基于香豆素母核的磺酰腙類乙酰膽堿酯酶抑制劑的制備

趙友芳，黃國(guó)娟，陳婭芳，於 祥

(貴州中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

香豆素是一種具有苯并α-吡喃酮的結(jié)構(gòu)，分子式為C9H6O2，分子量為146.04，其結(jié)構(gòu)式如圖1所示。香豆素類化合物是一類具有香豆素母核的雜環(huán)化合物，具有抗癌[1]、抗炎[2]、抗菌[3]等生物活性。此外，香豆素類化合物對(duì)乙酰膽堿酯酶也具有抑制活性，如8-羥基香豆素[4]、蛇床子素[5]等，都表現(xiàn)出一定的對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制活性?；酋ｋ觐惢衔镆蚝?NHN=CH-結(jié)構(gòu)，具有很強(qiáng)的配位能力，也具有多種生物活性[6]。

為研究新型高效的乙酰膽堿酯酶抑制劑，本論文采用亞活性結(jié)構(gòu)拼接的方法，以7-二乙氨基香豆素為母核，引入磺酰腙結(jié)構(gòu)，將兩種活性結(jié)構(gòu)連接在一起，設(shè)計(jì)合成了3個(gè)衍生物(合成路線如圖2所示)，并采用Ellman法[7]測(cè)定了目標(biāo)化合物對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制活性。

圖1 香豆素結(jié)構(gòu)

圖2 目標(biāo)化合物的合成路線

Fig.2 The synthetic route of the target compounds

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Bruker Avance 600 MHz 核磁共振儀 (Bruker 公司)，TMS為內(nèi)標(biāo)；Thermo DSQ 質(zhì)譜儀(Thermo 公司)；YRT-3型熔點(diǎn)儀(南京旭析儀器有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Heidolph公司)RT-6100酶標(biāo)分析儀(雷杜公司)；所有試劑與溶劑均為市場(chǎng)所售分析純級(jí)。

1.2 實(shí)驗(yàn)部分

1.2.1 中間體2的合成 將稱取好的7-二乙氨基-4-甲基香豆素(1，1 mmol)置于50 mL 的圓底燒瓶中，加入10 mL 1,4-二氧六環(huán)，升溫至60 ℃。稱取二氧化硒(1.1mmol)加入反應(yīng)液中，然后將溫度升高到80 ℃，攪拌反應(yīng)。TLC檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)度。反應(yīng)進(jìn)行4小時(shí)后，底物反應(yīng)完全。將反應(yīng)液冷卻至室溫，過濾，除去反應(yīng)液中的沉淀。沉淀用20 mL二氯甲烷洗滌。合并有機(jī)溶劑，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，薄層硅膠層析分離，得黃色固體2，產(chǎn)率為73%，熔點(diǎn)171～173 ℃。

1.2.2 目標(biāo)化合物的合成 稱取1 mmol 中間體2、1 mmol取代磺酰肼于50 mL圓底燒瓶中。10 mL 無水乙醇溶解。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)。TLC進(jìn)行跟蹤檢測(cè)反應(yīng)是否反應(yīng)完全。5 ～ 12h后，底物反應(yīng)完全。將反應(yīng)液冷卻至室溫直到?jīng)]有固體析出。然后抽濾，所得固體用無水乙醇重結(jié)晶得腙類衍生物3a -c。

1.2.3 活性測(cè)定 采用Ellman法[7]對(duì)AChE體外抑制活性進(jìn)行測(cè)試。將稱好的樣品加適量二甲亞砜溶解后加pH 7.4的0.1mol/L磷酸緩沖液(PBS)溶液，配制成1mmol/L的待測(cè)溶液。陽性對(duì)照采用他克林，空白對(duì)照采用磷酸緩沖液(PBS)溶液。測(cè)定時(shí)首先在96孔板上加入用待測(cè)樣品10 μL，再依次加入40 μLPB、20 μL 2.5 mmol/L 的5,5-二流雙硝基苯甲酸(DTNB)、10 μL的電鰻乙酰膽堿酯酶，振蕩混勻，37℃預(yù)孵10min，然后加入20 μL 10 mmol/L的碘化硫代乙酰膽堿，37℃反應(yīng)10min，加入30μL 1%的SDS終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀測(cè)定405nm吸收值并計(jì)算樣品對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制活性。

2 結(jié)果與討論

目標(biāo)化合物的合成路線圖如圖2所示。本論文以1,4-二氧六環(huán)做溶劑，SeO2做氧化劑，將7-二乙氨基-4-甲基香豆素的甲基氧化成醛基，然后與取代磺酰肼反應(yīng)，生成7-二乙氨基香豆素磺酰腙類衍生物。所有目標(biāo)化合物都經(jīng)熔點(diǎn)、1H NMR和MS進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。解譜數(shù)據(jù)如下;

3a：產(chǎn)率70%，黃色固體，熔點(diǎn)176～178 ℃；1H NMR(600 MHz，DMSO ～ d6) δ：12.21(s，1H)，8.00 (d，J=9.6 Hz，1H)，7.98 (s，1H)，7.91～7.92 (m，2H)，7.69～7.71 (m，1H)，7.64 (t，J=7.2 Hz，2H)，6.69 (dd，J = 9.6，2.4 Hz，1H)，6.51 (d，J=2.4 Hz，1H)，6.15 (s，1H)，3.41 (q，J=7.2 Hz，4H)，1.11 (t，J=7.0 Hz，6H)；MS m/z：422.1 ([M+Na]+，100)。

3b：產(chǎn)率67%，黃色固體，熔點(diǎn)160～162 ℃；1H NMR (600 MHz，DMSO～d6) δ：12.12 (s，1H)，7.99 (d，J=9.0 Hz，1H)，7.96 (s，1H)，7.79(d，J=8.4 Hz，2H)，7.45(d，J=7.8 Hz，2H)，6.67(dd，J=9.0，2.4 Hz，1H)，6.51(d，J=2.5 Hz，1H)，6.15(s，1H)，3.41(q，J=7.2 Hz，4H)，2.37(s，3H)，1.11(t，J=7.2 Hz，6H)；MS m/z：436.0 ([M+Na]+，100)。

3c：產(chǎn)率62%，黃色固體，熔點(diǎn)161～163 ℃；1H NMR(600 MHz，DMSO～d6) δ：12.64 (s，1H)，8.53 (d，J=8.4 Hz，1H)，8.40 (d，J=8.4 Hz，1H)，8.35 (d，J=7.2 Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.80(d，J=9.0 Hz，1H)，7.72(t，J=8.4 Hz，1H)，7.61(t，J=8.4 Hz，1H)，7.26(d，J=7.2 Hz，1H)，6.55(dd，J=9.6，2.4 Hz，1H)，6.46(d，J=2.4 Hz，1H)，6.09(s，1H)，3.39(d，J=7.2 Hz，4H)，2.80(s，6H)，1.09(t，J=7.2 Hz，6H)；MS m/z：515.3([M+Na]+，100)。

采用改進(jìn)型的Ellman法測(cè)定了目標(biāo)化合物對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制活性，活性結(jié)果如表1所示。

表1 目標(biāo)化合物對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制活性(100μmol/L)

a本測(cè)試平行3次，重復(fù)2次；b陽性對(duì)照，測(cè)試濃度為1μmol/L。

如表1所示，7-二乙氨基香豆素磺酰腙類衍生物對(duì)乙酰膽堿酯酶具有一定的抑制活性，在100μmol/L濃度下，3個(gè)目標(biāo)化合物抑制活性分別達(dá)到32.6%，29.3%和26.1%，但都弱于陽性對(duì)照他克林。

3 結(jié)論

本文采用亞活性結(jié)構(gòu)拼接的方法，以7-二乙氨基-4-甲基香豆素為原料，通過氧化、親核反應(yīng)，在香豆素母核上引入磺酰腙結(jié)構(gòu)，合成了3個(gè)7-二乙氨基-香豆素類磺酰腙類衍生物，并進(jìn)行了體外抑制乙酰膽堿酯酶活性測(cè)試。初步測(cè)試結(jié)果顯示，目標(biāo)化合物對(duì)乙酰膽堿酯酶具有一定的抑制活性。