蒙醫(yī)溫針對(duì)疲勞模型大鼠海馬及下丘腦細(xì)胞因子含量的影響

斯琴 水玲 陳英松

【摘 要】 目的：探究蒙醫(yī)溫針對(duì)疲勞模型大鼠海馬及下丘腦細(xì)胞因子含量的影響及蒙醫(yī)溫針的作用機(jī)制。方法：將32只清潔級(jí)雄性大鼠隨機(jī)分為正常組、溫針組、模型組及模型+溫針組。正常組不予任何處理，平行飼養(yǎng)。采用大鼠游泳力竭運(yùn)動(dòng)疲勞模型，溫針組同正常組大鼠平行飼養(yǎng)的同時(shí)采用蒙醫(yī)溫針治療。模型+溫針組力竭游泳后行溫針治療。實(shí)驗(yàn)期間觀察其行為學(xué)的同時(shí)，在21d后采取斷頭取樣法對(duì)大鼠海馬及下丘腦細(xì)胞因子方面進(jìn)行檢測(cè)，探討疲勞模型大鼠海馬及下丘腦細(xì)胞因子IL-1β，IL-6，TNF-a含量的影響及蒙醫(yī)溫針的作用機(jī)制。結(jié)果：與正常組相比，模型組IL-1β，IL-6，TNF-a含量明顯增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與模型組相比，溫針組，模型+溫針組IL-1β，IL-6，TNF-a含量明顯降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：蒙醫(yī)溫針能抑制力竭大鼠細(xì)胞因子釋放的同時(shí)調(diào)節(jié)免疫功能、發(fā)揮抗疲勞功能。故對(duì)慢性疲勞綜合征有一定的防治作用，值得進(jìn)一步推廣及應(yīng)用，以便提高患者的生活質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 慢性疲勞綜合征;蒙醫(yī)溫針;細(xì)胞因子;評(píng)價(jià)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R245.31+5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2020）2-0011-04

Abstract：Objective to explore the effect of Mongolian medical warm acupuncture on the content of cytokines in hippocampus and hypothalamus of fatigue model rats and the mechanism of Mongolian medical warm acupuncture.Methods 32 male rats were randomly divided into normal group，warm acupuncture（needle）group，model group and model+warm acupuncture group.The normal group was given no treatment and fed in parallel.Rat model of exercise-induced fatigue was established by the exhaustive swimming in rats，and the warm acupuncture group was raised in parallel with the normal group of rats，while the warm acupuncture group was treated with Mongolian medicine.The model+warm acupuncture group was treated with warm acupuncture after exhaustive swimming.While observing the behavior during the experiment，the severed head sampling method was adopted to detect the cytokines in the hippocampus and hypothalamus of the rats 21 days later，to explore the influence of the contents of the cytokines IL-1β，IL-6，TNF-a in the hippocampus and hypothalamus of the fatigue model rats and the action mechanism of the Mongolian medical warm acupuncture.Results Compared with the normal group，the content of IL-1β，IL-6 and TNF-a in the model group increased significantly（P<0.01）;compared with the model group，the content of IL-1β，IL-6 and TNF-a in the model+warm acupuncture group decreased significantly（P<0.05 or P<0.01）.Conclusion the warm acupuncture of Mongolian medicine can inhibit the release of cytokines，regulate the immune function and exert the anti-fatigue function.Therefore，it has certain prevention and therapeutic effect on chronic fatigue syndrome and is worth further promotion and application in order to improve the quality of life of patients.

Keywords：Chronic fatigue syndrome;Mongolian medical warm acupuncture;Cytokines;Evaluation

慢性疲勞綜合征（chronic fatigue syndrome CFS）是現(xiàn)代新近認(rèn)識(shí)的一種疾病，是亞健康狀態(tài)的最典型的表現(xiàn)。以長(zhǎng)期嚴(yán)重的疲勞感為突出的臨床表現(xiàn)，并伴有失眠、記憶力下降、骨骼肌疼痛及多種精神神經(jīng)癥狀，但無(wú)其他器質(zhì)性及精神性疾病為特征的一組復(fù)雜的功能紊亂癥候群[1-2] 。隨著經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，快速的生活節(jié)奏及日益激烈的生存競(jìng)爭(zhēng)可導(dǎo)致人們壓力越來(lái)越大、生活不規(guī)律、情緒不穩(wěn)定等，這使慢性疲勞綜合征的發(fā)病率逐年增加，以至于此病被認(rèn)為是二十一世紀(jì)“健康的隱形殺手”。慢性疲勞綜合征的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，目前許多專(zhuān)家認(rèn)為慢性疲勞綜合征可能與病毒感染、免疫系統(tǒng)問(wèn)題、神經(jīng)系統(tǒng)問(wèn)題、精神疾病等多重因素有關(guān)聯(lián)。西醫(yī)對(duì)慢性疲勞綜合征的病因及發(fā)病機(jī)制尚未確切定論，對(duì)慢性疲勞綜合征的治療僅限于對(duì)癥及支持治療[3] 。

慢性疲勞綜合征在蒙醫(yī)學(xué)中無(wú)特定病名。根據(jù)其主要臨床癥狀和特征歸屬于“巴達(dá)干、赫依性”疾病范疇。認(rèn)為人體三根（赫依、希拉、巴達(dá)干）中的巴達(dá)干偏盛與赫依相搏，致使三根失調(diào)而引起持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的疲勞為核心癥狀的一系列癥候[4] 。蒙醫(yī)溫針療法是針刺與溫灸相結(jié)合的一種外治療法。它具有針刺與溫灸的雙重作用，并有溫通經(jīng)脈、調(diào)和氣血、調(diào)理體素、增強(qiáng)抵抗力以防治疾病的作用。

多年來(lái)本課題研究小組從蒙醫(yī)學(xué)角度積極的探究，得出了蒙醫(yī)溫針療法可以較好的改善CFS患者的臨床癥狀[5] 。鑒此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)采用強(qiáng)制性運(yùn)動(dòng)建立反復(fù)力竭運(yùn)動(dòng)模型，并觀察運(yùn)動(dòng)疲勞后海馬、下丘腦細(xì)胞因子的表達(dá)變化，揭示海馬、下丘腦的免疫炎癥反應(yīng)及進(jìn)一步證實(shí)蒙醫(yī)溫針的治療機(jī)制的可能性。

1.材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)器材 MLY-1型蒙醫(yī)溫針療術(shù)溫針儀（內(nèi)蒙古元陽(yáng)中蒙醫(yī)科技開(kāi)發(fā)有限公司）。曠場(chǎng)儀：型號(hào)為UGO Basile S.R.L。懸尾箱子：高60cm，寬40cm，深50cm，按照相關(guān)文獻(xiàn)制定[6]。Morris水迷宮：北京眾實(shí)迪創(chuàng)科技發(fā)展有限公司。水桶：深80cm，直徑50cm。秒表，電子秤，溫度計(jì)等。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 清潔級(jí)SD雄性大鼠，體重160～180g，32只。由維通利華動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有限公司提供。將SD大鼠在相同條件下，分籠飼養(yǎng)于溫度22～26℃，濕度60%～80%，定時(shí)通風(fēng)換氣的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室中，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后隨機(jī)分為正常組、溫針組、模型組及模型+溫針組，每組8只制備。

1.3 造模方法 適應(yīng)性平行飼養(yǎng)3d后，將模型組及模型+溫針組大鼠放入預(yù)備好的溫度為30±2℃的水桶中，每日1次，每次20min，每桶單次放入2只大鼠，適應(yīng)性游泳3d。3d適應(yīng)性游泳后開(kāi)始正式負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，負(fù)重量為體重的5%（目的是為了盡快達(dá)到力竭效果）[7]，并每天記錄游泳時(shí)間，每隔1d記錄體重。如游泳期間大鼠漂浮在水面不動(dòng)，木棍驅(qū)趕其保持運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。力竭標(biāo)準(zhǔn)為：游泳動(dòng)作明顯失調(diào)，頭部沉入水底10s不能回到水面即視為力竭，當(dāng)即撈出，毛巾擦干后，放置籠中。正常組及溫針組不參與力竭游泳。

1.4 治療方法 正常組及模型組不參與治療。溫針組取“頂會(huì)”“心穴”[8]，用特制銀針（直徑0.5mm，長(zhǎng)度3cm），從上而下的方向斜刺后，接MLY-1型蒙醫(yī)溫針療術(shù)溫針儀，電流強(qiáng)度100mA，溫度40℃，每次刺激15min，每隔1日兩穴位交替治療，共治療11次。模型+溫針組大鼠制備造模后與溫針組大鼠同時(shí)進(jìn)行溫針治療。

1.5 取材 末次力竭游泳24h后，用電子天平稱(chēng)量大鼠體重后快速斷頭處死，在實(shí)驗(yàn)室作臺(tái)上完整的從腦組織取出海馬及下丘腦，在專(zhuān)用電子天平上稱(chēng)重后加入0.9%的氯化鈉溶液后用組織勻漿器低溫下制成勻漿，4℃3500r/min離心20min，然后取上清液，置于-20℃保存待測(cè)。

1.6 檢測(cè)指標(biāo) 采用酶聯(lián)免疫法吸附法（ELISA法）檢測(cè)大鼠海馬、下丘腦IL-1β，IL-6及TNF-a的含量，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，用單因素方差分析，繼以秩和檢驗(yàn)，以P<0.05為組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 實(shí)驗(yàn)前后正常組及溫針組除體重明顯增加外，無(wú)其他明顯變化。模型組大鼠較實(shí)驗(yàn)前明顯表現(xiàn)出精神狀態(tài)欠佳、食量減退、毛發(fā)無(wú)光澤、嗜睡、易怒、反應(yīng)遲鈍、體重較正常組、溫針組及模型+溫針組明顯下降等一系列疲勞特征。與模型組相比，模型+溫針組表現(xiàn)為基本正常。

2.2 行為學(xué)變化 從表1可以看出在末次實(shí)驗(yàn)時(shí)測(cè)量的體重，與正常組相比，模型組大鼠體重明顯降低，有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。與模型組相比，模型+溫針組大鼠體重有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。

2.3 海馬、下丘腦細(xì)胞因子含量的變化 從表2可以看出與正常組相比，模型組大鼠海馬IL-1β、IL-6、TNF-a含量明顯升高，有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。與模型組相比，模型+溫針組大鼠海馬IL-β、IL-6、TNF-a含量明顯減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。

從表3可以看出與正常組相比，模型組大鼠下丘腦IL-1β、IL-6、TNF-a含量明顯升高，有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。與模型組相比，模型+溫針組大鼠下丘腦IL-1β、TNF-a含量明顯減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。與模型組相比，模型+溫針組大鼠下丘腦IL-6含量明顯減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。

3 討論

蒙醫(yī)溫針通過(guò)針刺刺激、溫?zé)岽碳ぜ把ㄎ坏南嗷プ饔?，?duì)機(jī)體產(chǎn)生一些生物學(xué)效應(yīng)，以調(diào)節(jié)機(jī)體的生理和病理狀況，從而達(dá)到治療及預(yù)防疾病的目的[9]。蒙醫(yī)溫針療法治療慢性疲勞綜合征的原則為：調(diào)體素，改善巴達(dá)干、赫依功能為總則。根據(jù)慢性疲勞綜合征的臨床癥狀和特征結(jié)合蒙醫(yī)基礎(chǔ)理論和臨床治療有效穴位篩選出頂會(huì)穴和心穴。“頂會(huì)穴”（位于頂骨正中），主治“赫依”性音啞癥、神志不清、癲狂、視力減退、頭暈、頭痛等癥?！靶难ā保ㄎ挥诘?胸椎下凹陷正中），主治心悸、心抖、癲狂、“巴達(dá)干、赫依”性疾病、失眠、瞻忘、納呆、神志昏迷等癥[10]。

近年來(lái)研究表明，慢性疲勞綜合征可能與慢性免疫激活、炎癥和細(xì)胞因子的改變及其他特異性抗體的出現(xiàn)相關(guān)。海馬是人體認(rèn)知和情緒調(diào)節(jié)的重要中樞，下丘腦是神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫（NEI）網(wǎng)絡(luò)的高級(jí)整合中樞。海馬在學(xué)習(xí)記憶的中樞調(diào)節(jié)環(huán)節(jié)中起著重要作用[11] ，根據(jù)慢性疲勞綜合征患者表現(xiàn)出的健忘、注意力不集中等精神障礙，可以推測(cè)海馬中細(xì)胞因子的改變可能與慢性疲勞的發(fā)生有關(guān)。人體的免疫功能具有一定的防御、穩(wěn)定及監(jiān)視功能。這些功能一旦受到外界的刺激平衡失調(diào)，就會(huì)產(chǎn)生各種免疫性疾病。細(xì)胞因子不僅可以激活免疫系統(tǒng)，對(duì)神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)中也有著重要作用[12]。高表達(dá)的促炎癥因子可使身體出現(xiàn)疲勞、肌肉疼痛、咽喉疼痛、淋巴結(jié)腫大等表現(xiàn)[13]。IL-1β、IL-6、TNF-a均是參與炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子。本研究中模型組大鼠海馬、下丘腦IL-1β、IL-6、TNF-a的含量明顯升高，提示大鼠體內(nèi)有炎癥反應(yīng)。而模型+溫針組大鼠在給與蒙醫(yī)溫針治療后IL-1β、IL-6、TNF-a含量明顯比模型組大鼠低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。這一結(jié)果證明蒙醫(yī)溫針有利于減少炎癥反應(yīng)。與正常組比較，溫針組體重、IL-1β、IL-6、TNF-a的含量無(wú)明顯差異，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這一結(jié)果提示蒙醫(yī)溫針治療不僅對(duì)人體不會(huì)造成傷害，繼而可以減少疲勞大鼠海馬和下丘腦區(qū)炎癥細(xì)胞，從而一定程度上起到緩解疲勞癥狀、改善學(xué)習(xí)記憶的作用。

綜上所述，蒙醫(yī)溫針從改善微循環(huán)，調(diào)節(jié)新陳代謝，調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺軸功能，提高機(jī)體機(jī)能狀態(tài)，改善或增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能等途徑對(duì)慢性疲勞綜合征起到治療作用，還能積極預(yù)防疾病的發(fā)展，易操作、安全性高、無(wú)副作用、療效佳、經(jīng)濟(jì)適用等優(yōu)點(diǎn)易被患者所接受。而且該療法也適用于其他常見(jiàn)病的治療，值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2019-10-31 編輯：陶希睿）