基于正交試驗(yàn)優(yōu)選芍藥甘草湯胃漂浮緩釋片處方工藝研究

何利，劉巍，王冠華，王云霞，陳淮臣，石亞，劉文

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué) 研究生院，貴州 貴陽(yáng) 550002；2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550004)

芍藥甘草湯出自《傷寒論·太陽(yáng)篇》，是中醫(yī)治療的經(jīng)典名方，由芍藥、甘草兩味藥物1∶1組成，可養(yǎng)陰生津、調(diào)和肝脾，具柔肝理脾、緩急止痛之效，在臨床上廣泛用于急性、慢性胃潰瘍的治療[1-3]。在本課題組前期實(shí)驗(yàn)篩選出芍藥甘草湯最佳提取工藝的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)將其制成胃漂浮緩釋制劑，以延長(zhǎng)藥物病灶部位的滯留時(shí)間，提高藥物生物利用度。

1 儀器與材料

1.1 儀器

安捷倫1260高效液相色譜儀，ZRS-8 G智能溶出試驗(yàn)儀(天津天大天發(fā)科技有限公司)；TDP-5單沖壓片機(jī)(吉首市中誠(chéng)制藥機(jī)械廠，湖南)；科導(dǎo)SK 8210 HP型臺(tái)式超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；TB-1-1型電子調(diào)溫電熱套(天津泰斯特儀器有限公司)等。

1.2 材料

芍藥苷(批號(hào)：110736-201842)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用；白芍、炙甘草藥材購(gòu)至康美藥業(yè)有限股份公司，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)周漢華教授鑒定白芍為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall的干燥根，炙甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch的干燥根和根莖的炮制加工品；羥丙基甲基纖維素HPMC(K 4M，合肥巴斯夫生物科技有限公司)；聚乙烯吡咯烷酮(K 30，合肥巴斯夫生物科技有限公司)；十八醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；微晶纖維素(源葉生物)；甲醇、乙腈等試劑為色譜純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil(2)C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)。流動(dòng)相：乙腈(A)-0.2%磷酸水(B)，梯度洗脫(0～5 min，10%～13% A；5～11 min，13%～14% A；11～20 min，14%～16% A；20～25 min，16%～18% A；25～27 min，18%～18% A；27～28 min，18%～20% A；28～34 min，20%～20% A；34～40 min，20%～30% A；40～50 min，30%～40% A；50～60 min，40%～55% A)。檢測(cè)波長(zhǎng)：多波長(zhǎng)測(cè)定(0～7 min，258 nm；7～35 min，230 nm；35～46 min，360 nm；46～60 min，258 nm)。流速：1 mL/min；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。色譜見(jiàn)圖1。

2.2 樣品提取物及溶液的制備

2.2.1 樣品提取物的制備 取白芍、炙甘草藥材粉末(過(guò)4號(hào)篩)各200 g，加8倍量80%乙醇，回流提取3次，每次1.5 h，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮，60 ℃鼓風(fēng)干燥箱中干燥至恒重，干燥器中保存。

2.2.2 供試品溶液的制備取本品15片，研細(xì)，精密稱(chēng)取0.6 g，精密稱(chēng)定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，搖勻稱(chēng)重后超聲處理45 min(功率500 W，頻率59 kHz)，放冷后稱(chēng)重，甲醇補(bǔ)足重量，搖勻后用0.45 μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成濃度822.00 μg/mL的芍藥苷對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取不同體積芍藥苷對(duì)照品溶液適量，置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制備系列濃度的混合對(duì)照品溶液，分別精密吸取1 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，以計(jì)算線性方差和相關(guān)系數(shù)(r)，線性方程為Y=9.7852X+140.61，r=0.999 5，芍藥苷在82.20～739.80 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.2 精密度試驗(yàn) 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄芍藥苷的峰面積，計(jì)算得到芍藥苷、甘草苷峰面積的RSD為2.34%，表明儀器精密度良好。

注：1.芍藥苷

圖1 芍藥苷對(duì)照品(B)和芍藥甘草胃漂浮緩釋片樣品溶液(A)的HPLC圖譜

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得到芍藥苷峰面積的RSD分別為1.71%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.4 回收率試驗(yàn) 取本品15片，研細(xì)，每份0.3 g。精密稱(chēng)定6份，分別置100 mL容量瓶中，分別加入各對(duì)照品適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件依次測(cè)定，計(jì)算得到芍藥苷的平均加樣回收率為101.61%，RSD為1.43%，表明該方法的準(zhǔn)確度良好。

2.4 體外釋放度考察

根據(jù)2015版《中國(guó)藥典》四部(通則0931)溶出度與釋放度測(cè)定法第二法(漿法)，釋放介質(zhì)為0.1 mol/mL的鹽酸溶液，轉(zhuǎn)速為75 r/min，溫度控制(37±1)℃，分別在2、4、6、8、10、12 h六個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣，每次5 mL(并及時(shí)添加等體積的新鮮介質(zhì))，吸取出的溶出液經(jīng)水浴揮干后，甲醇溶解，定容至2 mL，過(guò)0.45 μm微孔濾膜后，取續(xù)濾液，同時(shí)測(cè)定樣品中芍藥苷的累計(jì)釋放度。

2.5 處方的篩選和優(yōu)化

2.5.1 處方初步篩選 在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)片劑的可壓性、漂浮性、體外溶出度暫定處方比例為芍藥浸膏粉30%、HPMC K4M 25%、十八醇 15%、NaHCO34%、聚乙烯吡咯烷酮 3%，MCC補(bǔ)足重量，采用粉末直接壓片法進(jìn)行壓片。

2.5.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 以HPMC K4M(A)、PVPK 30(B)、NaHCO3(C)用量作為考察因素，每個(gè)因素設(shè)置3個(gè)水平進(jìn)行正交設(shè)計(jì)。根據(jù)2015版中國(guó)藥典4部緩釋制劑指導(dǎo)原則確定本漂浮片以其體外累計(jì)釋放度為處方篩選依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)確定以下3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的累計(jì)釋放度作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，2 h累計(jì)釋放度(Q2)以30%為標(biāo)準(zhǔn)；6 h累計(jì)釋放度(Q6)以60%為標(biāo)準(zhǔn)；10 h累計(jì)釋放度(Q10)以85%為標(biāo)準(zhǔn)，采用綜合評(píng)分法對(duì)正交試驗(yàn)結(jié)果分析，即綜合評(píng)分K的計(jì)算公式為：K= |Q2-30% | + |Q6-60% | + |Q10-85% |。K值越小說(shuō)明優(yōu)化條件越佳。因素水平見(jiàn)表1，正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

表1 因素水平

表2 正交實(shí)驗(yàn)

表3 方差分析

由表2可知，各因素對(duì)芍藥苷釋放度的影響為：A>C>B，直觀分析最佳工藝為A3B2C1，方差分析結(jié)果表明，A有顯著性影響，B、C無(wú)明顯差異，故選定芍藥甘草湯胃漂浮緩釋片最佳處方工藝為：芍藥甘草浸膏粉30%，HPMC 35%，聚乙烯吡咯烷酮 6%，NaHCO34%，十八醇 15%，MCC補(bǔ)重。

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)

為了進(jìn)一步驗(yàn)證上述輔料配比和制備工藝的可行性及穩(wěn)定性，按照最優(yōu)處方混合藥物粉末與各輔料制備了3批樣品，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，按“2.4”項(xiàng)下方法分別計(jì)算6個(gè)時(shí)間點(diǎn)累計(jì)釋放度，結(jié)果見(jiàn)表4，釋放曲線擬合圖見(jiàn)圖2。

表4 3批樣品不同取樣時(shí)間累計(jì)釋放度

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芍藥苷甘草湯胃漂浮緩釋片在12 h內(nèi)緩慢釋放，可達(dá)到長(zhǎng)效的目的，且3個(gè)批次間的體外累積釋放率無(wú)顯著差異，工藝重現(xiàn)性良好，制劑處方優(yōu)化成功。

圖2 芍藥苷累計(jì)釋放曲線

3 討論

胃內(nèi)滯留型制劑，主要是依據(jù)流體動(dòng)力學(xué)平衡原理制備而成的密度<1，口服后“漂浮”在胃內(nèi)的制劑[4-5]。能顯著延長(zhǎng)藥物在胃內(nèi)滯留時(shí)間，以達(dá)到直接作用于病灶部位并緩慢持續(xù)釋放，提高藥物生物利用度的效果。通常是由藥物、緩釋材料、助漂劑、發(fā)泡劑和其他輔料組成[6]，原輔料的篩選和配比，是制劑制備成功的關(guān)鍵。

本實(shí)驗(yàn)選用HPMC為緩釋材料，其與胃液接觸后，可水化成凝膠，在片劑表層形成屏障，有效控制藥物的釋放，同時(shí)由于水化膨脹后使片劑體積松大，改善了片劑的漂浮性能。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同黏度的HPMC水化速度不同，黏度與水化速度成反比，對(duì)藥物的溶出有顯著的影響。處方中十八醇是一種密度小、疏水性的蠟質(zhì)材料，在方中作為助漂劑，與碳酸氫鈉聯(lián)合使用，起到協(xié)同作用，使得片劑快速起漂并長(zhǎng)時(shí)間處于漂浮狀態(tài)。聚乙烯吡咯烷酮為致孔劑，加快藥物在親水性凝膠屏障中的溶出，控制藥物的溶出速度。

另外，由于芍藥甘草浸膏含有大量多糖成分，制成的干浸膏流動(dòng)性差、吸濕性嚴(yán)重，導(dǎo)致混合藥粉黏性過(guò)強(qiáng)，成型過(guò)程困難，故以微晶纖維素為填充劑，減少黏沖，改善其成型性。制備胃漂浮緩釋片，需綜合考慮各方面因素，優(yōu)化原輔料的配比，才可制成工藝可行、滿足生產(chǎn)需求的制劑。