杜成興 潘年瓊 楊熟英 霍昕 楊迺嘉
(1.貴州省生物技術(shù)研究開發(fā)基地,貴州 貴陽 550002;2.貴州省科暉制藥廠,貴州 清鎮(zhèn) 551400)
解幽膠囊由5-HMF加輔料制成。5-羥甲基糠醛(5-HMF)是中藥中廣泛存在的化學(xué)成分,在中藥炮制、貯藏、配伍過程中含量變化明顯?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明5-HMF具有抗氧化、改善學(xué)習(xí)記憶、抗過敏、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞、抗炎等藥理作用[1-4]。本研究采用高效液相色譜法對解幽膠囊中的5-HMF進(jìn)行含量測定,以期建立解幽膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[5-9],為解幽膠囊的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。
AUW120D型電子天平(島津儀器蘇州有限公司),AL204型電子天平(梅特勒—托利多儀器(上海)有限公司),Ultimate 3000高效液相色譜儀(美國賽默飛公司)。其他儀器均由貴州省生物技術(shù)研究開發(fā)基地提供。
5-HMF對照品(批號:111626-201610)采購于中國食品藥品檢定研究院。解幽膠囊樣品、藥材及試劑由貴州省生物技術(shù)研究開發(fā)基地提供。
依利特Supersil ODS-B C18柱(250mm×4.60mm,5μm)、流動相為甲醇—水(15:85)、流速為1ml·min-1、柱溫30℃、檢測波長為280nm;進(jìn)樣量10μL。
2.2.1 樣品制備方法
取解幽膠囊混合均勻,稱取樣品0.0318g,置于100ml容量瓶中,加入10%乙醇定容至刻度,搖勻,靜置,得樣品溶液。
2.2.2 對照品制備方法
精密稱取5-HMF對照品10mg,置于100ml容量瓶中,加入10%乙醇定容至刻度,搖勻,靜置,得5-HMF對照品溶液(10.2672μg/ml)。
精密配制6種濃度的5-HMF對照品溶液:2.5668μg/ml、5.1336μg/ml、10.2672μg/ml、20.5344μg/ml、41.0688μg/ml、82.1376μg/ml,分別進(jìn)樣 10μL,以 5-HMF濃度為X軸,峰面積為Y軸,得線性回歸方程。結(jié)果表明,5-HMF在2.5668~82.1376μg/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系,回歸方程為y=70515x-20018(r=0.9999)。
取解幽膠囊適量混合均勻,精密稱取樣品0.0318g。按2.2.1項(xiàng)下制備方法,得樣品溶液,間隔1h進(jìn)樣一次,按2.1項(xiàng)下色譜條件,進(jìn)樣7次,每次10μL,計(jì)算樣品中5-HMF的含量。結(jié)果顯示RSD=0.09%,符合中國藥典要求(RSD<2%),表明供試品在6h內(nèi)穩(wěn)定。
取解幽膠囊混合均勻,精密稱取樣品0.0318g,按2.1項(xiàng)下色譜條件,進(jìn)樣6次,每次10μL,計(jì)算樣品中5-HMF的含量。結(jié)果顯示,RSD=0.79%,符合中國藥典要求(RSD<2%),表明儀器精密性良好。
取解幽膠囊混合均勻,精密稱取樣品0.0318g,按2.1項(xiàng)下色譜條件,進(jìn)樣6次,每次10μL,計(jì)算樣品中5-HMF的含量。結(jié)果顯示,RSD=1.71%,符合中國藥典要求(RSD<2%),表明中間精密度良好。
取解幽膠囊混合均勻,精密稱取樣品6份,每份0.0318g。按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,每次10μL,計(jì)算樣品中5-HMF的含量。結(jié)果顯示,RSD=0.96%,符合中國藥典要求(RSD<2%),表明實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。
取解幽膠囊混合均勻,精密稱取9份,每份0.0318g,分為3組。每組按取樣量的50%、100%、150%分別加入5-HMF對照品,按2.2.2項(xiàng)下制備方法,得樣品溶液,按2.2.1項(xiàng)下色譜條件,進(jìn)樣9次,每次10μL,計(jì)算樣品中5-HMF的含量,結(jié)果見表1。結(jié)果顯示,平均加樣回收率結(jié)果為99.93%,RSD=1.44%,符合中國藥典要求(RSD<2%),表明實(shí)驗(yàn)可行性良好,該方法可用于解幽膠囊的含量測定。
表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果
取3個不同批次中試生產(chǎn)的解幽膠囊混合均勻,每批次稱取2份,每份0.0318 g,按2.2.1項(xiàng)下制備方法,得樣品溶液,按2.1項(xiàng)下色譜條件,進(jìn)樣10μL,計(jì)算樣品中5-HMF的含量,結(jié)果見表2。結(jié)果表明:解幽膠囊中5-HMF的平均含量為32.7310 mg/g,最低為32.5010mg/g。
表2 含量測定實(shí)驗(yàn)結(jié)果
在測定3批解幽膠囊樣品的含量時發(fā)現(xiàn),解幽膠囊中5-HMF的平均含量為32.7310mg/g,最低為32.5010mg/g,考慮到實(shí)際生產(chǎn)過程中含量會有所不同,因此將解幽膠囊中的5-HMF的限量定為:解幽膠囊每包含5-HMF不得少于32mg。經(jīng)過方法學(xué)考察,解幽膠囊中5-HMF在2.5668~82.1376μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系,回歸方程為y=70515x-20018(r=0.9999),加樣回收率為99.93%(RSD<2%),說明本方法專屬性強(qiáng),重現(xiàn)性好,可有效控制解幽膠囊的質(zhì)量,為以后解幽膠囊的進(jìn)一步開發(fā)利用及上市銷售提供了前期基礎(chǔ)。