醫(yī)院多重耐藥菌對(duì)常用消毒劑抗性的研究

林偉 劉雪玉 陳凌暉

隨著近年來臨床帶有侵入性性質(zhì)的診斷、治療操作越來越多，其中大量使用了廣譜抗菌素，導(dǎo)致耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌等致病性耐藥菌日漸增多，由此成為院內(nèi)患者發(fā)生感染的主要致病菌，一方面這些致病菌不僅會(huì)在病患之間交叉感染，另一方面也會(huì)由于附著在醫(yī)院物品表面而發(fā)生交叉感染，所以，在醫(yī)院內(nèi)環(huán)境感染控制的工作中，醫(yī)院環(huán)境清潔也成為了十分重要的內(nèi)容。日常消毒工作中，消毒不徹底、不恰當(dāng)?shù)?，均?huì)導(dǎo)致致病菌對(duì)消毒劑產(chǎn)生耐藥性[1]。不少學(xué)者在臨床領(lǐng)域中，均展開了與多重耐藥菌、消毒劑抗性等相關(guān)的研究，而這主要是因?yàn)槎嘀啬退幘腥竞?，?huì)增加患者疾病治療的難度[2]。為了進(jìn)一步明確醫(yī)院環(huán)境分離致多重耐藥菌情況，及其對(duì)醫(yī)院常用消毒劑的抗性、敏感性情況，為后期制定合理的消毒方案提供依據(jù)，研究內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月2日—2018年1月30日于本院各臨床科室檢出的多重耐藥菌株：銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯桿菌以及鮑曼不動(dòng)桿菌。標(biāo)本采集來源于住院患者接觸醫(yī)院環(huán)境物體表面（病床被褥、床檔等）。

1.2 方法

在消毒劑的選擇上，使用常規(guī)的消毒劑，分醫(yī)務(wù)人員手部作為研究樣本，對(duì)所選取的樣本行細(xì)菌培養(yǎng)分離別為84消毒液、苯扎溴銨、碘伏消毒劑，上述三種常用的消毒劑在院內(nèi)應(yīng)有的有效時(shí)間為7 d。

檢測方法：在檢測過程中，采用中和劑進(jìn)行鑒定試驗(yàn)。試驗(yàn)菌設(shè)為銅綠假單胞菌。84消毒液、碘伏中和劑為濃度為80.2%的吐溫，濃度為0.5%的含硫代硫酸鈉，濃度為0.2%的卵磷脂磷酸鹽緩沖液；苯扎溴銨的中和劑為濃度為80.3%的吐溫，濃度為0.5%的含硫代硫酸鈉，濃度為0.3%的卵磷脂磷酸鹽緩沖液。

菌懸液的制備方法：在新鮮固體瓊脂培養(yǎng)基的接種平板上，直接涂抹從現(xiàn)場采集到的菌株樣本，將培養(yǎng)基接種平板放置在溫度為37℃的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)時(shí)間為24 h。將準(zhǔn)備好的典型菌落接種MH肉湯取出，把接種的平板放在溫度為37℃的環(huán)境中培養(yǎng)24 h，同樣放置在溫度為37℃的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)時(shí)間為6 h。6 h后，將其取出，借助活菌計(jì)數(shù)的方式，使其菌懸液的濃度達(dá)到1.0×107～1.0×109cfu/mL，進(jìn)行備用。

對(duì)最小殺菌濃度進(jìn)行測定：主要使用等比稀釋的方法，將最小的抑菌濃度無菌增長作為最低的稀釋液，選取容量為0.1 mL，將其加入到容量為0.9 mL的中和液中，10 min后取出0.2 mL的混懸液將劑量為0.2 mL的混懸液取出，然后將其接種到瓊脂的培養(yǎng)平板上，將其放在溫度為37℃的環(huán)境中培養(yǎng)48個(gè)小時(shí)，對(duì)培養(yǎng)的結(jié)果進(jìn)行觀察。當(dāng)無細(xì)菌生長的最低稀釋度，可看做是最小殺菌濃度值，該試驗(yàn)需反復(fù)做3次。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察三種消毒劑對(duì)環(huán)境分離致病菌檢出率及各致病菌對(duì)消毒液抗性的影響。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料使用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)數(shù)值反映了實(shí)際頻數(shù)與理論頻數(shù)的吻合程度，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 致病菌檢出情況

本次研究中分離出的耐藥菌包括30株銅綠假單胞菌，15株肺炎克雷伯桿菌，5株鮑曼不動(dòng)桿菌。其中，銅綠假單胞菌檢出的30株，患者被褥檢出率最高為66.67%；肺炎克雷伯桿菌檢出的15株，患者被褥檢出率最高為46.67%；鮑曼不動(dòng)桿菌檢出的5株，患者被褥檢出率最高為60.00%。見表1。

2.2 致病菌對(duì)消毒液最小抑菌與殺菌濃度分布

常用消毒劑對(duì)三種致病菌的最小抑菌與殺菌濃度分布情況，如表2所示。銅綠假單胞菌對(duì)84消毒液有抗性；肺炎克雷伯桿菌對(duì)苯扎溴銨有抗性；鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)84消毒液和苯扎溴銨有抗性，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

在醫(yī)院環(huán)境中，細(xì)菌、真菌等微生物較多[3]，目前，抗菌消毒劑耐藥菌株的種類不斷被創(chuàng)新，數(shù)量也呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢(shì)[4-5]。臨床指出，院內(nèi)致病菌的類型較多，不同的致病菌對(duì)不同的消毒液的抗性和敏感性，存在明顯的差異[6-7]?；谠撗芯砍晒恼撌?，本研究重點(diǎn)分析了醫(yī)院環(huán)境分離致多重耐藥菌對(duì)常用消毒劑抗性。

在本次研究中，通過分析醫(yī)院環(huán)境分離致多重耐藥菌對(duì)常用消毒劑的抗性，首先選取了致病耐藥菌，依據(jù)檢出的數(shù)量，銅綠假單胞菌最多，鮑曼不動(dòng)桿菌最少。由此檢出率可以證實(shí)，目前醫(yī)院內(nèi)環(huán)境中的銅綠假單胞菌在院內(nèi)病原菌中，占比最高，是比較重要和常見的耐藥菌[8]。在此基礎(chǔ)上，從最小抑菌濃度和最小殺菌濃度方面，實(shí)現(xiàn)細(xì)菌對(duì)消毒劑抗性的檢測。本次研究結(jié)果顯示，銅綠假單胞菌在84消毒液檢測方面，分離株明顯高于標(biāo)準(zhǔn)株，說明銅綠假單胞菌對(duì)84消毒液有抗性，對(duì)其他兩種消毒菌有敏感性[9-10]。肺炎克雷伯桿菌在苯扎溴銨檢測方面，分離株明顯高于標(biāo)準(zhǔn)株，說明銅綠假單胞菌對(duì)苯扎溴銨有抗性，對(duì)其他兩種消毒液有敏感性。鮑曼不動(dòng)桿菌在84消毒液隔和苯扎溴銨面的檢測，分離株明顯高于標(biāo)準(zhǔn)株，說明鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)84消毒液隔和苯扎溴銨有抗性，對(duì)碘伏有敏感性[11-12]。由此可以看出，上述三種致病菌對(duì)不同消毒劑均有一定的抗性，需要重視醫(yī)院對(duì)對(duì)消毒劑的應(yīng)用[13-14]。經(jīng)過本次研究，本人認(rèn)為日后醫(yī)院要進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)環(huán)境表面的清潔工作，醫(yī)務(wù)人員要保持手清潔。

表1 院內(nèi)三種多重耐藥致病菌檢出情況 [例（%）]

表2 常用消毒劑對(duì)三種致病菌的最小抑菌與殺菌濃度分布情況（株）

綜上所述，醫(yī)院環(huán)境有多重耐藥菌，不同耐藥菌對(duì)不同消毒劑產(chǎn)生的抗性和敏感性不同，建議臨床依據(jù)平時(shí)對(duì)耐藥菌的監(jiān)測情況，適時(shí)調(diào)整消毒方案，做好醫(yī)院環(huán)境和醫(yī)護(hù)人員手部的清潔。