HSPA1L rs2227956位點單核苷酸多態(tài)性與子癇前期遺傳易感性關系

李勝軍　林巖　宗金寶　劉世國　宋衛(wèi)青

[摘要]目的探討HSPA1Lrs2227956位點單核苷酸多態(tài)性與子癇前期遺傳易感性的關系。

方法采用TaqMan探針實時熒光PCR技術，對山東地區(qū)漢族女性中800例子癇前期（PE）病人和1000例正常妊娠孕婦的外周血DNA進行擴增，比較兩組HSPA1Lrs2227956位點基因型分布和等位基因頻率。

結果PE組和正常孕婦組HSPA1Lrs2227956位點的基因型分布和等位基因頻率比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與正常孕婦組比較，輕度PE組、重度PE組以及早發(fā)型PE、晚發(fā)型PE組HSPA1Lrs2227956位點的基因型分布和等位基因頻率差異均無顯著性（P>0.05）。

結論HSPA1Lrs2227956位點多態(tài)性與PE的遺傳易感性沒有相關性。

[關鍵詞]先兆子癇;HSPA1L基因;多態(tài)性，單核苷酸;疾病遺傳易感性

[中圖分類號]R714.24;R363.25

[文獻標志碼]A

[文章編號]2096-5532（2020）01-0026-04

子癇前期（PE）是一種妊娠期特發(fā)性疾病，可以伴有多種臟器的功能損害[1]，其發(fā)病率在初產婦為3.0%～7.0%，經產婦為0.8%～5.0%，嚴重威脅著母兒的生命健康[2]。PE的發(fā)病機制至今尚未完全闡明，但研究表明其發(fā)病與炎癥反應、氧化應激、免疫失衡、遺傳因素等有關[3-8]。系統(tǒng)性炎癥反應和氧化應激狀態(tài)會誘導熱休克蛋白70（HSP70）表達升高[9]。并且，PE病人血清、血漿以及胎盤組織中都有高水平的HSP70表達[10]。已有研究證實，多種基因的單核苷酸多態(tài)性（SNPs）與PE發(fā)病及遺傳易感性具有密切關系[11-12]。本研究選取HSP基因中一個標簽位點rs2227956，探討其多態(tài)性與PE遺傳易感性的相關性，旨在為PE的臨床診斷及治療提供遺傳學依據(jù)?，F(xiàn)將結果報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取800例已經確診的PE病人作為病例組，1000例足月分娩的正常孕婦作為對照組，兩組年齡匹配，且均來源于2016年10月—2018年10月在青島大學附屬醫(yī)院、煙臺毓璜頂醫(yī)院、濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院、聊城市人民醫(yī)院、臨沂市人民醫(yī)院、棗莊市婦幼保健院、菏澤市立醫(yī)院等山東各地醫(yī)院產科住院的中國漢族妊娠婦女。PE的診斷標準參照美國“國家高血壓教育計劃”[13]，分度及分型參考相關文獻標準[14-15]。其中輕度PE病人181例，重度PE病人619例;早發(fā)型PE病人426例，晚發(fā)型PE病人374例。對照組為沒有PE病史、足月分娩、產后隨訪亦未發(fā)生PE的正常孕婦。兩組孕婦均排除前置胎盤、胎膜早破、先兆流產、輔助生殖、巨大兒及雙胎妊娠，均無慢性高血壓、心臟病、腎病、糖尿病、甲狀腺疾病以及系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎等全身性疾病病史。

兩組孕婦臨床資料均完整，包括年齡、月經初潮年齡、妊娠次數(shù)、流產次數(shù)、收縮壓、舒張壓、入院孕周、分娩孕周、臨床癥狀以及實驗室檢查指標等，且所有研究對象均簽署知情同意書。本研究獲青島大學附屬醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2研究方法

采集研究對象外周肘靜脈血2mL于EDTA抗凝管中，用試劑盒提取基因組DNA，然后采用TaqMan探針實時熒光PCR技術對HSPA1L基因rs2227956位點多態(tài)性進行檢測。PCR反應體系包括：20×SNP探針1.25μL，2×PCRMasterMix12.5μL，模板DNA和去除DNA酶水11.25μL，總反應體系共25μL。實驗所用探針、引物及MasterMix均購買于美國ABI公司。其中rs2227956位點上游引物序列為5′-AATGGTATTCTCAATGTC-ACAGCCA-3′，下游引物序列為5′-GGACAAGA-

GCACCGGCAAGGTGAAC-3′。PCR循環(huán)條件：95℃預變性3min;95℃、15s，60℃、1min，共45個循環(huán)，在C1000TM熱循環(huán)儀和CFX96TM實時系統(tǒng)（BioGRad，California，USA）中進行擴增反應。最后通過BioRadCFXmanager3.0軟件讀取基因型。

1.3統(tǒng)計學分析

使用SPSS21.0軟件進行統(tǒng)計分析，應用擬合優(yōu)度χ2檢驗進行Hardy-Weinberg（HWE）遺傳平衡分析，計量資料比較采用Studentst檢驗，兩組間基因型頻率及等位基因頻率的比較采用Pearsonsχ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1兩組一般基礎資料比較

病例組和對照組入院孕周、分娩孕周、新生兒體質量和血壓比較差異有顯著意義（t=-38.603～78.883，P<0.01），而年齡、月經初潮年齡、孕次和流產次數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2兩組基因型分布和等位基因頻率比較

對照組HSPA1Lrs2227956位點的基因型分布和等位基因頻率均符合HWE遺傳平衡定律（χ2=2.671，P=0.102），說明該研究所選取樣本具有群體代表性。病例組與對照組相比，基因型分布差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.901，P=0.637），等位基因頻率差異亦無統(tǒng)計學意義（χ2=0.286，P=0.593，OR=0.956，95%CI=0.813～1.126）。見表2。

2.3輕度、重度PE組與對照組基因型分布和等位基因頻率的比較

輕度PE病人與對照組、重度PE病人與對照組基因型分布與等位基因頻率比較差異均無統(tǒng)計學意義（輕度PE與對照組基因型分布比較，χ2=0.085，P=0.958;等位基因頻率比較，χ2=0.090，P=0.764，OR=1.043，95%CI=0.794～1.370。重度PE與對照組基因型分布比較，χ2=1.495，P=0.474;等位基因頻率比較，χ2=0.613，P=0.434，OR=0.932，95%CI=0.781～1.112）。見表2。

2.4早發(fā)型、晚發(fā)型PE組與對照組基因型分布和等位基因頻率的比較

早發(fā)型PE組與對照組、晚發(fā)型PE組與對照組基因型分布與等位基因頻率比較差異亦均無統(tǒng)計學意義（早發(fā)型PE與對照組基因型分布比較，χ2=0.956，P=0.620;等位基因頻率比較，χ2=0.810，P=0.368，OR=0.912，95%CI=0.746～1.115。晚發(fā)型PE與對照組基因型分布比較，χ2=0.701，P=0.704;等位基因頻率比較，χ2=0.006，P=0.936，OR=1.008，95%CI=0.820～1.240）。見表2。

3討論

PE是一種以高血壓和蛋白尿為特征的妊娠期特發(fā)性疾病，可累及肝、腎、胎盤、神經系統(tǒng)及血液系統(tǒng)等多種臟器和系統(tǒng)，嚴重危及母嬰的生命安全[1]。該病發(fā)病機制不明。越來越多的研究表明，炎癥反應和氧化應激在PE發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[6-8]。妊娠會使孕婦處于一種普遍的適度的炎癥反應狀態(tài)，而PE病人處于一種過度的炎癥反應狀態(tài)[16]。并且，PE病人血清中的IL-1β、IL-2、IL-6和IFN-γ等炎癥因子水平比正常孕婦明顯升高[17-19]。氧化應激是指體內氧化系統(tǒng)與抗氧化系統(tǒng)失衡，導致活性氧增多[20-21]，通過一系列病理生理變化參與PE的發(fā)生發(fā)展[22]。

熱休克蛋白（HSP）是熱休克反應中轉錄合成的一組蛋白，可以增強細胞對應激的耐受性，穩(wěn)定細胞蛋白內環(huán)境[23]。迄今為止，HSP有3大家族被廣泛研究：低分子量HSP家族、HSP70家族、HSP90家族[24]。其中HSP70是含量最豐富的一類，其保守性和可誘導性最強。HSP70是重要的分子伴侶，對于維持細胞的正常機制是必不可少的，其具有參與蛋白質折疊、介導細胞自我保護、抗細胞凋亡以及調節(jié)免疫反應等作用[25-26]。已有研究結果證實，系統(tǒng)性炎癥反應和氧化應激狀態(tài)會誘導HSP70表達升高[9，27]，并且，PE病人的血清、血漿以及胎盤組織中HSP70表達也升高[10]。此外，研究還發(fā)現(xiàn)HSP70與高血壓及相關疾病的發(fā)病機制相關[28]。

人體中編碼HSP70家族成員的基因共有3個：HSPA1A、HSPA1B以及HSPA1L，它們均位于6p21.3[29]。其中HSPA1A和HSPA1B編碼同一種蛋白熱休克誘導性蛋白產物，而HSPA1L編碼非熱休克誘導性蛋白產物，兩種蛋白產物有90%的氨基酸序列相同[30]。研究發(fā)現(xiàn)多種基因與PE發(fā)病相關，具有遺傳易感性，包括Survivin基因、內皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因、VLeiden因子基因、血管緊張素轉換酶（ACE）基因、亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）基因以及腫瘤壞死因子α（TNF-α）基因等，這些不同基因的SNP位點多態(tài)性影響著PE的發(fā)病及遺傳易感性[11]。由于HSPA1L編碼的蛋白產物HSP70與炎癥反應、缺血低氧、氧化應激等參與PE發(fā)生發(fā)展的重要因素密切相關，HSP70在PE病人的血清、血漿以及胎盤組織中表達也升高，提示HSP70在PE的發(fā)生發(fā)展中起一定的作用;HSP70與高血壓及相關疾病的發(fā)病機制相關;PE的發(fā)病還與多種基因相關，具有遺傳易感性，推測編碼HSP70蛋白的基因HSPA1L可能與PE發(fā)病有關。本文選取了HSPA1L基因中一個標簽性SNP位點rs2227956進行研究，探討HSPA1L基因rs2227956位點的多態(tài)性與PE的遺傳易感性是否具有相關性，旨在為PE的臨床預測以及治療提供遺傳學依據(jù)。

本文研究結果顯示，PE組病人和正常對照組HSPA1Lrs2227956位點的基因型分布和等位基因頻率差異無顯著性。為進一步探討該位點與PE遺傳易感性關系，將PE組孕婦分為輕度、重度PE以及早發(fā)型、晚發(fā)型PE，并進行分析，結果顯示，輕度、重度PE病人與對照組比較以及早發(fā)型、晚發(fā)型PE病人與對照組比較，HSPA1Lrs2227956位點的基因型分布和等位基因頻率差異均無顯著性。表明HSPA1Lrs2227956位點的多態(tài)性在PE的發(fā)生發(fā)展中可能并不起關鍵性作用，尚不能認為該位點的多態(tài)性與PE的遺傳易感性相關。

本文研究結果可能會受多種因素的影響。首先，研究對象均來自于山東省漢族人群，因此本文研究結果不適用于其他地區(qū)、其他人群或人種;其次，由于PE是一種復雜的多基因遺傳性疾病，可能會受多種基因、多個位點的共同作用或相互作用的影響;另外，環(huán)境因素也可能會影響研究結果。因此，還需要更多地區(qū)、更多種族人群、更多基因位點、納入環(huán)境因素影響甚至功能性的研究，來進一步驗證本研究的結果，加深對PE發(fā)病的認識，以便更好地指導其臨床診斷和治療。

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（本文編輯 黃建鄉(xiāng)）