“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)*

劉付香

（廣東省中山市實(shí)驗(yàn)中學(xué) 廣東中山 528403）

“DNA 的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)是人教版高中生物學(xué)選修1 專題5 中的一個(gè)重要實(shí)驗(yàn)［1］，也是新課程標(biāo)準(zhǔn)中要求學(xué)生掌握的一個(gè)重要內(nèi)容，該實(shí)驗(yàn)不僅能幫助學(xué)生加深理解DNA 分子相關(guān)的理論知識(shí)，還能幫助學(xué)生理解分子生物學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)方法。教材中以植物或雞血為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行DNA 的粗提取，并用二苯胺試劑鑒定DNA。但教材中提供的實(shí)驗(yàn)方案存在一定的局限性：①雞血不易采集保存、費(fèi)用較高；②實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣（8 個(gè)步驟、3 次過(guò)濾、6 次攪拌）；③實(shí)驗(yàn)耗時(shí)較長(zhǎng)且成功率低，學(xué)生在一節(jié)課內(nèi)很難完成。針對(duì)這些不足，對(duì)教材中的實(shí)驗(yàn)做了一些改進(jìn)。

1 實(shí)驗(yàn)改進(jìn)

1.1 結(jié)合前面所學(xué)知識(shí)，改進(jìn)實(shí)驗(yàn)材料 合理選擇實(shí)驗(yàn)材料可簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作步驟、降低實(shí)驗(yàn)成本。教材中提供的材料洋蔥、菜花等提取過(guò)程存在研磨困難、操作繁瑣等缺點(diǎn)；雞血?jiǎng)t存在取材不便、不易保存等缺點(diǎn)。故用人口腔上皮細(xì)胞代替，材料方便易得，同時(shí)免去了研磨、過(guò)濾等步驟［2］。且學(xué)生在學(xué)習(xí)《必修1·分子與細(xì)胞》時(shí)已經(jīng)做過(guò)“觀察DNA和RNA 在人口腔上皮細(xì)胞中的分布”實(shí)驗(yàn)，在顯微鏡下能清晰地觀察到被染成綠色的細(xì)胞核。因此，從自己的口腔上皮細(xì)胞中提取DNA，更有說(shuō)服力，也更容易建立細(xì)胞核、染色體和DNA 之間的聯(lián)系。

1.2 簡(jiǎn)化提純過(guò)程，提高實(shí)驗(yàn)成功率 教材中用不同濃度的氯化鈉和冷乙醇去除雜質(zhì)，操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，提取率低。故筆者運(yùn)用化學(xué)知識(shí)配制了提取液：內(nèi)含2% SDS、3% EDTA、0.1 g／mL NaCl。EDTA 是DNA 酶的抑制劑，SDS 可使蛋白質(zhì)變性，0.1 g／mL NaCl 可溶解DNA。綜合提純DNA 的諸多因素，將原本需要多種試劑多個(gè)步驟的實(shí)驗(yàn)操作，簡(jiǎn)化為只需要添加DNA 提取液即可達(dá)到目的，有助于提高實(shí)驗(yàn)的成功率。

1.3 巧用自制教具，改進(jìn)鑒定DNA 的方法 教材中用二苯胺試劑通過(guò)加熱煮沸的方法鑒定DNA，然而學(xué)生用此種方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，多以失敗告終。故本實(shí)驗(yàn)采用分子生物學(xué)中常用的瓊脂糖凝膠電泳鑒定DNA，但考慮到電泳儀及配套顯影裝置價(jià)格昂貴，筆者在國(guó)內(nèi)、外相關(guān)文獻(xiàn)［3-5］的啟發(fā)下，用生活中常見(jiàn)的材料自制了一套凝膠電泳裝置和凝膠顯影裝置。

1.3.1 利用生活中常見(jiàn)的材料，自制凝膠電泳裝置 筆者自制的凝膠電泳裝置（圖1）由大小不同的塑料盒、鋁箔、梳子、鱷魚(yú)夾導(dǎo)線及串聯(lián)電池組成：大塑料飯盒相當(dāng)于電泳槽，兩端貼上鋁箔制成電極；小塑料盒相當(dāng)于制膠板，硬紙板裁剪后制成梳子；7 個(gè)9 伏鋰電池串聯(lián)后制成電源。

圖1 自制凝膠電泳儀

1.3.2 利用生活中常見(jiàn)的材料，自制凝膠顯影裝置 筆者參考凝膠成像系統(tǒng)觀察DNA 分子的原理，利用廢棄物品及生活中的廉價(jià)材料自制了一套凝膠顯影裝置，用以觀察凝膠中的DNA 分子（圖2）。該裝置由不透光的板材裁剪、拼裝后制成暗箱，并在外殼上端打孔安裝攝像頭，內(nèi)接波長(zhǎng)為254 nm 的紫外燈燈管，接通電源后便可用于觀察凝膠中的DNA 分子。

圖2 自制凝膠顯影裝置

2 改進(jìn)后的實(shí)驗(yàn)操作

2.1 DNA 的提取

1）通過(guò)漱口法取10 mL 口腔上皮細(xì)胞樣液于塑料小燒杯中；2）加入1 mL 提取液，攪拌均勻；3）加入20 mL（2 倍等體積）95%的冷乙醇，靜置1 min 后用玻璃棒纏繞取出DNA 分子；4）將玻璃棒中的DNA 分子溶于0.5 mL 蒸餾水中，備用。

2.2 瓊脂糖凝膠電泳鑒定DNA 瓊脂糖凝膠電泳鑒定DNA 的具體操作過(guò)程如表1所示。

表1 瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)過(guò)程

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論

改進(jìn)實(shí)驗(yàn)后，學(xué)生所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3、圖4所示。從圖中可看出，用改進(jìn)后的方法和裝置能較好地達(dá)到提取DNA 和鑒定DNA 的目的。

圖3 人口腔上皮細(xì)胞提取的DNA

圖4 紫外顯影下DNA 凝膠電泳圖

4 改進(jìn)后的優(yōu)點(diǎn)

1）實(shí)驗(yàn)效果明顯、成本低、耗時(shí)短：改進(jìn)后的提取DNA 方法取材方便、樣品用量少、操作簡(jiǎn)單，5 min 便可提取出一定量的DNA 分子。

2）自制凝膠電泳裝置、自制凝膠顯影裝置材料廉價(jià)易得，成本較專業(yè)設(shè)備大幅度降低，填補(bǔ)了儀器、藥材昂貴而不能開(kāi)設(shè)該實(shí)驗(yàn)的空白，讓學(xué)生有機(jī)會(huì)親手操作，真正理解并掌握凝膠電泳鑒定DNA 這一技術(shù)，加深對(duì)DNA 分子的全面認(rèn)識(shí)。

3）推廣性強(qiáng)：本次創(chuàng)新除了可用于生物學(xué)課堂教學(xué)外，還可推廣到家庭實(shí)驗(yàn)、社團(tuán)活動(dòng)和科技創(chuàng)新競(jìng)賽活動(dòng)，由于材料廉價(jià)易得，既可在城鎮(zhèn)學(xué)校開(kāi)展，又可在鄉(xiāng)村學(xué)校開(kāi)展。