瘤直徑存在相關(guān)性(χ2=8.905，P=0.012)，uPA和Ki-67均與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等無相關(guān)性(均P>0.05)。

2.3 生存分析比較uPA(+)/Ki-67(+)、uPA(+)/Ki-67(-)、uPA(-)/Ki-67(+)及uPA(-)/Ki-67(-)組患者術(shù)后生存曲線，uPA(-)/Ki-67(-)組患者術(shù)后生存期長于其他組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-rank檢驗(yàn)，χ2=50.483，P<0.001)。見圖1、表1。單因素生存分析(Kaplan-Meier法，Long-rank檢驗(yàn))顯示，uPA及Ki-67過表達(dá)(均P<0.001)、腫瘤組織分化程度(P<0.001)、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移(P=0.013)、臨床分期(P<0.001)與患者預(yù)后密切相關(guān)。將單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)納入Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型行多因素分析，結(jié)果表明腫瘤組織分化程度(P<0.001)、臨床分期(P=0.002)、uPA(P=0.001)及Ki-67過表達(dá)(P=0.001)是胰頭癌預(yù)后的獨(dú)立影響因素，總生存預(yù)測方程建立合理(χ2=69.221，P<0.001)。見表2。

圖1 胰頭癌組織不同uPA/Ki-67表達(dá)情況患者生存曲線

表1 胰頭癌組織不同uPA/Ki-67表達(dá)情況患者生存情況比較

表2 胰頭癌預(yù)后相關(guān)因素的多因素Cox回歸分析

3 討論

uPA是一種具有多種功能的絲氨酸蛋白水解酶，其與纖溶蛋白酶結(jié)合后可溶解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，是腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的先決條件[7]，其存在于許多腫瘤細(xì)胞內(nèi)，并可用于腫瘤預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)評估及作為可能的治療靶點(diǎn)[8-10]。He等[11]研究認(rèn)為，外周血中的uPA mRNA可作為食管鱗狀細(xì)胞癌潛在的不利預(yù)后的生物標(biāo)志物。董愛芬等[12]研究表明，uPA與口腔癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及病理分級具有相關(guān)性，可作為評估口腔癌病情及預(yù)后的指標(biāo)。Lampelj等[13]研究發(fā)現(xiàn)，uPA和PAI-1在惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用，兩種蛋白水解酶水平升高與乳腺癌患者預(yù)后不良有關(guān)。本研究顯示，uPA與胰頭癌組織分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示uPA可作為評估胰頭癌病理分型的一項(xiàng)指標(biāo)。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)uPA陰性組胰頭癌患者術(shù)后生存期高于uPA陽性組，uPA為影響胰頭癌預(yù)后的獨(dú)立因子。臨床分期高的胰頭癌患者uPA表達(dá)率更高，預(yù)后更差。

Ki-67是一種存在于增殖細(xì)胞中的核蛋白，又稱為MKi-67，在細(xì)胞增殖的G1、S、G2和M期中均有表達(dá)，但在G0期不表達(dá)[14]。Ki-67可作為反映腫瘤細(xì)胞群體增殖活性的可靠標(biāo)記物[15]。研究表明，Ki-67參與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程并影響患者預(yù)后[16-19]。秦娟等[20]研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67、P53和表皮生長因子受體協(xié)同促進(jìn)胃癌發(fā)展，可作為判斷胃癌惡性程度的可靠指標(biāo)。陳卓等[21]研究認(rèn)為，Ki-67和P63表達(dá)增高可能與食管癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。許金金等[22]認(rèn)為，Ki-67高表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤侵襲性高有關(guān)，可作為評估腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中較敏感的指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67的表達(dá)與胰頭癌患者組織分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，這與既往胰腺癌報(bào)道內(nèi)容一致[23-25]，提示Ki-67與胰頭癌高增殖、浸潤生長和轉(zhuǎn)移有關(guān)。同時(shí)，生存分析顯示，Ki-67為胰頭癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

胰腺癌的發(fā)生發(fā)展受包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)降解等多種因素調(diào)控，uPA和Ki-67均參于上述過程。本研究顯示，72例胰頭癌患者中uPA和Ki-67同為陽性的概率為54.2%(39/72)，Spearman相關(guān)性分析顯示，二者表達(dá)呈正相關(guān)，這與其在其他腫瘤中的報(bào)道一致[26-27]，表明在腫瘤發(fā)生發(fā)展中uPA和Ki-67可能共同參與細(xì)胞的增殖失控。同時(shí)，uPA和Ki-67均與腫瘤組織分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關(guān)，提示在胰頭癌的演變過程中，uPA與Ki-67是一對協(xié)同因素，均可影響胰頭癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。uPA和Ki-67均與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無顯著相關(guān)性，這可能與胰頭癌較胰體尾癌患者臨床表現(xiàn)出現(xiàn)早、患者及早得到手術(shù)治療概率高有關(guān)。本研究隨訪結(jié)果顯示，uPA和Ki-67均為陰性組患者術(shù)后生存期長于其他組。經(jīng)多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析后發(fā)現(xiàn)，組織分化程度、臨床分期、uPA及Ki-67是影響胰頭癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。因此，聯(lián)合檢測uPA及Ki-67蛋白表達(dá)水平有助于更確切地評估胰頭癌患者預(yù)后，兩指標(biāo)均陽性者術(shù)后復(fù)發(fā)可能性較大，需加大隨訪密度。

綜上所述，uPA與Ki-67在胰頭癌進(jìn)展過程中是一對協(xié)同因素，其表達(dá)情況可作為判斷胰頭癌侵襲力和患者預(yù)后的重要指標(biāo)。