接骨續(xù)筋丸中5種藥材的薄層鑒別研究

王 云，張永萍，吳靜瀾，楊 姍，吳 丹

(貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550002)

接骨續(xù)筋丸原為散劑，經(jīng)工藝優(yōu)化后制成丸劑，是由骨碎補、西紅花、續(xù)斷、赤芍、木香、血竭、自然銅、土鱉蟲、乳香、沒藥等二十六味藥材制成的濃縮水丸，具有活血止痛、祛瘀生新、接骨續(xù)筋、舒筋活絡(luò)的功效，臨床用于骨折損傷中期的治療。原制劑無相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容，為進一步建立該丸劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有效控制其質(zhì)量，進行了有關(guān)藥味的薄層色譜鑒別研究，并建立接骨續(xù)筋丸中骨碎補、西紅花、續(xù)斷、赤芍、木香5味藥材的薄層色譜鑒別方法，且方法專屬性強、重復(fù)性好。

1儀器與材料

1.1 儀器

SK8210HP超聲波清洗器；JA2003分析天平；LDP-150高速多功能粉碎機；電爐；HWS恒溫恒濕培養(yǎng)箱；GOODSEE-20E薄層成像系統(tǒng)。

1.2 材料

骨碎補、西紅花、血竭等藥材均由貴州同濟堂制藥有限公司提供。川續(xù)斷皂苷Ⅵ(111685-201707)對照品；骨碎補(批號：121169-201304)、木香(批號：0921-200104)、赤芍(批號：121093-201303)、西紅花(批號：121009-201704)對照藥材，均由中國食品藥品檢定研究院提供。試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1 骨碎補[1]

(1)供試品溶液的制備：取丸研成粉末，稱取1 g，加水20 mL超聲30 min，濾過，取續(xù)濾液10 mL，加20 mL乙酸乙酯萃取，取上層萃取液蒸干，殘渣加甲醇溶液。(2)陰性溶液的制備：取不含骨碎補的丸劑，按供試品溶液制備方法制備陰性溶液。(3)對照藥材溶液的制備：取對照藥材0.5 g加甲醇30 mL，回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解，作為對照藥材溶液。(4)條件與結(jié)果：吸取上述對照藥材溶液3滴、供試品溶液與陰性溶液各5 μL分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(2∶10.5∶2.5∶4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁溶液，置紫外光(365 nm)下檢視。在與骨碎補對照藥材相應(yīng)的位置上(Rf=0.21)有兩個斑點，顯相同的熒光綠色斑點，陰性樣品無干擾。薄層色譜見圖1。

2.2 續(xù)斷[2]

(1)供試品溶液的制備：取丸，研成粉末，稱取0.5 g，加水20 mL，超聲30 min過濾，取續(xù)濾液10 mL，分別用水飽和正丁醇10 mL萃取2次；然后用氨試液10 mL萃取1次；再用正丁醇飽和水10 mL萃取1次，均取上層溶液。萃取液蒸干，加甲醇溶解。(2)陰性溶液的制備：取不含續(xù)斷的丸劑，按供試品溶液制備方法制備陰性溶液。(3)對照藥材溶液的制備：取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。(4)條件與結(jié)果：吸取上述3種溶液各5 μL分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)下層為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，105℃加熱至斑點清晰，置白光下檢視。在與續(xù)斷對照藥材相應(yīng)的位置上(Rf=0.36)有一相同的淡紫色斑點，陰性樣品無干擾。薄層色譜見圖2。

注：1骨碎補對照藥材；2-8接骨續(xù)筋丸；9陰性樣品

注：1.川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品；2-8.接骨續(xù)筋丸；9.陰性樣品

2.3 西紅花[3]

(1)供試品溶液的制備：取丸研細(xì)，稱取0.5 g，加甲醇10 mL，超聲10 min，放冷，取上清液作為供試品溶液。(2)陰性溶液的制備：取不含西紅花的丸劑，按供試品溶液制備方法制備陰性溶液。(3)對照藥材溶液的制備：取對照藥材20 mg加甲醇1 mL，超聲處理10 min，放冷，取上清液作為對照品溶液。(4)條件與結(jié)果：吸取上述對照藥材溶液3滴、供試品溶液與陰性溶液各5μL分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(10∶1.65∶1.35)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光(365 nm)下檢視。在與西紅花對照藥材相應(yīng)的位置上(Rf=0.33)有三個相同的暗黑色斑點，陰性樣品無干擾。薄層色譜見圖3。

注：1.西紅花對照藥材；2-8.接骨續(xù)筋丸；9.陰性樣品

2.4 赤芍[4]

(1)供試品溶液的制備：取丸，研成粉末，稱取0.5 g，加水20 mL，超聲30 min過濾，取續(xù)濾液10 mL，分別用水飽和正丁醇10 mL萃取3次；用2.5 mL氨試液萃取1次；再用正丁醇飽和水7.5 mL萃取2次，均取上層溶液。萃取液蒸干，加甲醇溶解。(2)陰性溶液的制備：取不含赤芍、白芍的雙陰性丸劑，按供試品溶液制備方法制備陰性溶液。(3)對照藥材溶液的制備：取赤芍對照藥材0.5 g，加乙醇10 mL，振搖5 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為對照藥材溶液。(4)條件與結(jié)果：吸取上述對照藥材溶液3滴、供試品溶液與陰性溶液各5 μL分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(20∶2.5∶5∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點清晰，置白光下檢視。在與赤芍對照藥材相應(yīng)的位置上(Rf=0.35)有兩個顯相同顏色的藍色和淡紅色斑點，而陰性樣品在此處無藍色斑點，不存在干擾。薄層色譜見圖4。

注：1.赤芍對照藥材，2-8.接骨續(xù)筋丸，9.陰性樣品

2.5 木香[5]

(1)供試品溶液的制備：取丸研成細(xì)粉，稱取1.5 g，加三氯甲烷10 mL，超聲處理30 min，過濾，濾液為供試品溶液。(2)陰性溶液的制備：取不含木香的丸劑，按供試品溶液制備方法制備陰性溶液。(3)對照藥材溶液的制備：取對照藥材0.5 g，加三氯甲烷10 mL，超聲30 min。過濾，濾液為對照藥材溶液。(4)條件與結(jié)果：吸取上述對照藥材溶液1滴、供試品溶液與陰性溶液各6滴分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-環(huán)己烷(5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴1%香草醛硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點清晰，置白光下檢視。在與木香對照藥材相應(yīng)的位置上(Rf=0.37)有兩個顯藍色斑點和紫色斑點，陰性樣品無干擾。薄層色譜見圖5。

注：1.木香對照藥材；2-8.接骨續(xù)筋丸；9.陰性樣品

3討論

試驗對各藥材的耐用性進行了考察，包括對不同的廠家薄層板(青島、煙臺)、環(huán)境不同溫度(20 ℃、25 ℃、30 ℃)及不同濕度(50%、60%、70%)的考察。結(jié)果顯示不同因素下每味藥材的薄層鑒別存在一定差異，煙臺板使續(xù)斷、西紅花、木香的Rf值減??；溫度30℃時，骨碎補、續(xù)斷、木香的Rf值均增大；濕度60%時，西紅花Rf值增大，赤芍Rf值減小，濕度70%時，續(xù)斷Rf值增大，赤芍Rf值減小。不同藥材的薄層色譜在不同條件下雖有差異，但對應(yīng)條件中的色譜圖專屬性強，分離度好，表明薄層鑒別方法的可靠性，進一步闡釋了用該薄層色譜條件控制接骨續(xù)筋丸制劑質(zhì)量的合理性。相關(guān)薄層如圖6-圖10。

注：1.骨碎補對照藥材；2-3.接骨續(xù)筋丸樣品；4.缺骨碎補陰性樣品

圖6 接骨續(xù)筋丸中骨碎補藥材不同廠家薄層板、溫度、濕度考察色譜

注：1.續(xù)斷對照藥材；2-3.接骨續(xù)筋丸樣品；4.缺續(xù)斷陰性樣品

圖7 接骨續(xù)筋丸中續(xù)斷藥材不同廠家薄層板、溫度、濕度考察色譜

注：1.西紅花對照藥材；2-3.接骨續(xù)筋丸樣品；4.缺西紅花陰性樣品

圖8 接骨續(xù)筋丸中西紅花藥材不同廠家薄層板、溫度、濕度考察色譜

注：1.赤芍對照藥材；2-3.接骨續(xù)筋丸樣品；4.缺赤芍陰性樣品

圖9 接骨續(xù)筋丸中赤芍藥材不同廠家薄層板、溫度、濕度考察色譜

注：1.木香對照藥材；2-3.接骨續(xù)筋丸樣品；4.缺木香陰性樣品

圖10 接骨續(xù)筋丸中木香藥材不同廠家薄層板、溫度、濕度考察色譜