馬藍(lán)多糖和總糖提取液含量的測定

楊文學(xué)

貴州省黎平縣肇興鎮(zhèn)初級中學(xué) 貴州 黎平557300

1 引言

黔東南蘊(yùn)藏著豐富的植物資源，苗侗民族從馬藍(lán)、蓼藍(lán)、菘藍(lán)、木藍(lán)等植物中可以提取靛藍(lán)色素，主要用于靛染。其實(shí)，靛藍(lán)還是一種優(yōu)良的中醫(yī)藥，在治療小兒癲癇、口舌生瘡、熱毒、喉痹、發(fā)斑等方面有顯著的效果[1]。

王艷[2]從靛藍(lán)中提取分離出了十種化合物，并分析了它們的化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)。李東[3]等人研究了靛藍(lán)的陣痛和抗炎藥效，證實(shí)靛藍(lán)具有一定的陣痛、抗炎的效果。為進(jìn)一步研究靛藍(lán)的化學(xué)成分，拓寬靛藍(lán)的利用價(jià)值，我們以黔東南地區(qū)植物馬藍(lán)為原料，對其中的多糖、總糖含量進(jìn)行測定。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 材料、儀器與試劑 材料：馬藍(lán)葉(新鮮，采至貴州黎平縣肇興侗寨農(nóng)戶種植地)。

儀器：FA2004電子分析天平(上海良平儀表有限公司)、UV-2550紫外-可見分光光度計(jì)(日本島津)、202-2電熱恒溫干燥箱(上海和呈儀器制造有限公司)、R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、SHZ-III型循環(huán)水真空泵(上海亞榮生化儀器廠)、恒溫水浴鍋。

試劑：苯酚、硫酸、乙醇、無水葡萄糖，均為AR級。

2.2 靛藍(lán)的提取 從植物馬藍(lán)中吸附提取靛藍(lán)的方法見參考文獻(xiàn)[4]。用電子分析天平準(zhǔn)確稱取5g靛藍(lán)粉末，置于圓底燒瓶中，加入蒸餾水100 mL，用加熱套加熱回流提取2小時(shí)，趁熱過濾，再重復(fù)提取2小時(shí)，殘?jiān)谜麴s水潤洗，將潤洗后的液體和之前回流的液體混合，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀加熱濃縮，將濃縮后的液體轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，稀釋至刻度，即得到靛藍(lán)。

2.3 試樣的制備靛藍(lán)多糖試樣的制備：在盛有2.0 mL靛藍(lán)溶液的試管中，加入10 ml 80%的乙醇，離心30 min后，取底部沉淀轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋到刻度線，搖勻使其混合，在精密量取稀釋液1 mL到試管中，加入1 mL水，再向其中加入1 mL 4%的苯酚，搖勻，快速加入7 mL濃硫酸，搖勻，把得到的液體放在在40℃的水浴鍋中保溫30 min，再把保溫后的液體取出，放到冷水浴中，使它冷卻30 min，得到的即為靛藍(lán)多糖的試樣。

靛藍(lán)總糖試樣的制備：在盛有3.0 mL靛藍(lán)溶液的100 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，再移取該溶液2.0 mL，慢慢向其中滴入1 mL 4%的苯酚溶液并搖勻，立刻加入7 mL 濃硫酸溶液并搖勻。在40℃的水浴中加熱30 min，然后把它取出來，轉(zhuǎn)移到零度以下的冰水浴中，冷卻30 min，得到的溶液就是靛藍(lán)總糖的試樣。

2.4 測定條件的選擇在盛有2.0 mL蒸餾水的試管中，滴加1 mL 4%的苯酚溶液，立刻加入7 mL濃硫酸，震蕩之后放入40℃的恒溫水浴鍋中，加熱30 min后移至冰水浴中，冷卻30 min后取出，即得對照液。取該試液適量，測定440n m～510n m 范圍內(nèi)的吸光度。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將無水葡萄糖在105℃下烘干至恒重，準(zhǔn)確稱取樣品50.0 mg于100 mL容量瓶中，用蒸餾水溶解，并稀釋至刻度。分別移取葡萄糖溶液0.0 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL于50 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度并搖勻，配制成不同濃度梯度的溶液。用紫外-可見分光光度計(jì)測定各溶液在最大吸收波長處的吸光度，測定前按2.4 操作，加入苯酚溶液和濃硫酸。以濃度c對吸光度A作圖，繪制靛藍(lán)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.6 試樣中糖含量的測定按2.5 操作，用紫外分光光度計(jì)測定多糖試樣和總糖試樣在最大吸收波長處的吸光度。

3 結(jié)果與分析

3.1 最大吸收波長的確定表1給出了按2.4 操作，對照液在440n m～510n m 范圍內(nèi)的吸光度值。

表1 波長與吸光度的關(guān)系表

由表中可以看出，在440nm-510nm 波長范圍內(nèi)，吸收度隨著波長的變化關(guān)系呈拋物線，在波長為490n m處取得極大值，因此選取490n m為測定的最大吸收波長。

3.2 葡萄糖溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制根據(jù)2.5 的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以吸光度A為縱坐標(biāo)，以葡萄糖溶液濃度c為橫坐標(biāo)作圖，得到葡萄糖溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1 葡萄糖溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.3 多糖和總糖的測定 表2為試樣中多糖和總糖的測定結(jié)果。每個(gè)試樣做3次平行實(shí)驗(yàn)，取平均值。

表2 靛藍(lán)中總糖和多糖含量測定結(jié)果(n=3，%)

4 結(jié)論

(1)采用苯酚-硫酸比色法成功地測定了靛藍(lán)中多糖和總糖含量，操作簡便、靈敏度高、重現(xiàn)性較好；

(2)水浴加熱時(shí)間、冰水浴時(shí)間是影響測定結(jié)果準(zhǔn)確性的重要因素；

(3)n=3，植物馬藍(lán)中總糖含量為67.82%，多糖含量為5.22%。