降鈣素原室內(nèi)質(zhì)控品的制備與應用

薄 帥

遼寧省人民醫(yī)院檢驗科，遼寧沈陽 110016

降鈣素原(PCT)是降鈣素的前體物質(zhì)，其作為診斷炎癥的血清標志物具有重要的臨床價值，目前已被廣泛應用于細菌感染特別是膿毒癥的早期診斷、病程監(jiān)測、指導抗菌藥物使用等方面[1]。因此，做好室內(nèi)質(zhì)量控制，保障PCT檢測結(jié)果的準確性尤為重要。目前實驗室使用的質(zhì)控品多為國外進口質(zhì)控品，訂貨周期長且價格昂貴，特別是干粉制劑，復融后容易產(chǎn)生基質(zhì)效應和較大的瓶間差，不利于實驗室特別是基層醫(yī)院開展室內(nèi)質(zhì)量控制工作。近年來,已有學者利用患者血清標本自制室內(nèi)質(zhì)控品來代替商用質(zhì)控品，并取得了滿意的效果[2-3]。本研究在此基礎上，利用患者血清自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品，并對其均勻性、穩(wěn)定性進行了分析，評估了其臨床應用價值，以期為臨床室內(nèi)質(zhì)控品的制備與應用提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 根據(jù)中國合格評定國家認可委員會(CNAS)-GL005:2018文件要求[4]，收集本院檢驗科日常工作中PCT檢測水平正常和較高患者的血清標本。標本要求無溶血、黃疸、脂血，乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒及梅毒均為陰性。

1.2儀器與試劑 Roche411全自動電化學發(fā)光分析儀及其配套PCT試劑，校準品和高、低兩水平質(zhì)控品。

1.3方法 根據(jù)0.5 ng/L和2.0 ng/L兩個醫(yī)學決定水平，將收集到的患者血清標本中PCT檢測水平正常的標本作為低水平室內(nèi)質(zhì)控品，將檢測水平較高的血清標本用正常血清標本進行稀釋，使稀釋后的PCT水平處于2.0 ng/L左右，作為高水平室內(nèi)質(zhì)控品。將2份血清標本于-20 ℃冷凍后過濾，加入10%乙二醇防腐劑，然后采用5 mL玻璃瓶分裝，邊分裝邊混勻，分裝后于-20 ℃條件下保存，每天與羅氏PCT質(zhì)控品同時上機檢測，對其均勻性和穩(wěn)定性進行評價。

1.5統(tǒng)計學處理 采用Microsoft Excel 2010對數(shù)據(jù)進行整理分析。

2 結(jié) 果

2.1自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品均勻性評價結(jié)果 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品的瓶間不精密度分別為1.04%和0.96%，均滿足≤1/3室內(nèi)不精密度要求。見表1。

表1 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品均勻性評價結(jié)果

2.2自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品穩(wěn)定性評價結(jié)果

2.2.1復融后穩(wěn)定性評價 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品復融后每天與羅氏質(zhì)控品同時進行檢測，1個月內(nèi)結(jié)果均在控制范圍內(nèi)。見圖1。

圖1 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品1個月質(zhì)控效果圖

2.2.2長期穩(wěn)定性評價 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品12個月的室內(nèi)不精密度分別為4.36%和3.89%，均≤1/3TEa(TEa=25%)，見表2。根據(jù)12個月的質(zhì)控圖和Westgard規(guī)則判斷，自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品與羅氏質(zhì)控品相關性良好，無偏離現(xiàn)象，與羅氏質(zhì)控品同步出現(xiàn)7次質(zhì)控失控現(xiàn)象，均與試劑有關，校準后重新檢測均在控。見圖2。

表2 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品長期穩(wěn)定性評價結(jié)果

圖2 自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品12個月質(zhì)控效果圖

3 討 論

PCT含有116個氨基酸，可轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩锘钚缘慕碘}素，參與機體的鈣、磷代謝。健康人體內(nèi)PCT水平很低，當細菌感染，特別是膿毒癥時，在脂多糖和各種炎癥介質(zhì)[如白細胞介素(IL)-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α]的作用下，血清PCT水平會在2～6 h顯著升高，在6～24 h達到峰值。PCT在炎性反應發(fā)生時較其他炎癥因子更早升高，有助于感染的早期診斷[6]；當治療有效時，PCT也較C反應蛋白(CRP)等指標更快地恢復至正常范圍內(nèi)[7]。但在病毒感染及自身免疫性疾病時，PCT水平多在正常范圍內(nèi)或僅輕度升高，有助于臨床鑒別病毒與細菌感染[8-10]。此外，PCT相較于其他炎性反應標志物(如CRP、TNF-α、IL-1、IL-6等)具有更高的靈敏度和特異度，在判斷病情嚴重程度、指導抗菌藥物使用、評價療效及預后等方面均具有較高的臨床價值。

近年來，隨著循證醫(yī)學的發(fā)展，實驗室質(zhì)量控制成為關注的重點，質(zhì)控品是開展質(zhì)量控制工作的重要環(huán)節(jié)，理想的質(zhì)控品應避免基質(zhì)效應，且具有瓶間差小、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，水平應處于醫(yī)學決定水平附近[11]。本研究根據(jù)CNAS-GL005:2018文件要求，收集本院檢驗科日常工作中PCT檢測結(jié)果正常和較高患者的血清標本來制備高、低兩水平PCT室內(nèi)質(zhì)控品。在對自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品進行分裝時采用帶螺旋冒和內(nèi)塞的玻璃容器，分裝后均擰緊蓋帽，避免了損失和吸潮；盡量小量分裝，避免了開瓶后對穩(wěn)定性的影響。分裝后間隔抽取10瓶進行均勻性評價，自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品的瓶間不精密度分別為1.04%和0.96%，均滿足≤1/3室內(nèi)不精密度要求，提示自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品的瓶間差小，均勻性良好。

自制質(zhì)控品穩(wěn)定性評價主要包括復融后穩(wěn)定性評價和長期穩(wěn)定性評價2個方面，穩(wěn)定性評價可以以不同的方式進行，但同步穩(wěn)定性評價具有顯著性和精確性高的獨特優(yōu)勢[4]。本研究將自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品復融后每天與羅氏質(zhì)控品同時上機檢測，進行同步穩(wěn)定性評價，并根據(jù)質(zhì)控圖和Westgard規(guī)則進行判斷。復融后的穩(wěn)定性評價結(jié)果顯示，1個月內(nèi)檢測結(jié)果均在控制范圍內(nèi)，提示自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品復融后結(jié)果穩(wěn)定。長期穩(wěn)定性評價結(jié)果顯示，自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品12個月的不精密度分別為4.36%和3.89%，均≤1/3TEa(TEa=25%)，滿足室間質(zhì)評可接受性能指標要求。在觀察的12個月中，自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品與羅氏質(zhì)控品相關性良好，無偏離現(xiàn)象，與羅氏質(zhì)控品同步出現(xiàn)7次失控現(xiàn)象，均與試劑有關，校準后重新檢測即在控，這說明自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品在-20 ℃條件下保存時，穩(wěn)定時間可達12個月。

綜上所述，本院自制PCT室內(nèi)質(zhì)控品成本低廉，無基質(zhì)效應，均勻性、穩(wěn)定性良好，在-20 ℃條件下保存時，穩(wěn)定時間可達12個月，可用于實驗室PCT檢測系統(tǒng)的室內(nèi)質(zhì)量控制。