HPLC測定參苓白術丸中人參皂苷的含量

王登旭，趙文法，王洪梅

（1.聊城市藥品不良反應監(jiān)測中心，山東 聊城 252000；2.聊城市食品藥品檢驗檢測中心，山東 聊城252000）

參苓白術丸收載于《中國藥典》2015年版一部[1]，是由人參、茯苓、白術（麩炒）、山藥、白扁豆（炒）、蓮子、薏苡仁（炒）、砂仁、桔梗、甘草10味中藥制成的水丸，具有補脾胃，益肺氣之功效。臨床主要用于脾胃虛弱，食多便溏，氣短咳嗽，肢倦乏力，該品種經(jīng)多年的臨床驗證，證明療效顯著。本品現(xiàn)行質(zhì)量標準中僅收載人參的薄層色譜鑒別，不能完全反應其產(chǎn)品質(zhì)量。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對參苓白術丸主要成分人參中的人參皂苷Rg1、Re和Rb1進行定量控制。本研究參考國內(nèi)外有關資料[2-7]，經(jīng)多次試驗,建立了HPLC測定參苓白術丸中人參皂苷含量的新方法,實驗結果表明該方法準確、簡單、快捷、重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240型電子分析天平（瑞士Mettler）；Agilent1200高效液相色譜儀（配DAD檢測器，美國安捷倫）；HU6150B超聲波清洗器（天津恒奧）。

1.2 試藥

人參皂苷Rg1對照品（批號：110703-201832，中國食品藥品檢定研究院）；人參皂苷Re對照品（批號：110754-201827，中國食品藥品檢定研究院）；人參皂苷Rb1對照品（批號：110704-201827，中國食品藥品檢定研究院）；乙腈（色譜純，天津大茂）；水為超純水，其他試劑均為分析純；樣品為市售，陰性樣品為自制。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Thermo ODS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按表1進行梯度洗脫；檢測波長為203 nm；流速為1.0 ml/min；柱溫為30 ℃；進樣量為10 μl。

表1 梯度洗脫表

2.1.2 系統(tǒng)適用性試驗 取供試品溶液10 μl，照2.1.1項下色譜條件注入液相色譜儀，理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算應不低于4000，人參皂苷Rg1與相鄰峰的分離度均大于1.5。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品及人參皂苷Rb1對照品，加甲醇溶解并定量稀釋制成每l ml各含0.2 mg的混合溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品10袋，粉碎，混勻，取約10 g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷50 ml，加熱回流3 h，藥渣揮去溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2 %氫氧化鉀甲醇溶液50 ml，加熱回流1 h，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌藥渣及容器3次，合并洗液和濾液，蒸干，殘渣加水50 ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取4次（20 ml，20 ml，10 ml，10 ml），合并正丁醇提取液，分別用氨試液、1 % 磷酸二氫鉀溶液、正丁醇飽和的水各40 ml洗滌，棄去洗滌液，正丁醇液置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液制備 按處方工藝制備不含人參的陰性樣品，照2.2.2項下方法操作，即得。

2.3 專屬性考察

取混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀中，照2.1.1項下色譜條件測定。結果供試品溶液在與混合對照品溶液相同保留時間處有色譜峰，陰性對照溶液無干擾峰，說明方法專屬性好，見圖1。

圖1 混合對照品溶液（A）、陰性對照溶液（B）、供試品溶液（C）HPLC圖譜

2.4 線性范圍考察

精密稱取人參皂苷Rg1對照品0.02010 g、人參皂苷Re對照品0.02019 g及人參皂苷Rb1對照品0.02036 g，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品儲備液。精密吸取混合對照品儲備液0.5，1.0，2.0，5.0 ml，分別置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得系列標準溶液。照2.1.1項下色譜條件，取對照品儲備液及系列標準溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，用峰面積（A）對濃度（C）進行線性回歸，結果表明，人參皂苷Rg1在0.0402～0.804 mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關系良好，線性回歸方程為A=5082.3C-6.6572，r=0.9995；人參皂苷Re在0.04038～0.8076 mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關系良好，線性回歸方程為A=4849.5C+16.458，r=0.9997；人參皂苷Rb1在0.04072～0.8144 mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關系良好，線性回歸方程為A=5541.7C-5.0939，r=0.9999。

2.5 精密度試驗

取供試品溶液（批號：20181001），照2.1.1項下色譜條件連續(xù)測定5次，人參皂苷Rg1、Re、Rb1峰面積的RSD均小于2.0 %，結果表明精密度良好，符合分析要求。

2.6 重復性試驗

取供試品（批號：20181001）6份，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1.1項下色譜條件測定，分別計算6份樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的含量，結果顯示人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1含量的RSD均小于2.0 %。試驗結果表明，該方法重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

吸取2.6項下供試品溶液，按2.1.1項下色譜條件，分別在0，1，2，4，8，12，24 h測定1次。結果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，能滿足測定需要。

2.8 加樣回收試驗

取已知含量的供試品（批號：20181001）適量，加入適量混合對照品溶液，制成低、中、高3個不同濃度的供試品溶液各3份，分別測定其含量，結果見表2～4。試驗結果表明，該方法準確度符合規(guī)定。

表2 人參皂苷Rg1加樣回收試驗結果（n=6）

表3 人參皂苷Re加樣回收試驗結果（n=6）

表4 人參皂苷Rb1加樣回收試驗結果（n=6）

2.9 樣品測定

3批市售樣品分別按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1.1項下色譜條件測定，按外標法以峰面積計算含量。結果批號為20181001，20181002，20181101的樣品含量測定結果見表5。

表5 樣品測定結果

3 結論

本文參考國內(nèi)外大量有關人參皂苷含量測定方法的文獻資料并經(jīng)多次試驗，建立了HPLC測定參苓白術丸中人參皂苷含量的方法。實驗結果顯示，本方法專屬性良好，簡便、快捷、準確，可用于參苓白術丸中人參皂苷含量的質(zhì)量評價。