糖尿病合并肺結(jié)核患者血miR-144的表達(dá)水平及意義

陳再旺 謝瑞玉

糖尿病、肺結(jié)核為2種常見慢性疾病，2型糖尿病合并肺結(jié)核發(fā)生率不斷上升[1]，糖尿病感染肺結(jié)核相比非糖尿病人群風(fēng)險(xiǎn)大。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)分布在基因組非編碼區(qū)，屬于單鏈小分子RNA，參與細(xì)胞生長、分化等生理過程。miRNA可作為相關(guān)疾病診斷標(biāo)志物[2-4]，miR-144被發(fā)現(xiàn)在結(jié)核病人群中高表達(dá)[5]；同時(shí)，血清miR-144表達(dá)是2型糖尿病獨(dú)立預(yù)測因子[6]。本研究旨在觀察糖尿病合并肺結(jié)核患者miR-144表達(dá)情況，分析miR-144在糖尿病合并肺結(jié)核患者診治中的臨床意義，為臨床提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本市二甲及以上醫(yī)院2018年1月至2019年5月收治的肺結(jié)核患者75例，其中男性44例，女性31例；年齡45～82歲，平均(60.35±11.08)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)體格檢查、胸部X線片、結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)等確診為肺結(jié)核；②均為初治患者；③入組前未行抗結(jié)核干預(yù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并免疫性疾病；②肝腎功能嚴(yán)重障礙；③惡性腫瘤；④近3個(gè)月有激素、免疫相關(guān)藥物使用史；⑤有糖尿病并發(fā)癥；⑥非結(jié)核分枝桿菌肺?。虎呔癞惓?、癲癇。剔除中途退出者。其中糖尿病合并肺結(jié)核32例(糖尿病組)，既往有糖尿病史，糖尿病診斷依據(jù)中國2型糖尿病防治指南(2013年版)[7]；單純肺結(jié)核43例(肺結(jié)核組)；選擇同期年齡、性別與肺結(jié)核患者相匹配的健康體檢人員30例為對(duì)照組。見表1。

表1 3組研究對(duì)象一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 治療方法 全部肺結(jié)核患者接受2HRZE/4HR方案干預(yù)，其中H為異煙肼，R為利福平，Z為吡嗪酰胺，E為乙胺丁醇，按照藥物說明書或醫(yī)囑用藥。同時(shí)患者接受保肝治療。對(duì)于糖尿病合并肺結(jié)核患者，抗結(jié)核治療的同時(shí)給予胰島素干預(yù)。

1.2.2 血miR-144、血糖指標(biāo)檢測 肺結(jié)核患者治療前1天、治療1個(gè)月后次日清晨空腹采集患者外周血2 mL，對(duì)照組人員于體檢當(dāng)日清晨空腹抽取外周血，肝素抗凝，30 min內(nèi)將全血放入含有Trizol(美國GIBCO公司)、研磨珠凍存管中，震蕩均勻后保存到-70℃冰箱(美國FORMA公司的超低溫冰箱)內(nèi)；通過反轉(zhuǎn)錄-熒光定量RCR法(美國ABI公司的ABI7500熒光定量PCR儀)檢測血miR-144表達(dá)水平，反應(yīng)體系：預(yù)變性95℃ 300 s，變性、延伸95℃ 10 s，60℃、72℃均20 s，共計(jì)40個(gè)循環(huán)。以U6為內(nèi)參，其上、下游擴(kuò)增引物序列分別為5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’、5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’，miR-144上、下游擴(kuò)增引物序列分別為5’-ATCCAGTGCGTGCGTGTCGTG-3’、5’-TGCTTATACAGTATAGATG-3’。通過相對(duì)定量法計(jì)算血miR-144相對(duì)表達(dá)量。另外治療前1天、治療1個(gè)月后通過葡萄糖氧化酶法測定糖尿病組患者外周血空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)、餐后2小時(shí)血糖(two hours postprandial blood glucose，2 h PBG)水平。

1.3 觀察指標(biāo) ①記錄并比較3組對(duì)象外周血FBG、2 h PBG、miR-144相對(duì)表達(dá)量；②記錄糖尿病組、肺結(jié)核組肺空洞比例、治療前后血miR-144表達(dá)水平、血糖水平；③根據(jù)肺空洞與否分組，觀察兩組患者治療前后血miR-144表達(dá)情況。

2 結(jié)果

2.1 3組研究對(duì)象治療前相關(guān)指標(biāo)比較 糖尿病組肺空洞率高于肺結(jié)核組，F(xiàn)BG、2 h PBG、血miR-144表達(dá)水平均高于肺結(jié)核組與對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組研究對(duì)象治療前相關(guān)指標(biāo)比較

注：-表示未統(tǒng)計(jì)；FBG為空腹血糖，2 h PBG為餐后2小時(shí)血糖；與對(duì)照組比較，*P<0.05；與肺結(jié)核組比較，#P<0.05

2.2 兩組患者治療前后血miR-144表達(dá)、血糖水平 糖尿病組治療前、治療1個(gè)月后血miR-144表達(dá)、FBG、PBG水平均高于肺結(jié)核組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與治療前比較，糖尿病組治療1個(gè)月后血miR-144表達(dá)、FBG、PBG水平均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；肺結(jié)核組治療前后FBG、PBG水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；兩組治療前后miR-144差值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而治療前后FBG、PBG差值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者治療前后miR-144表達(dá)、血糖水平比較

注：與同組治療前比較，*P<0.05

2.3 有肺空洞組與無肺空洞組治療前后血miR-144表達(dá)水平比較 有肺空洞組治療前、治療1個(gè)月后血miR-144表達(dá)水平均高于無肺空洞組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與治療前比較，治療1個(gè)月后血miR-144表達(dá)水平均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組治療前后miR-144差值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 有無肺空洞患者血miR-144表達(dá)水平比較

注：與同組治療前比較，*P<0.05

2.4 miR-144表達(dá)水平與血糖水平的相關(guān)性分析 Pearson分析血miR-144表達(dá)水平與FBG、2 h PBG均正相關(guān)(r=0.692、0.704，P<0.05)。見圖1。

圖1糖尿病合并肺結(jié)核患者miR-144表達(dá)水平與血糖水平的相關(guān)性分析

3 討論

糖尿病糖脂代謝異常會(huì)影響機(jī)體免疫能力，除了導(dǎo)致機(jī)體抵抗能力降低外，還會(huì)使機(jī)體修復(fù)能力變?nèi)鮗8]，為細(xì)菌生長、繁殖創(chuàng)造條件，加上肺部血容量較為豐富，增加了結(jié)核菌感染風(fēng)險(xiǎn)；另一方面，肺結(jié)核會(huì)加重糖脂代謝異常，不利于血糖控制。近年來，臨床2型糖尿病合并肺結(jié)核發(fā)生人數(shù)增多，兩者相互影響，治療難度大。

近年來，關(guān)于miRNA研究較多，F(xiàn)u等[9]發(fā)現(xiàn)，結(jié)核患者血液中檢測出miRNA 1 223種，其中miRNA表達(dá)上調(diào)59種、下調(diào)33種，認(rèn)為miRNA對(duì)結(jié)核診斷有一定的價(jià)值。miR-144調(diào)控作用多，對(duì)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子-α、干擾素-γ有一定的抑制作用，阻斷T淋巴細(xì)胞增殖。目前，關(guān)于miR-144在糖尿病或/和肺結(jié)核中的表達(dá)及機(jī)制研究較少。本研究結(jié)果顯示，血miR-144表達(dá)水平上從高到低分別為糖尿病合并肺結(jié)核患者、單純肺結(jié)核患者、健康體檢人員，存在顯著差異。分析原因可能為，miR-144除了能調(diào)控胰島素靶受體外，還能對(duì)胰島素基因的表達(dá)產(chǎn)生影響，促使胰島素受體底物-1抗體表達(dá)降低，易產(chǎn)生胰島素抵抗。有學(xué)者[10]發(fā)現(xiàn)，miR-144可靶向作用于Atg4a-3’ UTR，抑制其表達(dá)，制約細(xì)胞自噬能力，這可能是結(jié)核分枝桿菌感染的一個(gè)機(jī)制。

肺空洞形成與結(jié)核桿菌感染能力、機(jī)體免疫功能有關(guān)，結(jié)核桿菌毒力強(qiáng)，產(chǎn)生的變態(tài)反應(yīng)也較強(qiáng)，一旦機(jī)體免疫功能下降，此時(shí)若被結(jié)核桿菌感染，則易導(dǎo)致肺組織壞死。本研究結(jié)果顯示，糖尿病合并肺結(jié)核患者相比單純肺結(jié)核出現(xiàn)肺空洞比例大，與郭星榮等[11]研究一致。這可能是因?yàn)樘悄虿『喜⒎谓Y(jié)核患者機(jī)體免疫功能進(jìn)一步下降，加上糖脂代謝異常，加重病情，增加肺空洞風(fēng)險(xiǎn)[12]。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)，有肺空洞相比無肺空洞患者血miR-144表達(dá)水平高，可見有肺空洞患者血miR-144高表達(dá)。兩組患者治療后血miR-144表達(dá)水平比治療前顯著下降，提示血miR-144可隨病情的好轉(zhuǎn)而下降，且與FBG、2 h PBG水平正相關(guān)，提示血miR-144表達(dá)水平可能與血糖控制有關(guān)。此外，糖尿病合并肺結(jié)核相比單純肺結(jié)核治療前、治療后血miR-144表達(dá)水平及其差值均顯著高，可見糖尿病可能加重肺結(jié)核病情，臨床需預(yù)防糖尿病或積極降血糖處理。由于目前國內(nèi)關(guān)于血miR-144在肺結(jié)核合并糖尿病中的表達(dá)及相關(guān)研究少，關(guān)于其機(jī)制還不清楚，需日后進(jìn)一步研究。

綜上，糖尿病合并肺結(jié)核患者血miR-144表達(dá)水平升高，其表達(dá)水平與FBG、2 h PBG水平正相關(guān)，血miR-144可反映糖尿病合并肺結(jié)核患者疾病轉(zhuǎn)歸。