中藥茉莉聯(lián)合遠(yuǎn)程缺血后適應(yīng)對(duì)急性心肌梗死大鼠心肌保護(hù)作用

欒海蓉 代海兵 王菡

[摘要]目的 探討中藥茉莉聯(lián)合遠(yuǎn)程缺血后適應(yīng)（RIPOC）對(duì)急性心肌梗死大鼠心肌是否有協(xié)同保護(hù)作用。方法 清潔級(jí)SD大鼠46只，復(fù)制大鼠急性心肌梗死模型，隨機(jī)分為四組，即模型組（10只）、中藥茉莉組（12只）、RIPOC組（12只）和聯(lián)合組（中藥茉莉+RIPOC）（12只）;另取10只健康SD大鼠作為假手術(shù)組。通過超聲心動(dòng)檢測心功能指標(biāo)[左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左心室收縮末期容積（LVESV）和左心室舒張末期容積（LVEDV）]，稱重計(jì)算心臟重量指數(shù)（HWI）、左心室質(zhì)量指數(shù)（LVMI），并檢測心肌組織中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量。結(jié)果 中藥茉莉組、RIPOC組和聯(lián)合組的LVEF、SOD含量均高于模型組，LVESV、LVEDV、HWI、LVMI及MDA含量均低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。模型組的LVEF低于假手術(shù)組，HWI和LVMI均高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。模型組的MDA含量高于假手術(shù)組，SOD含量低于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論 中藥茉莉和RIPOC在保護(hù)心肌梗死大鼠的心功能和心室重構(gòu)中存在協(xié)同作用，值得推廣。

[關(guān)鍵詞]心肌梗死模型;中藥茉莉;遠(yuǎn)程缺血后適應(yīng);聯(lián)合干預(yù);丙二醛;超氧化物歧化酶;左心室射血分?jǐn)?shù);左心室質(zhì)量指數(shù)

[中圖分類號(hào)] R965? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2020）1（c）-0004-04

[Abstract] Objective To explore the synergistic protective effect of Chinese medicine Jasmine combined with remote ischemic postconditioning （RIPOC） on myocardium in rats with acute myocardial infarction. Methods Forty-six clean SD rats were used to replicate the model of acute myocardial infarction and randomly divided into four groups， namely the model group （n=10）， the Chinese medicine Jasmine group （n=12）， the RIPOC group （n=12） and the combined group （Chinese medicine Jasmine+RIPOC） （n=12）. Another 10 healthy SD rats were selected as the sham operation group. Cardiac function indicators （left ventricular ejection fraction [LVEF]， left ventricular end-systolic volume [LVESV]， and left ventricular end-diastolic volume [LVEDV]） were measured by echocardiography， cardiac weight index （HWI） and left ventricular mass index （LVMI） were calculated by weighing， and the contents of malondialdehyde （MDA） and superoxide dismutase （SOD） in myocardial tissue were detected. Results The LVEF and content of SOD in the Chinese medicine Jasmine group， RIPOC group and combined group were higher than those in the model group， the LVESV， LVEDV， HWI， LVMI and content of MDA were lower than those in the model group， and the differences were statistically significant （P<0.05 or P<0.01）. The LVEF of the model group was lower than that of the sham operation group， HWI and LVMI were higher than those of the sham operation group， and the differences were statistically significant （P<0.01）. The MDA content in the model group was higher than that in the sham operation group， the SOD content was lower than that in the sham operation group， and the differences were statistically significant （P<0.01）. Conclusion Chinese medicine Jasmine combined with RIPOC has a synergistic effect on the protection of cardiac function and ventricular remodeling in rats with acute myocardial infarction， which is worth promoting.

[Key words] Acute myocardial infarction Model; Chinese medicine Jasmine; Remote ischemic postconditioning; Combined intervention; Malondialdehyde; Superoxide dismutase; Left ventricular ejection fraction; Left ventricular mass index

據(jù)調(diào)查顯示，心腦血管疾病已位列人類死亡病因的“頭號(hào)殺手”，全世界每年死于心腦血管疾病的人數(shù)高達(dá)數(shù)千萬人，居各種死因首位[1]。我國心腦血管疾病患者已經(jīng)超過2.7億人，其中急性心肌梗死位列心血管病死亡原因的第一位，致殘率高、死亡率高、復(fù)發(fā)率高，預(yù)后極差[1-2]。因此開發(fā)具有改善心肌梗死的藥物或干預(yù)手段具有重要的臨床意義。近年來，作為在冠脈缺血后適應(yīng)的基礎(chǔ)上發(fā)展出來的新方法，遠(yuǎn)程缺血后適應(yīng)（remote ischemic postconditioning，RIPOC）正成為新的研究熱點(diǎn)。所謂RIPOC[3-4]，是指在心臟冠脈長時(shí)間恢復(fù)血流之前，對(duì)遠(yuǎn)隔的器官或組織進(jìn)行重復(fù)短暫的缺血再灌注，從而對(duì)心臟起到減輕心肌損傷的作用。聯(lián)合多種干預(yù)手段成為了目前改善急性心肌梗死預(yù)后的研究方向之一。

中藥茉莉作為我國的傳統(tǒng)中藥具有悠久的歷史，植物資源廣泛，是非常有價(jià)值的藥用資源[5-7]。根據(jù)之前研究方法[8]，將茉莉花按照化學(xué)物理性質(zhì)以及極性將提取物分為三個(gè)部位：乙酸乙酯水溶部、乙酸乙酯水不溶部和總黃酮部，篩選出茉莉花中具有擴(kuò)張血管活性的有效部位，結(jié)果證實(shí)，三種不同的中藥茉莉提取物均能夠濃度依賴性地舒張離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)，其舒血管效應(yīng)可能是多種途徑共同作用的結(jié)果。中藥茉莉經(jīng)UPLC-DAD/Q-TOF-MS色譜分析共鑒定出20多種化合物，大部分屬于黃酮類化合物、環(huán)烯醚萜苷，還有異槲皮苷，這三種成分均證實(shí)具有明顯的心肌保護(hù)作用。本研究通過建立大鼠心肌梗死模型，聯(lián)合應(yīng)用中藥茉莉有效提取物和RIPOC，探究兩種干預(yù)措施是否能起到協(xié)同保護(hù)心肌的作用。

1材料與方法

1.1主要材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物? 清潔級(jí)SD大鼠56只，8周齡，雌雄隨機(jī)，體重230～280 g，由牡丹江醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)KYXK（黑）2015007，在屏障環(huán)境中飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)通過牡丹江醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.1.2藥品和試劑? 干茉莉花購自河北安國藥材市場，由南開大學(xué)謝春峰博士鑒定。中藥茉莉花總黃酮部提取物的制備方法見文獻(xiàn)[9-10]。20%烏拉坦（0.5 ml/100 mg，上海山浦化工有限公司）;青霉素（哈藥集團(tuán)）;丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒（批號(hào)：20180131）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒（批號(hào)：20180206）來自南京建成生物工程研究所。

1.1.3儀器? RM6240生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)（成都儀器廠）;HX-300S小動(dòng)物呼吸機(jī)（成都泰盟科技有限公司）;小動(dòng)物專用彩色超聲診斷儀（西門子ACUSON SEQUOIA 512）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1心肌梗死動(dòng)物模型的建立? 分別取46只SD大鼠，禁食12 h后烏拉坦麻醉固定，沿中線暴露氣管，行氣管插管術(shù)后連接小動(dòng)物呼吸機(jī)，給予機(jī)械通氣。啟動(dòng)RM6240生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)，四肢皮下連接心電圖電極，描記Ⅱ?qū)?lián)心電圖。在第3～4肋間隙，自右下至左上2 cm左右切皮，純性分離肌層，暴露肋骨，之后刺破用壁層胸膜，暴露出心臟，在左冠狀動(dòng)脈前降支距主動(dòng)脈根部5 mm結(jié)扎，結(jié)扎后顯示心電圖R波振幅增加，ST段升高，即為造模成功[11]。之后迅速排盡空氣并縫合，術(shù)者應(yīng)在10 min內(nèi)完成手術(shù)以保證存活率。另取10只SD大鼠作為假手術(shù)組，只開胸不結(jié)扎。

1.2.2分組及給藥? 青霉素16萬 U/只抗感染治療3 d后再隨機(jī)分為四組，分別為模型組（10只）、中藥茉莉組（中藥茉莉100 mg/kg）（12只）、RIPOC組（12只）、聯(lián)合組（中藥茉莉100 mg/kg+RIPOC）（12只）。中藥茉莉組灌胃給藥，1次/d;RIPOC組在大鼠后肢根部用止血帶纏繞阻斷血流5 min，之后松懈止血帶恢復(fù)血流灌注5 min，重復(fù)3次，每日在同一時(shí)間點(diǎn)完成缺血和再灌注操作。聯(lián)合組在灌胃給藥中藥茉莉30 min后進(jìn)行RIPOC操作。其余組灌胃等量生理鹽水，所有組均連續(xù)干預(yù)14 d。

1.3觀察指標(biāo)

1.3.1心功能指標(biāo)的檢測? 大鼠干預(yù)結(jié)束后，烏拉坦麻醉后，備皮前側(cè)臥放置手術(shù)臺(tái)上，固定四肢。應(yīng)用西門子小動(dòng)物專用彩色超聲影像系統(tǒng)，將線陣探頭放在胸骨左側(cè)，心臟二維超聲顯像，并選取心室波群M型圖像，分別檢測左心室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）、左心室收縮末期容積（left ventricular end-systolic volume，LVESV）、左心室舒張末期容積（left ventricular end-diastolic volume，LVEDV）。

1.3.2心臟重量指數(shù)（heart weight index，HWI）及左心室質(zhì)量指數(shù)（left ventricular mass index，LVMI）的測定? ? 大鼠稱重（body weight，BW）后麻醉，后迅速開胸摘取心臟，置于4°C冷生理鹽水中沖洗心腔內(nèi)的殘血，濾紙吸干，除去心臟周圍組織和大血管及結(jié)締組織，稱取全心臟重量（heart weight，HW，mg）。再用眼科剪依次剪除左右心房、右心室及相鄰大血管，稱取左心室重量（left ventricular weight，LVW，mg），分別計(jì)算HWI（HWI=HW/BW，mg/g）和LVMI（LVMI=LVW/BW，mg/g），二者作為衡量心臟肥厚程度的指標(biāo)。

1.3.3心肌組織MDA及SOD的測定? 左心室梗死組織剪碎后，加入冷生理鹽水制成10%組織勻漿2 ml，3500 r/min離心取上清液，按試劑盒說明書檢測心肌組織MDA和SOD含量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組心功能指標(biāo)的比較

模型組的LVEF低于假手術(shù)組，LVEDV、LVESV均高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;中藥茉莉組、RIPOC組和聯(lián)合組的LVEF均高于模型組，其中聯(lián)合組最為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;中藥茉莉組、RIPOC組和聯(lián)合組的LVEDV、LVESV均低于模型組，其中聯(lián)合組最顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）;中藥茉莉組、RIPOC組及聯(lián)合組的心功能指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2各組體重、HWI及LVMI的比較

各組的體重比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;模型組的HWI和LVMI均高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;中藥茉莉組、RIPOC組和聯(lián)合組的HWI和LVMI均低于模型組，其中聯(lián)合組最為顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）;中藥茉莉組、RIPOC組及聯(lián)合組的HWI、LVMI比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

2.3各組心肌組織MDA和SOD含量的比較

模型組的MDA含量高于假手術(shù)組，SOD含量低于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;中藥茉莉組、RIPOC組和聯(lián)合組的MDA含量低于模型組，SOD含量高于模型組，其中聯(lián)合組最顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）;聯(lián)合組的MDA含量低于中藥茉莉組和RIPOC組，SOD含量高于中藥茉莉組和RIPOC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表3）。

3討論

對(duì)于急性缺血性心肌梗死，采取聯(lián)合應(yīng)用不同的干預(yù)措施可能會(huì)起到更好的心肌保護(hù)效應(yīng)。具體原因尚不清楚，可能在于聯(lián)合干預(yù)可以刺激更多的心臟保護(hù)因子釋放，或者二者在不同的信號(hào)傳導(dǎo)通路之間相互影響，可以使有效信號(hào)疊加增強(qiáng)。口服給藥與肢體的遠(yuǎn)程缺血刺激是最為簡便并容易實(shí)現(xiàn)的干預(yù)手段。

急性心肌梗死發(fā)生后心肌細(xì)胞受損，導(dǎo)致心肌收縮力下降，加重心肌損傷和心功能惡化，最終導(dǎo)致心力衰竭。為保證心臟收縮功能，心室適應(yīng)性肥厚并擴(kuò)張，心肌肌重和心室容量增加，也就是心室重構(gòu)（ventricular remodeling，VR）的過程[12-15]，是機(jī)體的一種適應(yīng)性反應(yīng)。超聲結(jié)果顯示，模型組的LVEF下降，LVEDV、LVESV上升（P<0.05），提示心肌梗死后有明顯的心室重構(gòu)過程，心功能損傷嚴(yán)重。中藥茉莉組、RIPOC組和聯(lián)合組LVEF均增加，LVEDV、LVESV均有所下降（P<0.05），聯(lián)合組最顯著（P<0.01）。通過計(jì)算，結(jié)果顯示，與模型組比較，中藥茉莉和RIPOC組和聯(lián)合組HWI和LVMI均有不同程度降低，聯(lián)合組下降更為明顯（P<0.01），提示中藥茉莉和RIPOC共同作用在改善心肌梗死大鼠的心功能和心室重構(gòu)中存在協(xié)同作用。

心室重構(gòu)發(fā)生后，心肌缺血缺氧，導(dǎo)致代謝產(chǎn)物堆積，使自由基產(chǎn)生增多，SOD是生物體系中抗氧化酶系的重要組成成員，是機(jī)體關(guān)鍵的抗氧化酶，可以清除體內(nèi)多余的自由基，有效防止氧自由基對(duì)機(jī)體的損害。而MDA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，有細(xì)胞毒性，會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。SOD水平的高低可反映機(jī)體清除自由基的能力，而MDA含量的高低間接反映機(jī)體細(xì)胞受損傷的程度[16-18]。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，各干預(yù)組SOD水平升高的同時(shí)，MDA含量降低，聯(lián)合組最為顯著（P<0.01），提示中藥茉莉和RIPOC在提高機(jī)體抗氧化能力、抑制心室重構(gòu)中，二者同樣具有協(xié)同作用。

綜上所述，中藥茉莉和RIPOC在保護(hù)心肌梗死大鼠的心功能和心室重構(gòu)中存在協(xié)同作用，RIPOC和中藥茉莉兩種干預(yù)方式均具有操作簡便、無創(chuàng)、經(jīng)濟(jì)等的優(yōu)點(diǎn)，聯(lián)合應(yīng)用的保護(hù)心臟效果更好，值得推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Perreli MG，Pagliaro P，Penna C.Ischemia/reperfusion injury and cardioprotective mechanisms：Role of mitochondria and reactive oxygen species[J].World J Cardiol，2011，3（6）：186-200.

[2]Yao YW，Zhang G，Zhang YY，et al.Lipopolysachairde pretreatment protects against ischemia/reperfusion injury via increase of HSP70 and inhibition of NF-κB[J].Cell Stress Chapreones，2011，16（3）：287-296.

[3]石向欣，賀玉曉，趙躍華，等.遠(yuǎn)程缺血后適應(yīng)對(duì)心肌保護(hù)作用的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2019，25（4）：722-727.

[4]蔣欽，向波，于濤，等.重復(fù)遠(yuǎn)程缺血后適應(yīng)對(duì)急性缺血心肌中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植的影響[J].中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志（電子版），2016，6（2）：86-91.

[5]吉哈利，賽曼，鄧?yán)蚯?，?國產(chǎn)紫茉莉?qū)偎幱弥参镅芯窟M(jìn)展[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2018，32（2）：82-86.

[6]林玲.茉莉花藥用研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2016，28（9）：33-35.

[7]趙赫南，劉永志，王鳳昭，等.紫茉莉化學(xué)成分與生物應(yīng)用研究進(jìn)展[J].畜牧與飼料科學(xué)，2016，37（9）：25-27.

[8]Yin Y，Ying X，Luan H，et al.UPLC-DAD/Q-TOF-MS based ingredients identification and vasorelaxant effect of ethanol extract of Jasmine flower[J].Evid Based Complement Alternat Med，2014，2014：707 908.

[9]欒海蓉，尹姣姣，莫韋皓，等.茉莉花水提物對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈的舒張作用及機(jī)制[J].中國藥學(xué)雜志，2010，45（3）：182-186.

[10]欒海蓉，王得利，何志鵬，等.茉莉花提取物的舒血管作用[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2015，34（15）：737-741.

[11]賈茹，祝慧慧，侯廣玉，等.心肌梗死大鼠模型制備方法的研究[J].中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2019，11（7）：159-161.

[12]徐姝，張彥紅.PPARα激動(dòng)劑非諾貝特對(duì)高血壓大鼠心室重構(gòu)的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2018，56（26）：34-37，169.

[13]吳小龍，孫勤暖，彭志平，等.阿司匹林對(duì)心肌肥厚大鼠左心室重構(gòu)的影響及其與炎癥因子的關(guān)系[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，40（6）：560-565.

[14]張霞，張聰，胡楚璇，等.卡維地洛預(yù)防高血壓大鼠心室重構(gòu)的效果及其機(jī)制分析[J].中國藥師，2019，22（3）：422-424.

[15]Hu J，Yan Y，Zhou Q，et al.Effects of renal denervation on the decelopment of post-maocardial infarction heart failure and cardiac autonomic nervous system in rats[J].Int J Candiol，2014：172（3）：e414-e416.

[16]張東風(fēng).丁苯酞聯(lián)合阿托伐他汀對(duì)急性腦梗死患者血流動(dòng)力學(xué)及血清SOD、GSH-Px、NO水平的影響[J].臨床藥物治療雜志，2018，16（3）：37-41.

[17]錢桂鳳，李虹竹，趙瑋璇.火針膏肓穴對(duì)慢性疲勞綜合征大鼠血清SOD、MDA及GSH-Px的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2018，33（8）：3291-3294.

[18]宮健偉，孫喜靈，王超云，等.四君子湯對(duì)脾氣虛模型大鼠血清SOD，CAT和GSH-Px的影響[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2017，28（1）：46-47.

（收稿日期：2019-07-02? 本文編輯：任秀蘭）