杜鵑花活性提取物鎮(zhèn)痛抗炎作用的初步研究

陳利軍，王利平，馮丁丁

（1.江蘇衛(wèi)生健康職業(yè)學(xué)院，江蘇南京 210029；2.江蘇省中醫(yī)院麻醉科，江蘇南京 210000）

杜鵑花屬是杜鵑花科的一個大屬，在我國分布廣泛、資源豐富，具有較高的藥用價值，已引起國內(nèi)外的重視。近幾年從杜鵑花中提取的主要成分黃酮類化合物的藥理活性受到很大的關(guān)注[1]，目前很多學(xué)者在心血管病、呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)研究領(lǐng)域研究頗多[2]，且滿山紅提取物具有抗炎鎮(zhèn)痛作用[3]，但由于其溶解性差、造成難以吸收，臨床上受到限制。研究報道黃杜鵑花鎮(zhèn)痛作用顯著，但是劑量大效果反而減弱，藥效不穩(wěn)定[4]。以上表明各種局限性導(dǎo)致杜鵑花屬植物尚沒有開發(fā)出臨床上適合的藥物。

目前抗炎鎮(zhèn)痛藥在發(fā)揮止痛和抗炎作用外，還會出現(xiàn)相應(yīng)的毒副作用，不良反應(yīng)如凝血障礙、心腦血管疾病、腎毒性、肝損傷、粒細(xì)胞缺乏、胃腸道損傷等。文獻(xiàn)報道杜鵑花具有治療風(fēng)濕頑痹、折傷疼痛、皮膚頑癬等癥，結(jié)合前期研究，本實(shí)驗(yàn)通過探究杜鵑花活性提取物的鎮(zhèn)痛抗炎作用，為臨床上開發(fā)新型的安全性較高的鎮(zhèn)痛抗炎藥物奠定基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

ICR 小鼠，體重（20±2）g，SD 大鼠（200±20）g，雌雄各半，揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心，許可證號：SCXK（蘇）2017-0007。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

杜鵑花提取物（江蘇衛(wèi)生健康職業(yè)學(xué)院化學(xué)教研室提取，總黃酮含量＞50.0%）；雙氯芬酸鈉腸溶片（北京諾華制藥有限公司）；弗氏完全佐劑（浙江聯(lián)碩生物科技有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

ATY-224型分析天平（上海雙旭電子有限公司）；藥品冷藏箱YC-1500L（山東博科有限公司）；GJ-8402型熱板測痛儀（南京卡爾文生物科技有限公司）；足趾腫脹測量儀（安徽正華生物儀器設(shè)備有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)研究

實(shí)驗(yàn)前選取60只ICR 小鼠，將熱板儀預(yù)熱至溫度為（55±0.5）℃挑選熱板儀上10s 以上、40s 以內(nèi)出現(xiàn)舔足的小鼠，時間大于40s 或者跳躍者淘汰。合格的小鼠隨機(jī)分為6組，分別為生理鹽水對照組，杜鵑花低、中、高劑量組，陽性藥組（雙氯芬酸鈉），給藥前預(yù)先測定每只小鼠的痛閾值。連續(xù)灌胃給藥7d，末次給藥后，分別記錄30min、60min、90min 小鼠自放于熱板測痛儀上至出現(xiàn)疼痛反應(yīng)的時間（熱板上出現(xiàn)舔足所用的時間），作為痛閾的指標(biāo)。比較基礎(chǔ)痛閾與給藥后痛閾的差異，評價杜鵑花提取物的鎮(zhèn)痛作用。

2.2 抗炎實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)前選取SD 大鼠60只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，分空白組（10只）和造模組（50只）。空白組的大鼠右側(cè)后肢足趾皮下注射生理鹽水0.1mL，其余各組大鼠右側(cè)后肢足趾皮下注射弗氏完全佐劑0.1mL，制成下肢關(guān)節(jié)炎模型，造模成功后將模型組隨機(jī)分為5組，分別為模型組，杜鵑花組低、中、高劑量組，陽性對照組。造模前用足趾測量儀測定大鼠造模肢足趾容積，并在給藥第1、7、14、21d 分別測量足趾容積，比較各組腫脹度差異。末次給藥1h 后，10%水合氯醛麻醉，腹主動脈取血，迅速剝離足趾關(guān)節(jié)皮毛，取大鼠踝關(guān)節(jié)上1cm 處，剝除趾骨關(guān)節(jié)，制備肌肉及增生組織勻漿，離心取上清液，以備研究其作用機(jī)制。

2.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS17.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件的t檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果用（+s）表示，組間差異的比較用t檢驗(yàn)。

3 結(jié)果與分析

3.1 杜鵑花對小鼠熱板致痛的影響

實(shí)驗(yàn)表明，給藥后杜鵑花中、高劑量組有較好的鎮(zhèn)痛作用，與生理鹽水對照組比較，均可明顯延長痛閾值，具有統(tǒng)計學(xué)差異（p＜0.01），高劑量與陽性藥組相比，沒有統(tǒng)計學(xué)差異（p＞0.05），但杜鵑花在給藥60min 表現(xiàn)較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛效果，且有一定的量效關(guān)系（見表1）。

表1 杜鵑花對小鼠熱板法痛閾的影響（n=10，+s）

表1 杜鵑花對小鼠熱板法痛閾的影響（n=10，+s）

注：與空白組相比，*p＜0.01；與給藥前相比，#p＜0.01.

給藥前 給藥后不同時間痛閾（min）痛閾 30 60 90空白對照組 14.51±3.4 14.67±3.6 15.33±5.2 16.83±4.3陽性對照組 60 14.67±2.9 35.24±5.1*# 38.42±4.3*# 40.34±5.1*#低劑量 30 16.77±3.7 19.23±4.2* 19.63±5.2* 18.81±4.3中劑量 60 15.57±3.2 25.83±4.3*# 24.42±3.22*# 22.39±5.5*#高劑量 120 16.17±3.3 30.67±3.7*# 36.83±5.64*# 35.17±3.43*#組別 劑量（mg/kg）

3.2 杜鵑花對大鼠足趾腫脹的影響

實(shí)驗(yàn)表明，造模后，空白組與模型組相比，模型組的足趾容積存在顯著性差異（p＜0.01）。給藥后，杜鵑花可明顯減輕大鼠足趾的腫脹度，與模型組相比，具有顯著性差異（p＜0.01），給藥組腫脹度均低于模型組。高劑量組與低、中劑量組相比，具有顯著性差異（p＜0.05），抗炎效果顯著，且有一定的量效關(guān)系，劑量增加，效果顯著（見表2）。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示杜鵑花活性提取物具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用，且有一定的量效關(guān)系，尤其可降低氟氏完全佐劑所致關(guān)節(jié)炎大鼠的腫脹度，改善關(guān)節(jié)滑膜組織增生，提示本藥具有較好的抗炎作用。抗炎機(jī)制有可能通過下調(diào)腫瘤壞死因子TNF-α，抑制T細(xì)胞產(chǎn)生各種炎癥因子，進(jìn)而抑制炎癥反應(yīng)。鎮(zhèn)痛作用機(jī)制研究表明，可能通過提高腦組織及血清NO 含量，因?yàn)镹O 是一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，在外周和中樞不同水平上參與痛覺的調(diào)控。但對于杜鵑花確切的抗炎鎮(zhèn)痛作用機(jī)制及具體成分的分析鑒定有待進(jìn)一步研究。杜鵑花活性提取物藥物的開發(fā)具有廣闊的應(yīng)用前景，本實(shí)驗(yàn)可為抗炎鎮(zhèn)痛藥物的研發(fā)提供堅實(shí)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為后續(xù)進(jìn)一步藥物劑型的開發(fā)及應(yīng)用奠定堅實(shí)的基礎(chǔ)。

表2 杜鵑花對大鼠足趾腫脹的影響（n=10，+s）

表2 杜鵑花對大鼠足趾腫脹的影響（n=10，+s）

注：與模型組相比，*p＜0.01；與低劑量組相比，#p＜0.05；與中劑量組相比，▲p＜0.05.

致炎后不同時間足跖容積（mL）1d 7d 14d 21d空白對照組 0.93±0.55* 0.95±0.42* 0.97+0.26* 1.92±0.43*模型組 2.55±0.23 2.36±0.64 2.25±0.72 2.07±0.86陽性對照組 60 1.02±0.13* 0.99±0.21* 1.03±0.46* 1.19±0.12*低劑量組 30 1.91±0.27* 1.88±0.76 1.98±0.54 1.86±0.95中劑量組 60 1.66±0.42* 1.54±0.22* 1.67±0.14* 1.57±0.35*高劑量組 120 1.06±0.43*#▲1.13±0.33*#▲1.17±0.32*#▲1.08±0.15*#▲組別 劑量（mg/kg）