大皰性類天皰瘡患者血清中抗BP180抗體水平檢測(cè)及意義的分析

王翠芹，王艷心，余海，劉利君，李保強(qiáng)

（1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北承德067000；2.滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，河北滄州061000）

大皰性類天皰瘡（Bullous pemphigoid，BP）是一種自身免疫性大皰性皮膚病，多見(jiàn)于60歲以上的老年人，好發(fā)于胸腹、腋下、腹股溝及四肢屈側(cè)，多無(wú)黏膜的損害。表皮下水皰，皰壁厚，緊張，不易破，尼氏征陰性。其病理表現(xiàn)為表皮下的水皰，皰頂表皮細(xì)胞扁平，排列緊密，無(wú)棘層松解，皰內(nèi)及真皮可見(jiàn)嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。未經(jīng)治療的類天皰瘡呈慢性、自限性過(guò)程，病程數(shù)月到數(shù)年不等，平均3～6年，大多數(shù)病人經(jīng)治療后可完全緩解[1]。其發(fā)病機(jī)制已證明主要與BP180自身抗體有關(guān)，本試驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)患者及正常對(duì)照血清中的抗BP180抗體水平，分析治療前后變化及與病情的相關(guān)性，以探討血清抗BP180抗體水平的檢測(cè)在疾病的診斷、病情的監(jiān)測(cè)及指導(dǎo)治療方面的重要意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 臨床資料 收集我院2016年3月—2017年10月住院的大皰性類天皰瘡患者23例，其中男14例，女9例；年齡56～86歲，平均（70.69±13.88）歲；所有患者均根據(jù)臨床表現(xiàn)及組織病理和直接免疫熒光檢查確診。20例正常對(duì)照，男3例，女17例，年齡21～60歲，平均（28.5±13.0）歲。

1.1.2 主要試劑 抗BP180抗體檢測(cè)試劑盒（購(gòu)自日本MBL公司）。熒光抗體，即異硫氰酸熒光黃（FITC）標(biāo)記的兔抗人IgG、IgA、IgM和補(bǔ)體C3試劑盒（購(gòu)自北京中杉金橋公司）。

1.2 方法

1.2.1 病情評(píng)分 對(duì)20例住院患者治療前病情進(jìn)行評(píng)分，并對(duì)其中16例患者在治療后也進(jìn)行病情評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：活動(dòng)性皮損面積及活動(dòng)性皮損數(shù)目進(jìn)行評(píng)估，然后二者相加作為總分。其中活動(dòng)性皮損面積評(píng)分為0分：無(wú)活動(dòng)性皮損（紅斑、水皰、糜爛）；1分：面積≤10%；2分：面積10%～30%；3分：面積30%～50%；4分：面積＞50%。前1周內(nèi)新發(fā)皮損數(shù)目評(píng)分為0分：無(wú)活動(dòng)皮損；1分：活動(dòng)性皮損≤5個(gè)；2分：活動(dòng)性皮損5～10個(gè)；3分：活動(dòng)性皮損＞10個(gè)[2]。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）收集23例住院患者治療前的血清，并收集到其中19例患者治療后的血清，分別采用ELISA法檢測(cè)血清中抗BP180抗體水平。檢測(cè)方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，如下：將天皰瘡患者及對(duì)照血清稀釋（1∶101）后，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，每例均設(shè)復(fù)孔，在波長(zhǎng)450 nm處讀取吸光度（A值），以2個(gè)孔的平均值作為每例樣本的結(jié)果，根據(jù)公式：?jiǎn)挝恢担║/mL）=（A450樣品-A450標(biāo)準(zhǔn)血清1）/（A450標(biāo)準(zhǔn)血清2-A450標(biāo)準(zhǔn)血清1）×100計(jì)算抗體指數(shù)，按≥9為陽(yáng)性，＜9為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS19.0分析，患者治療前后的評(píng)分分別與治療前后的BP180 ELISA指數(shù)進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析，治療前后的各指標(biāo)分別進(jìn)行兩相關(guān)樣本t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病情評(píng)分 治療前病情評(píng)分（5.15±1.42）與治療后病情評(píng)（2.5±1.75）差值為2.00±1.75，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 大皰性類天皰瘡患者治療前后病情評(píng)分

2.2 ELISA 23例患者中抗BP180抗體陽(yáng)性18例，陰性5例；其中19例患者獲取治療前后血清，其BP180 ELISA指數(shù)經(jīng)治療后有所變化，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析治療前BP180的ELISA指數(shù)（74.22±59.06）與治療后指數(shù)（67.93±54.74）差值為3.66±12.71，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。20例正常對(duì)照組陽(yáng)性1例，陰性19例。ELISA檢測(cè)血清抗BP180抗體的靈敏度為78.26%，特異性為95.00%，見(jiàn)表2。

表2 正常對(duì)照及大皰性類天皰瘡患者治療前后血清抗BP180抗體水平的分析

2.3 病情評(píng)分與ELISA指數(shù)的相關(guān)性 將16例患者治療前后的病情評(píng)分分別與治療前后的BP180 ELISA指數(shù)進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析，均呈正相關(guān)（治療前r=0.417，P＜0.05；治療后r=0.818，P＜0.01），見(jiàn)表3。

表3 類天皰瘡患者治療前后血清抗BP180抗體水平與相應(yīng)病情評(píng)分的相關(guān)性分析

3 討論

BP是一種自身免疫性大皰性皮膚病，其抗原（BPAG）有2種，BPAG1即BP230，位于基底細(xì)胞內(nèi)半橋粒附著斑處，以及抗原BPAG2即BP180，而研究發(fā)現(xiàn)BP180在水皰形成中起重要作用。BP患者的自身抗體可與BP180抗原反應(yīng)，BP180可通過(guò)將每個(gè)表位與特異性免疫球蛋白結(jié)合而引起表皮-真皮分離，從而形成水皰，另外抗體與抗原的結(jié)合，可激活補(bǔ)體、過(guò)敏毒素C3a和C5a形成，肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放嗜酸性細(xì)胞趨化因子，吸引嗜酸性粒細(xì)胞并黏附到基底膜上，釋放溶酶體酶，導(dǎo)致基底細(xì)胞膜半橋粒斷裂及消失，也可形成水皰，此為BP的主要發(fā)病機(jī)制[3]。基底膜帶沉積的類天皰瘡抗體主要為以線狀或顆粒帶狀沉積的IgG及C3，也可見(jiàn)IgA、IgD及IgE，直接免疫熒光被認(rèn)為是檢測(cè)類天皰瘡患者組織中抗體最靈敏的方法，可作為診斷類天皰瘡的金標(biāo)準(zhǔn)[4]。杜文輝等[5]研究中發(fā)現(xiàn)BP患者直接免疫熒光結(jié)果與臨床診斷有較高的符合率，本組患者中也主要是依據(jù)病理表現(xiàn)及免疫熒光進(jìn)行診斷，并且免疫熒光的結(jié)果與病理及臨床表現(xiàn)有較高的符合率。

BP180是一種跨膜蛋白，氨基酸端位于基底細(xì)胞內(nèi)半橋粒附著斑處，羧基位于基底細(xì)胞外的透明板內(nèi)，細(xì)胞外主要是膠原蛋白區(qū)，由非膠原區(qū)分隔為15段，其剛穿出細(xì)胞膜的非膠原區(qū)段NCl6a包含了主要的抗原表位，并被大多數(shù)BP患者血清所識(shí)別。將重組NCl6a蛋白作為包被抗原，用ELISA法檢測(cè)BP患者血清，Sakuma-Oyama等[6]用此方法在102例BP患者和94例對(duì)照的大樣本中，驗(yàn)證了其高敏感性和特異性。Tsuji-Abe等[7]也發(fā)現(xiàn)抗BP180抗體有很高的靈敏度和特異性，有重要的臨床價(jià)值。李妍等[8]經(jīng)多中心隨機(jī)雙盲對(duì)照試驗(yàn)檢測(cè)BP患者血清中抗BP180抗體，亦證明抗BP180抗體檢測(cè)BP有較高的靈敏性及特異性。研究者采用抗BPl80自身抗體ELISA試劑盒對(duì)BP患者治療前后的血清樣本進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)有很高的陽(yáng)性率，且經(jīng)過(guò)治療皮疹有所好轉(zhuǎn)后，自身抗體水平都明顯下降[2，9]。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)23例患者中18例患者血清抗BP180抗體陽(yáng)性，且19例患者對(duì)比治療前后的抗BP180抗體指數(shù)整體呈下降的趨勢(shì)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與其他報(bào)道相符。而20例正常人血清進(jìn)行抗BP180抗體檢測(cè)僅有1例陽(yáng)性，這提示抗BP180抗體檢測(cè)BP有較高的靈敏性及特異性，表明抗BP180抗體血清檢測(cè)技術(shù)在BP的診斷及療效觀察等方面有良好的應(yīng)用價(jià)值。有研究顯示BP患者抗BP180抗體的滴度與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)[2，10]，將BP患者皮損變化進(jìn)行量化評(píng)分，以分值表示病情的嚴(yán)重程度[11]，在治療前患者的臨床評(píng)分較高時(shí)其抗BP180抗體指數(shù)也相應(yīng)的較高，經(jīng)治療后患者臨床癥狀緩解時(shí)二者較前均呈下降的趨勢(shì)，并且均有顯著相關(guān)性。趙英等[12]研究12例皮損面積＞50%的重癥BP患者血清中抗BP180抗體不同階段的變化規(guī)律與病情相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)二者在同時(shí)期有顯著相關(guān)性。本組20例患者治療后的病情評(píng)分較治療前明顯下降，并分別將治療前后的病情評(píng)分與血清中抗BP180抗體指數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示均有較好的相關(guān)性，與其他研究基本相符，這提示患者血清中抗BP180抗體水平有望成為病情監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。

綜上所述，ELISA檢測(cè)血清中抗BP180抗體對(duì)于BP的診斷及鑒別診斷有重要的臨床意義，尤其是抗BP180特異性抗體檢測(cè)有較高的靈敏性和特異性，可一定程度上反應(yīng)病情的變化，對(duì)疾病病情的監(jiān)測(cè)和療效的觀察以及指導(dǎo)治療方案有重要意義，可作為指導(dǎo)臨床的重要檢測(cè)指標(biāo)。