HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合TCT在老年婦女宮頸疾病診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值

宮頸癌是常見惡性腫瘤，對女性健康造成嚴(yán)重威脅，該疾病的發(fā)生發(fā)展比較緩慢，早期檢查發(fā)現(xiàn)癌前病變，可以有效預(yù)防宮頸癌的發(fā)生[1]。新柏氏液基薄層細(xì)胞檢測(TCT)是對宮頸細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷[2]，人乳頭瘤病毒(HPV)持續(xù)感染可以通過上調(diào)HPV E6/E7腫瘤蛋白的表達(dá)導(dǎo)致癌癥發(fā)生，通過檢測HPV E6/E7腫瘤蛋白的表達(dá)可進(jìn)行疾病嚴(yán)重程度判斷[3]。我們此次研究采用HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合TCT對疑似宮頸癌前病變病人進(jìn)行檢查，分析聯(lián)合應(yīng)用在診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015～2017年連云港市婦幼保健院收治的疑似宮頸病變病人98例，年齡62～79歲，平均(69.4±4.3)歲;孕次1～5次，平均 (3.2±0.3)次;產(chǎn)次1～3次，平均 (1.8±0.6)次。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床表現(xiàn)為陰道排液、接觸性出血以及陰道異常出血等；(2)在入組前3 d未陰道給藥；(3)對于本次研究內(nèi)容知情，并且在同意書上簽字。本次研究是在獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的前提下開展。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床資料不完整；(2)在入組前曾接受陰道給藥方式治療；(3)已經(jīng)明確宮頸上皮病變或子宮內(nèi)腫瘤；(4)病人存在精神障礙或溝通障礙；(5)不愿參與本次研究。

1.2 方法

1.2.1 TCT：主要收集病人宮頸管以及宮頸外脫落細(xì)胞，將收集到的樣本放置于事先準(zhǔn)備好的小瓶中，離心處理后，對上皮細(xì)胞、炎癥細(xì)胞、黏液進(jìn)行分離保存，對其進(jìn)行歸類處理。采用高精密過濾器實(shí)施操作，對細(xì)胞薄層進(jìn)行染色處理，然后進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查。采用全自動(dòng)液基細(xì)胞制片機(jī)進(jìn)行細(xì)胞均化、轉(zhuǎn)移、追片以及固定、染色等操作，檢測采用美國liquid protest系統(tǒng)進(jìn)行，根據(jù)國際癌癥協(xié)會(huì)在2001年推薦的TBS分類標(biāo)準(zhǔn)對細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果進(jìn)行分類[4]：(1)未見上皮內(nèi)病變(NILM)；(2)不明確非典型鱗狀細(xì)胞(ASC-US)；(3)不能排除高級別非典型鱗狀細(xì)胞上皮內(nèi)病變(ASC-H)；(4)低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)；(5)高度鱗狀上皮病變(HSIL)；(6)腺癌(AC)；(7)鱗癌(SCC)。ASC-US及以上程度病變定義為陽性，包含ASCUS、ASC-H、LSIL、HSIL、AC以及SCC。

1.2.2 HPV E6/E7 mRNA檢測：采用TCT剩余標(biāo)本進(jìn)行HPV E6/E7 mRNA檢查，所有樣本均進(jìn)行2次檢測，取平均值。本次研究所用試劑盒由鄭州科蒂亞生物技術(shù)有限公司提供，且操作嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行。

1.2.3 病理檢查：先使用低倍鏡對病人宮頸病變部位進(jìn)行觀察，判斷病人宮頸病變程度，用濃度為3%的醋酸浸濕宮頸，對上皮形態(tài)、鱗狀上皮、柱狀上皮、組織血管以及鱗柱轉(zhuǎn)化區(qū)顏色等相關(guān)病變情況進(jìn)行觀察，使用碘液對病人宮頸進(jìn)行染色，對于碘試區(qū)疑似病變的組織進(jìn)行取樣送檢。由本院2名專業(yè)病理醫(yī)師進(jìn)行顯微鏡下觀察，確定病理結(jié)果。病理診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照《病理學(xué)》[5]中關(guān)于宮頸癌前病變以及宮頸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，對病理學(xué)結(jié)果進(jìn)行劃分。將HSIL、原位腺癌、腺癌、鱗癌和鱗腺癌歸為陽性結(jié)果，將正常子宮頸及LSIL歸為陰性結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo) 對病人TCT檢查、HPV E6/E7 mRNA檢查以及病理檢查結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)記錄，并根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果計(jì)算靈敏度、特異度以及準(zhǔn)確度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 18.0進(jìn)行分析，其中計(jì)數(shù)資料以百分表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)。 以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV E6/E7 mRNA檢查與病理檢查結(jié)果比較 HPV E6/E7 mRNA檢查與病理檢查結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 HPV E6/E7 mRNA檢查與病理結(jié)果比較(n，%)

2.2 TCT與病理檢查結(jié)果比較 TCT與病理檢查結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 TCT檢查與病理檢查結(jié)果比較(n，%)

2.3 HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合TCT檢查與病理檢查比較 HPV E6/E7 mRNA檢查聯(lián)合TCT檢查結(jié)果與病理結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表3HPV E6/E7 mRNA檢查聯(lián)合TCT檢查與病理檢查比較(n，%)

項(xiàng)目聯(lián)合檢查陽性聯(lián)合檢查陰性合計(jì)病理陽性75(76.5)3(3.1)78(79.6)病理陰性1(1.0)19(19.4)20(20.4)合計(jì)76(77.6)22(22.4)98(100.0)

2.4 靈敏度、特異度以及準(zhǔn)確度分析 聯(lián)合檢查靈敏度明顯高于TCT檢查(P<0.05)，聯(lián)合檢測特異度明顯高于HPV E6/E7 mRNA檢查(P<0.05)，HPV E6/E7 mRNA檢查靈敏度高于TCT檢查(P<0.05)，TCT檢查特異度高于HPV E6/E7 mRNA檢查(P<0.05)，聯(lián)合檢查準(zhǔn)確度高于TCT檢查以及HPV E6/E7 mRNA檢查(P<0.05)，見表4。

表4 不同檢查靈敏度、特異度以及準(zhǔn)確度比較(%)

3 討論

宮頸癌是目前臨床常見的女性惡性腫瘤，由于老年病人絕經(jīng)后體內(nèi)雌激素水平顯著降低，生理及心理會(huì)有較大的變化，加上社會(huì)因素的影響，往往未能及時(shí)就醫(yī)，有效診斷是預(yù)防宮頸癌的關(guān)鍵[6]。有學(xué)者在研究中指出，對于早期發(fā)現(xiàn)的宮頸癌，治愈率可達(dá)90%以上。TCT屬于細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測，在明確觀察到細(xì)胞形態(tài)異常時(shí)，一般宮頸病變已發(fā)展至中晚期，而且該檢測方法假陰性概率比較高，進(jìn)而增加漏診率[7]。HPV DNA檢測是高危宮頸癌檢測的有效手段，當(dāng)發(fā)生HPV感染后，只有不到10%的人群會(huì)出現(xiàn)整合和進(jìn)展，因此在進(jìn)行病毒DNA檢測時(shí)，宮頸細(xì)胞內(nèi)的HPV載量、病毒種類以及病毒整合程度均未在基因里體現(xiàn)，從而降低DNA檢測的準(zhǔn)確度[8]。在宮頸疾病的發(fā)生以及發(fā)展過程中，高危HPV E6/E7基因發(fā)揮著重要的作用[9]。HPV E6/E7基因?qū)σ职┗騪53和Rb的降解起到介導(dǎo)作用，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)節(jié)受到干擾[10]。 HPV E6/E7 mRNA檢測可以充分反映與宮頸病變程度相關(guān)的病毒活動(dòng)指標(biāo)，因此在HPV持續(xù)感染的女性宮頸疾病診斷中，HPV E6/E7 mRNA檢測更具有臨床應(yīng)用價(jià)值[11]。

本研究結(jié)果顯示，因入選研究對象為有臨床癥狀的老年病人，絕經(jīng)后陰道出血或排液，故陽性率高。單純采用HPV E6/E7 mRNA檢測具有較高的準(zhǔn)確度(87.8%)，但是其特異度(70.0%)相對較低，進(jìn)而導(dǎo)致誤診率提高。而TCT檢測的特異度(90.0%)比較高，聯(lián)合使用2種檢測方法可以將靈敏度提升至96.2%，特異度提升至95.0%，準(zhǔn)確度提升至95.9%。曾有學(xué)者在研究中指出，細(xì)胞學(xué)檢測聯(lián)合HPV E6/E7 mRNA檢測可以極大程度地提高檢測的靈敏度以及特異度，該結(jié)論與本次研究結(jié)果一致[12]。HPV E6/E7 mRNA及TCT檢測均屬于無創(chuàng)操作，可降低檢查期間發(fā)生感染的概率，對老年病人具有更好的臨床推廣價(jià)值[13]。經(jīng)2種方式診斷為陽性的病人，建議其行進(jìn)一步病理檢查確定，以免存在誤診，影響病人治療時(shí)機(jī)。

綜上所述，由于老年病人卵巢功能衰退，雌激素水平降低，陰道萎縮，局部抵抗力差，在宮頸疾病的診斷中，采用HPV E6/E7 mRNA及TCT檢測不僅避免創(chuàng)傷導(dǎo)致病人出現(xiàn)感染等不良事件，而且具有更高的靈敏度以及特異度，可以有效地提高診斷準(zhǔn)確率，臨床上應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步推廣應(yīng)用。