鹽酸氟西汀膠囊仿制藥與原研藥的溶出度一致性評價

郭燕燕 丁云暉 張婷 金拓

1上海交通大學藥學院 （上海 200240）

2上海上藥中西制藥有限公司 （上海 201806）

鹽酸氟西汀是全球第一個上市的選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑（SSRIs）的抗抑郁藥物［1］，由美國禮來公司率先研制成功，1986年底在比利時首次上市用于抑郁癥的治療，商品名為Prozac；1987年獲得美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準，于1988年1月進入美國市場，后于1995年4月進入中國市場。鹽酸氟西汀適應癥主要為抑郁癥、強迫癥和神經(jīng)性貪食癥。2016年3月，國家正式開啟了仿制藥質(zhì)量與療效的一致性評價工作［2］；溶出度不僅是藥物質(zhì)量控制的體外指標，更是評價藥物在體內(nèi)釋放和吸收的有效手段。對于仿制藥來說，與原研藥比較在pH為1.0～7.0范圍內(nèi)的溶出行為，若均一致，則體內(nèi)生物不等效的概率是極低的［3］。文獻資料表明，關(guān)于鹽酸氟西汀膠囊溶出曲線的測定和溶出曲線方法研究的文獻很少，因此，參照《中華人民共和國藥典》（2015年版），建立鹽酸氟西汀膠囊溶出曲線測定方法，考察在4中不同介質(zhì)中的溶出行為，并與原研藥進行對比，為鹽酸氟西汀膠囊仿制藥的一致性評價工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

SOTAX溶出試驗儀、1260系列高效液相色譜儀、紫外檢測器、1200型二極管陣列檢測器（DAD）和色譜工作站，美國安捷倫科技公司；AL104電子天平、SevenEasy S20精密pH計，梅特勒-托利多公司。

鹽酸氟西汀工作用對照品（自制，批號為GB02-014，w=99.58%）；鹽酸氟西汀膠囊原研藥 （法國Patheon France生產(chǎn)，批號為 4525A，5545A）；鹽酸氟西汀膠囊 （自制， 批號為 T160552，T160553，T160554）。

甲醇（色譜純），賽默飛世爾科技（中國）有限公司；磷酸（分析純）、三乙胺（色譜純）、四氫呋喃（色譜純），國藥集團化學試劑有限公司；純化水，自制。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse Plus C8（4.6 mm×250 mm，5 μm）或效能相當?shù)纳V柱，辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：三乙胺緩沖溶液（取三乙胺10 mL，加980 mL水，搖勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH至6.0，用水稀釋至1000 mL)-甲醇-四氫呋喃（體積比為 62∶8∶30）；紫外檢測波長：227 nm；進樣量：10 μL。

1.2.2 溶液配制

1.2.2.1 對照品溶液

取鹽酸氟西汀對照品適量，精密稱定，分別用相應的溶出介質(zhì)溶解并定量稀釋，制成每1 mL中約含44滋g鹽酸氟西汀的溶液，作為對照品溶液。

1.2.2.2 供試品溶液

取樣品每批12粒、溶出介質(zhì)500 mL，按溶出度與釋放度測定法[2015年版《中華人民共和國藥典》0931通則第二法（槳法）]進行溶出度試驗，轉(zhuǎn)速為50 r/min，溫度為 37.0℃，分別于 10，15，20 及 30 min時，取溶出液10 mL過濾（及時補充相同溫度、相同體積的溶出介質(zhì)），取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.2.3 溶出介質(zhì)的選擇

鹽酸氟西汀膠囊已被收入美國藥典（USP）標準和《中華人民共和國藥典標準》（2015 年版）［4］，標準中溶出度測定方法均為槳法，轉(zhuǎn)速為50 r/min，溶出介質(zhì)為900 mL水；區(qū)別在于兩國標準規(guī)定的限度不同，USP標準限度為30 min溶出不低于80%，中國藥典標準為15 min溶出不低于80%。參考已有標準和相關(guān)文獻［5］，擬采用槳法和溶出介質(zhì)體積500 mL進行溶出度試驗。

鹽酸氟西汀為高溶解性、高滲透性藥物，屬于生物藥劑學分類系統(tǒng)（BCS）Ⅰ類，其解離常數(shù)（pKa）為9.62。 根據(jù)相關(guān)文獻報道［5］，選定溶出介質(zhì)為水、0.1 mol/L鹽酸溶液、醋酸鹽緩沖液（pH=4.5）和磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）。 在（37.0±0.5）℃下，用以上 4 種介質(zhì)作為溶劑，制備鹽酸氟西汀飽和溶液，經(jīng)高效液相色譜（HPLC）法測得準確質(zhì)量濃度，計算鹽酸氟西汀在4種介質(zhì)中的溶解度，進而考察是否達到漏槽條件，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸氟西汀飽和溶解度

取樣品原研藥（批號：4525A）適量，分別采用上述4種溶出介質(zhì)，依法測定，計算各時間點的累積溶出度并繪制溶出曲線，詳見圖1。

表1和圖1表明，原研藥在溶出介質(zhì)水、0.1 mol/L鹽酸溶液、醋酸鹽緩沖液（pH=4.5）和磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）中具有較好的溶解性，均達到漏槽條件。因此，4種介質(zhì)可以直接作為仿制藥與原研藥進行溶出比較的溶出介質(zhì)。

1.2.4 轉(zhuǎn)速的選擇

圖1 原研藥在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線

采用槳法，對75 r/min和50 r/min進行對比，在選定的水中測定溶出度，繪制溶出曲線，結(jié)果見圖2。圖2顯示，采用75與50 r/min進行溶解的溶出曲線無明顯差異，說明低轉(zhuǎn)速即可達到分析要求，且藥典標準為50 r/min，因此，選擇低轉(zhuǎn)速50 r/min即可。

圖2 原研藥在不同轉(zhuǎn)速下的溶出曲線

2 結(jié)果與討論

2.1 方法學考察

2.1.1 線性關(guān)系考察

精密稱定鹽酸氟西汀原料（批號：151001）適量，分別用水、0.1 mol/L鹽酸溶液、pH=4.5的醋酸鹽緩沖液、pH=6.8的磷酸鹽緩沖液溶解并定量稀釋制成一系列質(zhì)量濃度的溶液，照“1.2.1”項下色譜條件，精密量取上述溶液各10 mL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸。結(jié)果表明，在9.04～63.28滋g/mL范圍內(nèi)，鹽酸氟西汀質(zhì)量濃度與峰面積線性關(guān)系良好。具體回歸方程與線性范圍見表2。

表2 回歸方程與線性范圍

2.1.2 重復性試驗

取自制樣品（批號：T160554）適量，按“1.2.2”項下方法制備供試品溶液，同法操作6份。同法制備鹽酸氟西汀對照品溶液。精密量取上述溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察重復性。檢測結(jié)果表明水、0.1 mol/L鹽酸溶液、pH=4.5的醋酸鹽緩沖液、pH=6.8的磷酸鹽緩沖液中的相對標準偏差（RSD）分別為 1.99%，2.09%，1.08%和 1.93%，表明本方法重復性良好。

2.1.3 穩(wěn)定性試驗

取上述飽和供試品溶液，分別于室溫下放置0，2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24 h 后測定鹽酸氟西汀含量，考察溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，水、0.1 mol/L鹽酸溶液、pH=4.5醋酸鹽緩沖液、pH=6.8磷酸鹽緩沖液等4種溶出介質(zhì)中的RSD分別為0.14%、0.11%、0.12%和0.07%，表明供試品溶液在4種溶出介質(zhì)中室溫下24 h穩(wěn)定。

2.1.4 回收率試驗

精密稱取鹽酸氟西汀原料(批號：151001)適量，各置于100 mL容量瓶中，加入空白輔料溶液，分別按鹽酸氟西汀膠囊標示量 （以氟西汀計20 mg）的80%，100%，120%，加水、0.1 mol/L 鹽酸溶液、pH=4.5的醋酸鹽緩沖液以及pH=6.8的磷酸鹽緩沖液配制一系列不同質(zhì)量濃度的供試品溶液，采用HPLC法測定鹽酸氟西汀的含量，并計算其回收率，結(jié)果如表3所示。

表3 回收率實驗結(jié)果

2.2 溶出曲線繪制

取 3批樣品 （批號分別為 T160552，T160553，T160554）和 1批原研藥（批號：55445A）各 12 片，取“1.2”項下4種溶出介質(zhì)適量，分別按“1.2.2”項下方法制備供試品溶液；取出上述供試品溶液和“1.2.2.1”所述對照品溶液各適量，采用HPLC法測定并計算各時間點的累積溶出度，繪制溶出曲線，如圖3所示。

2.3 溶出曲線相似性評價

按照 《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則》，比較自制樣品與原研藥的溶出曲線相似性。因為自制樣品與原研藥在15 min內(nèi)的平均溶出度均不低于85%，所以可認為自制樣品與原研藥在4種溶出介質(zhì)中的溶出行為相似。

3 結(jié)論

經(jīng)過溶出介質(zhì)選擇、轉(zhuǎn)速選擇等方法的建立以及驗證，結(jié)果表明文中所述HPLC法適用于鹽酸氟西汀膠囊的溶出度測定；鹽酸氟西汀膠囊仿制藥與原研藥的體外溶出曲線具有相似性，表明其質(zhì)量一致性較好。

圖3 鹽酸氟西汀膠囊自制樣品和原研藥在4種溶出介質(zhì)中的溶出曲線