糞便標(biāo)本采取乳膠凝集檢測技術(shù)對沙門菌篩查的意義研究

常 鑫

（沈陽市第一人民醫(yī)院 檢驗科細菌室，遼寧 沈陽 110041）

沙門菌檢驗耗時比較長，一般需要5～7 d，由于其程序比較多，主要包括：前增菌、選擇性增等。因此，如何提高沙門菌檢測的速度，優(yōu)化沙門菌檢驗流程，一直是檢驗工作的重點。檢驗人員表示，如果可以菌落范圍縮小，其篩查率就會得到提高，工作量減輕。為了縮短治療時間，提高檢測的準(zhǔn)確率，乳膠凝集技術(shù)研制出來。目前，乳膠凝集試驗技術(shù)成熟，效果好，準(zhǔn)確率非常高，國內(nèi)外有許多報道。乳膠凝集法的特點為，使用人工大分子乳膠顆粒標(biāo)，可以對樣本進行準(zhǔn)確的標(biāo)記，檢測人員肉眼可見抗原與試劑的凝集反應(yīng)。嚴(yán)格按照說明說操作，需要2 min。操作簡潔、不需要設(shè)備、可疑廣泛使用。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本：肛拭子從廣州市天河區(qū)體檢者中采集。

1.2 試劑：HKM沙門菌乳膠凝集試劑盒；SC增菌液；SS瓊脂平板；三糖鐵培養(yǎng)基；TSA平板；API 20E細菌鑒定條。

1.3 方法

1.3.1 可疑菌落分離：取體檢者肛拭子放入5 mL SC 增菌液中，進行選擇性增菌，取1標(biāo)準(zhǔn)環(huán)選擇性增菌液劃線于SS瓊脂平板，（36±1）℃培養(yǎng)24 h。

1.3.2 可疑菌落驗證：從平板中挑取可疑菌落接種于TSA平板中，進行分離純化。然后挑取單菌落分別同時進行以下實驗。

2 結(jié)果

本實驗對104株可疑菌落進行試驗，用API 20E最終確認陽性的有35株。乳膠凝集試驗陽性的有36株，出現(xiàn)2例假陽性，乳膠凝集試驗陰性的有68株，即出現(xiàn)1例假陰性，104 株可疑菌落接種于三糖鐵斜面，試驗陽性的有93株，出現(xiàn)58例假陽性。試驗陰性的有11株，其中確證陰性的有11株，發(fā)現(xiàn)沙門菌乳膠凝集試劑盒陽性真確率高。見表1。

3 討 論

研究顯示，沙門菌乳膠凝集試驗具有非常高的靈敏度及特異性，對于陰性菌落篩查率高，菌落識別的準(zhǔn)確度也非常高，是目前為止安全有效的篩查方法[1]。而三糖鐵試驗假陽性率比較高，細菌培養(yǎng)時間比較長。沙門菌乳膠凝集試驗耗時短，并且應(yīng)用廣泛。目前已經(jīng)有報道沙門菌乳膠凝集試驗應(yīng)用于食品、飼料中，結(jié)果準(zhǔn)確率非常高。沙門菌乳膠凝集試劑主要的作用原理為，帶有活性的乳膠顆粒表面與沙門菌特異性抗原相結(jié)合，特異性的復(fù)合多價抗血清。沙門菌菌懸液混合后，乳膠顆粒迅速做出反應(yīng)，發(fā)生凝集，對對沙門菌檢測廣泛，涵蓋部分無動力的沙門菌，使用沙門菌乳膠凝集試劑盒檢測99%以上的沙門菌，特定性高，避免漏檢[2]。并且沙門菌乳膠凝集試劑檢測可以長時間保存腸桿菌科的培養(yǎng)物，并且非特異性凝集性高，降低假陽性，有效的避免檢測保存沙門菌培養(yǎng)物時間過長出現(xiàn)的假陰性。研究顯示，雖然沙門菌乳膠凝集試劑盒的檢出率高，但是也會出現(xiàn)檢測不出結(jié)果的情況發(fā)生。會有1%左右的有動力的沙門菌及部分無動力沙門菌檢測不出來，因此在操作過程中，如果有可疑菌落不凝集的情況，應(yīng)該進行進一步檢查，明確診斷。有文獻記載乳膠凝集試劑可直接用于選擇性增菌液篩選，但是，筆者在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，干擾較多，假陽性較高，因此不可應(yīng)用于選擇性曾菌液的篩選?？梢允褂闷桨宸蛛x可疑菌落，之后使用乳膠凝集試劑，準(zhǔn)確性好，節(jié)約時間和成本[3]。羅玲等[4]采用乳膠凝集試驗快速檢測腸出血性大腸桿菌O157∶H7的研究中發(fā)現(xiàn)，采取乳膠凝集試驗可以快速的檢測出血性大腸桿菌準(zhǔn)確性高，假陰性低，并且操作過程中肉眼可見，敏感性，特異性均比較高。楊寧等[5]采用乳膠凝集檢測技術(shù)用于沙門菌快速篩選的研究中發(fā)現(xiàn)，乳膠凝集檢測技術(shù)特異性、敏感性均非常高，試驗過程中只有1例假陽性出現(xiàn)，陽性檢出率高，準(zhǔn)確率高，值得在臨床推廣。以上研究與本研究結(jié)果相同。從本實驗可以看出，本實驗對104株可疑菌落進行試驗，用API20E最終確認陽性的有35株。乳膠凝集試驗陽性的有36株，出現(xiàn)2例假陽性，乳膠凝集試驗陰性的有68株，即出現(xiàn)1例假陰性，104株可疑菌落接種于三糖鐵斜面，試驗陽性的有93株，出現(xiàn)58例假陽性。試驗陰性的有11株，其中確證陰性的有11株，發(fā)現(xiàn)沙門菌乳膠凝集試劑盒陽性真確率高。

表1 乳膠試驗篩選和三糖鐵檢測情況比較

綜上所述，采取乳膠凝集試驗，陽性準(zhǔn)確率高，并且耗時時間短，比傳統(tǒng)的三糖鐵試驗準(zhǔn)確率高，值得在臨床推廣。