哮喘患兒血清抗菌肽LL-37、白三烯B4與25-羥維生素D3的相關(guān)研究

王璐 司利鋼 王亞君

支氣管哮喘為影響小兒生長發(fā)育、健康常見呼吸系統(tǒng)疾病，對患兒家庭、社會均造成嚴(yán)重負(fù)擔(dān)。支氣管哮喘發(fā)生機(jī)制尚未研究清楚，可能與氣道高炎癥反應(yīng)、高應(yīng)激反應(yīng)等有相關(guān)性。研究指出，肥大細(xì)胞、白三烯及相關(guān)炎癥因子在哮喘患兒氣道分泌物中有較高表達(dá)水平[1]?？咕腖L-37為近年臨床發(fā)現(xiàn)天然防御系統(tǒng)重要組成部分，與多種過敏原致病性有密切相關(guān)性[2]。白三烯為花生四烯酸在5-脂氧合酶代謝作用下產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，為氣道炎癥反應(yīng)重要介質(zhì)物質(zhì)。25-(OH)VD3在哮喘發(fā)生、發(fā)展中同樣有一定相關(guān)性，但其具體關(guān)系仍存在爭議[3]。為探究三者在哮喘患兒中表達(dá)水平及相關(guān)性，筆者研究如下。

資料與方法

一、一般資料

選取2017年2月～2018年3月哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科住院或門診診治哮喘患兒20例、非哮喘肺炎患兒20例分別作為哮喘組和肺炎組，選取同期我院體檢中心體檢健康兒童20例作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡3～16歲。②哮喘組患兒診斷符合《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南(2016年版)》[4]，均為哮喘穩(wěn)定期。③肺炎組患兒診斷符合《兒科學(xué)(第8版)》中小兒肺炎診斷并標(biāo)準(zhǔn)[5]。④對照組均為體檢健康兒童。⑤各組兒童家屬均在醫(yī)師告知下了解本次研究方法和內(nèi)容，簽署知情同意書自愿配合進(jìn)行本次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近2周服用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑或影響炎癥反應(yīng)、應(yīng)激反應(yīng)藥物。②合并有其它過敏性、氧化應(yīng)激反應(yīng)疾病者，如紅斑狼瘡等。哮喘組、肺炎組、對照組間男/女、年齡比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)(見表1)。

表1 組一般臨床資料

二、方法

1 標(biāo)本收集 收集入組兒童病史，包括過敏性皮炎、濕疹、食物過敏、過敏性鼻炎、藥物過敏等，并仔細(xì)進(jìn)行體格檢查。符合標(biāo)準(zhǔn)后，檢測并比較兒童LL-37、LT-B4、25-(OH)VD3水平，分析各組間LL-37、LT-B4、25-(OH)VD3水平相關(guān)性。

2 檢測方法 入組次日，空腹?fàn)顟B(tài)下，抽取各組兒童肘部靜脈血3～5 mL置入離心管中，在常溫下放置2 h，使標(biāo)本凝固，再放入4℃冰箱(中國，容聲)中，冷藏4～8 h，以4000 r/min速度離心5 min(臺式高速離心機(jī))，吸取上清液至少100 μL置入Eppendorf管中，并在對應(yīng)Eppendorf管上編碼患兒姓名、編號，后將標(biāo)本冷凍于-20℃冰箱中，保存待測。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)中雙抗體夾心(Double-antibody sandwich)方法定量分析LL-37、LT-B4、25-(OH)VD3水平。試劑盒均由武漢華美生物(CUSABIO)公司生產(chǎn)。

三、統(tǒng)計學(xué)處理

結(jié) 果

一、各組LL-37、LT-B4、25-(OH)VD3水平比較

哮喘組LL-37、LT-B4水平顯著高于肺炎組、對照組，25-(OH)VD3水平顯著低于肺炎組、對照組(P<0.05)；肺炎組LL-37、LT-B4水平顯著高于對照組，25-(OH)VD3水平顯著低于對照組(P<0.05)(見表2)。

二、各組LT-B4與LL-37水平相關(guān)性

Pearson分析得出：哮喘組LT-B4與LL-37相關(guān)系數(shù)為-0.0221，無相關(guān)性。肺炎組LT-B4與LL-37相關(guān)系數(shù)為-0.247，無相關(guān)性。對照組LT-B4與LL-37相關(guān)系數(shù)為0.225，無相關(guān)性。

三、各組LL-37與25-(OH)VD3水平相關(guān)性

Pearson分析得出：哮喘組LL-37與25-(OH)VD3相關(guān)系數(shù)為0.199，無相關(guān)性。肺炎組LL-37與25-(OH)VD3相關(guān)系數(shù)為-0.039，無相關(guān)性。對照組LL-37與25-(OH)VD3相關(guān)系數(shù)為0.041，無相關(guān)性。

討 論

哮喘為小兒常見呼吸系統(tǒng)過敏性、炎癥反應(yīng)性疾病，與患兒遺傳、環(huán)境、反復(fù)呼吸道感染等均有相關(guān)性，對患兒健康、生活質(zhì)量均造成嚴(yán)重影響。支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制尚未研究清楚，認(rèn)為與多種炎癥介質(zhì)、炎癥因子發(fā)生有關(guān)[6-7]。分析炎癥因子、炎癥介質(zhì)在哮喘患兒中表達(dá)水平及相關(guān)性，對臨床診斷、治療支氣管哮喘有重要指導(dǎo)價值[8-10]。

根據(jù)本研究結(jié)果得出，哮喘患兒LL-37、LT-B4水平顯著升高，25-(OH)VD3水平顯著降低(P<0.05)；但各組間相LL-37、LT-B4、25-(OH)VD3水平無相關(guān)性(P>0.05)。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，肺部感染患者中，LL-37在支氣管上皮細(xì)胞、肺內(nèi)炎性細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞細(xì)胞漿和細(xì)胞膜中均表達(dá)陽性[11-12]。支氣管哮喘和肺炎雖然發(fā)病因素不同，但兩者均能誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞產(chǎn)生炎癥介質(zhì)，引起炎癥細(xì)胞在支氣管中聚集，認(rèn)為LL-37為重要免疫調(diào)節(jié)因子[13-14]。另有學(xué)者分析哮喘患者中LL-37表達(dá)水平，得出LL-37水平顯著升高，分析LL-37在哮喘患者中通過趨化中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T細(xì)胞及單核細(xì)胞作用，能刺激肥大細(xì)胞脫顆粒，調(diào)節(jié)主動防御機(jī)制[15-16]。肥大細(xì)胞為介導(dǎo)免疫反應(yīng)重要細(xì)胞，能引起氣道水腫、痙攣狹窄，為哮喘發(fā)生的重要病理作用，因此，可見LL-37在哮喘中有重要促進(jìn)作用。LT-B4為白三烯中趨化嗜酸細(xì)胞、中性粒細(xì)胞最強(qiáng)的白三烯類細(xì)胞激活劑，為引起呼吸系統(tǒng)過敏反應(yīng)重要介質(zhì)之一。實驗研究指出，吸入LT-B4后，支氣管灌洗液中，中性粒細(xì)胞數(shù)量可增加17倍[17-18]。有學(xué)者分析學(xué)齡期哮喘兒童與健康兒童呼氣氣體中LT-B4水平差異，同樣得出LT-B4水平在哮喘患兒中水平較高，且與患兒哮喘嚴(yán)重程度呈相關(guān)性[19-21]。另有學(xué)者研究證實，LT-B4具有較強(qiáng)中性粒細(xì)胞趨化作用，能促使中性粒細(xì)胞在支氣管肺泡內(nèi)聚集，促使哮喘發(fā)生，并加重哮喘患者癥狀[22]。臨床有相關(guān)研究，表明25-(OH)VD3途徑中多個基因與哮喘發(fā)生有相關(guān)性[23-24]。一項國外獨立研究發(fā)現(xiàn)，哮喘、過敏反應(yīng)均與25-(OH)VD3有相關(guān)性，同時證實25-(OH)VD3水平與哮喘嚴(yán)重程度有一定負(fù)相關(guān)性[25]。分析25-(OH)VD3在哮喘中致病作用，認(rèn)為25-(OH)VD3水平下降能影響機(jī)體免疫功能，增加患兒呼吸系統(tǒng)感染發(fā)生風(fēng)險，進(jìn)而增加對小兒氣道刺激損傷作用，增加哮喘發(fā)生風(fēng)險。但目前，臨床中針對哮喘患兒是否需要補(bǔ)充25-(OH)VD3進(jìn)行治療，仍存在較大爭議，今后臨床還應(yīng)進(jìn)行大量實驗研究，以準(zhǔn)確分析25-(OH)VD3和哮喘關(guān)系，為臨床治療哮喘提供另一新思路。

表2 各組LL-37、LT-B4、25-(OH)VD3水平比較

注：與肺炎組、對照組比較，*P<0.05；與對照組比較，#P<0.05

綜上所述，哮喘患兒LL-37、LT-B4水平顯著升高，認(rèn)為LL-37和IL-B4與哮喘發(fā)生有一定關(guān)聯(lián)性；哮喘患兒25-(OH)VD3水平顯著降低，認(rèn)為25-(OH)VD3水平降低影響患兒免疫功能，為增加哮喘發(fā)生風(fēng)險重要原因。但本研究受到實驗條件、樣本數(shù)量限制，可能對實驗結(jié)果造成一定影響，今后可進(jìn)一步擴(kuò)大研究樣本量進(jìn)行研究和分析，以獲得更為準(zhǔn)確研究數(shù)據(jù)。