熒光免疫微流定量檢測(cè)急性心肌梗死三聯(lián)的性能及診斷效果評(píng)價(jià)

陳桂芳，楚華星，邢 喆，吳 蕾

北京大學(xué)首鋼醫(yī)院檢驗(yàn)科,北京 100144

近年來(lái)，由于人們生活方式的改變和人口老齡化問(wèn)題的影響，急性心肌梗死(AMI)的發(fā)病率逐年升高。有研究發(fā)現(xiàn)，早期診斷和治療能顯著降低AMI病死率，改善患者預(yù)后[1]。心肌標(biāo)志物為人體內(nèi)在心肌損傷時(shí)能夠出現(xiàn)特異性變化的指標(biāo)[2-3]，理想的心肌標(biāo)志物要求具有高靈敏度和高特異度。AMI三聯(lián)(以下稱心梗三聯(lián))包括肌紅蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌鈣蛋白I(cTnI)，是目前臨床常用的輔助AMI診斷的心肌損傷標(biāo)志物。不同的檢測(cè)方法所檢測(cè)的心肌標(biāo)志物水平可能存在差異，對(duì)其診斷AMI的靈敏度和特異度產(chǎn)生影響。深圳微點(diǎn)生物公司研發(fā)的esLabs hyper i300全自動(dòng)干式熒光免疫分析儀是一款主動(dòng)式微流控芯片檢測(cè)儀，該儀器具有操作簡(jiǎn)便、通量高和速度快等優(yōu)點(diǎn)[4]。本研究評(píng)價(jià)了熒光免疫微流定量檢測(cè)心梗三聯(lián)的性能及診斷效果，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年11月至2019年5月本院急診科收治的53例疑似AMI患者為研究對(duì)象，其中經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診為AMI的患者33例為AMI組，其中男24例、女9例，平均年齡(66.7±16.8)歲；診斷為冠心病等其他疾病的患者20例為非AMI組，其中男15例、女5例，平均年齡(69.4±18.5)歲。選取同期健康體檢者30例為對(duì)照組，其中男22例、女8例，平均年齡(67.4±16.4)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并腫瘤者；合并骨骼及腎臟疾病者。3組研究對(duì)象年齡、性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2儀器與試劑 深圳微點(diǎn)生物公司生產(chǎn)的esLabs hyper i300全自動(dòng)干式熒光免疫分析儀和微流控定量試劑盒(免疫熒光法)。

1.3方法

1.3.1診斷性能分析 以冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果為診斷標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)熒光免疫微流定量檢測(cè)結(jié)果的陽(yáng)性率；并采用ROC曲線(以Myo>100 ng/mL、CK-MB>5.0 ng/mL、cTnI>0.5 ng/mL為切點(diǎn))分析心梗三聯(lián)對(duì)AMI的診斷性能。各指標(biāo)的參考值：Myo<100 ng/mL、CK-MB<5.0 ng/mL、cTnI<0.5 ng/mL；陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：參考值上限以下為陰性，超出參考值上限為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。偏態(tài)分布的計(jì)量資料以M(P25，P75)表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用ROC曲線分析心梗三聯(lián)對(duì)AMI的診斷性能。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.13組Myo、CK-MB和cTnI水平比較 3組Myo、CK-MB和cTnI水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中AMI組與非AMI組Myo、CK-MB、cTnI水平高于對(duì)照組(P<0.05)；AMI組CK-MB和cTnI水平高于非AMI組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組Myo、CK-MB、cTnI水平比較[M(P25，P75)，ng/mL]

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與非AMI組，#P<0.05。

2.2熒光免疫微流定量檢測(cè)Myo、CK-MB和cTnI的陽(yáng)性率比較 53例疑似AMI患者中，熒光免疫微流定量檢測(cè)Myo、cTnI的陽(yáng)性率分別為 56.6%(30/53)、60.4%(32/53)，與冠狀動(dòng)脈造影診斷AMI的陽(yáng)性率[62.3%(33/53)]比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而熒光免疫微流定量檢測(cè)CK-MB的陽(yáng)性率為41.5%(22/53)，與冠狀動(dòng)脈造影的診斷陽(yáng)性率(62.3%)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3Myo、CK-MB、cTnI單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)診斷AMI的性能分析 ROC曲線分析結(jié)果顯示，cTnI診斷AMI的AUC值最大(0.901)，與Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串聯(lián)、并聯(lián)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；cTnI診斷AMI的靈敏度(87.9%)高于Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串聯(lián)(P<0.05)，特異度(85.0%)高于Myo、CK-MB、Myo+CK-MB+cTnI并聯(lián)(P<0.05)。Myo+CK-MB+cTnI并聯(lián)診斷AMI的靈敏度(97.0%)高于Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串聯(lián)(P<0.05)，但特異度僅為35.0%。Myo+CK-MB+cTnI串聯(lián)診斷AMI的特異度(100.0%)高于Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI并聯(lián)(P<0.05)，但靈敏度僅為39.4%。見(jiàn)圖1、表2。

2.4批內(nèi)精密度驗(yàn)證 熒光免疫微流定量檢測(cè)Myo、CK-MB、cTnI的批內(nèi)精密度均不超過(guò)10%，符合判斷標(biāo)準(zhǔn)。見(jiàn)表3。

表2 Myo、CK-MB、cTnI單獨(dú)和聯(lián)合診斷AMI的性能分析

注：與Myo比較，*P<0.05；與CK-MB比較，#P<0.05；與cTnI比較，△P<0.05；與Myo+CK-MB+cTnI串聯(lián)比較，▲P<0.05。

表3 Myo、CK-MB和cTnI 批內(nèi)精密度驗(yàn)證結(jié)果

圖1 Myo、CK-MB、cTnI單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)診斷AMI的ROC曲線

2.5批間精密度驗(yàn)證 熒光免疫微流定量檢測(cè)Myo、CK-MB、cTnI的批間精密度均不超過(guò)10%，符合判斷標(biāo)準(zhǔn)。見(jiàn)表4。

表4 Myo、CK-MB和cTnI 批間精密度驗(yàn)證結(jié)果

3 討 論

AMI是心肌持續(xù)缺血引發(fā)心肌細(xì)胞壞死的一種急性冠脈綜合征。AMI診斷的金標(biāo)準(zhǔn)為冠狀動(dòng)脈造影。近年來(lái)，隨著敏感性更強(qiáng)的心肌標(biāo)志物的出現(xiàn)，心肌標(biāo)志物對(duì)AMI等急性冠脈綜合征的診斷價(jià)值成為研究的熱點(diǎn)。CK-MB是肌酸激酶的同工酶，心肌內(nèi)含量較多，骨骼肌中也少量存在，所以在急性骨骼肌損傷時(shí)其可出現(xiàn)一過(guò)性升高。有研究發(fā)現(xiàn)，AMI時(shí)CK-MB的釋放量與梗死面積、程度、部位有關(guān)，所以即使其診斷AMI時(shí)的靈敏度和特異度不及cTnI,但可用于梗死程度和再發(fā)梗死的評(píng)估[6]。cTnI是橫紋肌的一種調(diào)節(jié)蛋白，是骨骼肌和心肌的結(jié)構(gòu)蛋白，心肌缺血導(dǎo)致心肌損傷時(shí)，外周血cTnI水平迅速升高，且升高持續(xù)時(shí)間可達(dá)2周，有較長(zhǎng)的診斷窗口期[7]。此外，cTnI對(duì)心肌損傷的診斷具有高靈敏度和特異度的特點(diǎn)，2007年美國(guó)臨床生化學(xué)會(huì)推薦cTnI為心肌梗死診斷的首選標(biāo)志物[6]。Myo存在于肌肉中，尤其在心肌中含量豐富，其通常在AMI發(fā)作后1.5 h即可升高，是AMI時(shí)出現(xiàn)最早的血清標(biāo)志物，其靈敏度高，但特異度較低，骨骼肌損傷、創(chuàng)傷、腎功能衰竭等疾病都可引起Myo水平的升高[8]。有研究證實(shí)，Myo、CK-MB和cTnI三者聯(lián)合檢測(cè)更有利于AMI的診斷[9]。

本研究采用微流控定量試劑盒，應(yīng)用esLabs hyper i300全自動(dòng)干式熒光免疫分析儀定量檢測(cè)cTnI、 CK-MB和Myo水平，進(jìn)行精密度驗(yàn)證，并用冠狀動(dòng)脈造影診斷結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)其檢測(cè)性能。研究結(jié)果表明，熒光免疫微流定量檢測(cè)cTnI、 CK-MB和Myo的批內(nèi)、批間精密度均不超過(guò)10%，符合判定標(biāo)準(zhǔn)。熒光免疫微流定量檢測(cè)Myo、cTnI的陽(yáng)性率分別為56.6%、60.4%，與冠狀動(dòng)脈造影的診斷陽(yáng)性率(62.3%)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明兩種方法診斷結(jié)果一致性較好；而熒光免疫微流定量檢測(cè)CK-MB的陽(yáng)性率(41.5%)明顯低于冠狀動(dòng)脈造影診斷的陽(yáng)性率(62.3%)(P<0.05)，表明用CK-MB診斷AMI時(shí)可能出現(xiàn)漏診情況，考慮與受試對(duì)象CK-MB的釋放量和發(fā)病時(shí)間可能影響CK-MB的檢測(cè)準(zhǔn)確性有關(guān)。

本研究中，AMI組與非AMI組Myo、CK-MB、cTnI水平均高于對(duì)照組(P<0.05)；AMI組CK-MB、cTnI水平高于非AMI組(P<0.05)。表明Myo、CK-MB和cTnI水平與心肌損傷相關(guān)，并且CK-MB和cTnI水平與心肌損傷的嚴(yán)重程度有關(guān),對(duì)AMI患者的診斷和疾病評(píng)估方面有重要的價(jià)值。以冠狀動(dòng)脈造影的診斷為標(biāo)準(zhǔn)，制作ROC曲線，結(jié)果顯示，cTnI的AUC值最大，與Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串聯(lián)、并聯(lián)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；cTnI診斷AMI的靈敏度高于Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串聯(lián)(P<0.05)，特異度高于Myo、CK-MB、Myo+CK-MB+cTnI并聯(lián)(P<0.05)，表明cTnI診斷AMI的特異度、靈敏度高，診斷性能好，為心肌損傷的首選標(biāo)志物，與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致。而CK-MB、Myo對(duì)心肌梗死也具有一定的診斷價(jià)值，但本研究Myo、CK-MB和cTnI診斷AMI的靈敏度、特異度等與部分文獻(xiàn)的結(jié)果存在一定差別，可能與研究對(duì)象中有部分早期AMI患者M(jìn)yo、CK-MB和cTnI還未升高有關(guān)。Myo+CK-MB+cTnI并聯(lián)診斷AMI的靈敏度為97.0%，但特異度僅為35.0%；而Myo+CK-MB+cTnI串聯(lián)診斷AMI的特異度最高(100.0%)，但靈敏度僅為39.4%。所以臨床可根據(jù)實(shí)際需求選擇聯(lián)合檢測(cè)的方式，以提高診斷的準(zhǔn)確性，減少漏診和誤診。

綜上所述，cTnI診斷AMI的特異度、靈敏度高，心梗三聯(lián)并聯(lián)診斷AMI靈敏度高，串聯(lián)診斷AMI的特異度高，可根據(jù)臨床需求有選擇性地進(jìn)行檢測(cè)，以提高診斷的準(zhǔn)確性。熒光免疫微流定量檢測(cè)心梗三聯(lián)的性能良好，診斷效果佳，能基本滿足AMI的輔助診斷應(yīng)用，適用于臨床實(shí)驗(yàn)室。