中醫(yī)藥干預肝癌干細胞的研究進展▲

付 彬 莫春梅 覃艷春 蔣瑞沅 彭海萍 榮 震

(1 廣西中醫(yī)藥大學腫瘤科，南寧市 53000，電子郵箱：874428277@qq.com；2 廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，南寧市 53000)

【提要】 肝癌是全世界重要的衛(wèi)生難題，其對放化療不敏感，且復發(fā)率高，5年生存率低，嚴重威脅人們的生命健康。肝癌干細胞是肝癌細胞中具有干細胞性質(zhì)的一類細胞，有形成腫瘤的潛力，一般的抗腫瘤治療難以對其產(chǎn)生效果。而中醫(yī)藥在腫瘤的防治中具有較好的療效，可改善肝癌患者的生活質(zhì)量。本文就中醫(yī)藥干預肝癌干細胞的研究進展做一綜述。

隨著乙肝病毒、丙肝病毒感染的有效控制，肝癌發(fā)病率有所降低,但肝癌仍是全球重要的公共衛(wèi)生難題。1990到2016年,在全球范圍內(nèi)肝癌的發(fā)病病例從47.10萬人至100.78萬人，增長114.0%，每年總的年齡標準化發(fā)病率平均上漲0.34%(95%CI：0.22%～0.45%)[1]。因此，肝癌的防治顯得尤為重要。肝癌細胞中的肝癌干細胞(liver cancer stem cell,LCSC)具有干細胞性質(zhì)，有形成腫瘤的潛力，一般的抗腫瘤治療對其效果不佳。目前，肝癌的主要治療手段仍是手術(shù)治療和肝移植，但我國大部分患者多合并慢性肝炎和肝硬化，手術(shù)率低，故肝移植是成為此類病例的有效治療方法，但適應證極其嚴格，且合適肝源難以提供。中醫(yī)藥防治腫瘤具有較好的療效，可以改善患者生活質(zhì)量，已成為肝癌治療的主要方法之一。現(xiàn)就中醫(yī)藥干預LCSC的研究進展做一綜述。

1 腫瘤干細胞與惡性腫瘤

腫瘤干細胞是癌細胞中能夠?qū)崿F(xiàn)“自我復制”和“多細胞分化”的一類細胞群，其極強的增殖能力使得腫瘤細胞群得以長久生存，此外其轉(zhuǎn)移能力可導致腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移。因此，腫瘤干細胞被認為是惡性腫瘤的“元兇”。一方面，目前已證實腫瘤干細胞不僅在腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，也是腫瘤復發(fā)以及抗癌藥物耐藥的重要因素，分化的腫瘤細胞可經(jīng)放、化療被迅速殺死，而腫瘤干細胞則可逃避藥物攻擊，對放、化療等現(xiàn)有的治療手段不敏感，導致腫瘤的治療不徹底，容易復發(fā)、轉(zhuǎn)移。研究表明骨髓基質(zhì)細胞為腫瘤干細胞的“避難所”，其通過不同的信號傳導途徑和細胞-細胞相互作用使腫瘤干細胞逃避化療誘導的死亡[2]。在乳腺癌中，乳腺癌間充質(zhì)干細胞通過激活白細胞介素(interleukin，IL)-6/信號傳導及轉(zhuǎn)錄激活蛋白(signal transducer and activator of transcription, STAT)3通路,在細胞水平降低順鉑誘導MCF-7細胞凋亡的作用[3]。在食管癌中，CD44v8-10干細胞通過CD44v8-10-xCT-谷胱甘肽軸抑制放療效果，導致患者不良預后[4]。另一方面，腫瘤微環(huán)境的改變也影響到腫瘤干細胞的分化，在缺氧狀態(tài)下，低氧細胞周圍的酸性微環(huán)境可以激活一部分蛋白酶，促進腫瘤干細胞表型的表達[5]。由此可見，腫瘤干細胞影響癌癥的發(fā)展、轉(zhuǎn)歸，在治療癌癥的過程中以腫瘤干細胞為靶點可獲得較好的效果。

2LCSC

LCSC與肝癌的發(fā)生緊密相關(guān)。Hur等[6]利用轉(zhuǎn)錄組學和代謝組學方法系統(tǒng)地比較了LCSC和非LCSC在基因組規(guī)模上的代謝差異，結(jié)果顯示，與非LCSC相比，LCSC可增強糖酵解的增殖速率，且LCSC中的癌癥代謝調(diào)節(jié)中心點myc顯著上調(diào)。目前，公認的LCSC表面標記物有CD133、CD13、CD44、CD90、DLK1等。其中，CD133 作為LCSC特異性標記物，具有5個跨膜區(qū)、相對分子質(zhì)量為 120 000 ，是影響肝癌發(fā)生和總體存活的重要功能因子[7]。Rozeik等[8]研究發(fā)現(xiàn)，在慢性肝炎、肝硬化和肝癌中存在有CD133和CD44分布的腫瘤干細胞簇，且隨著疾病進展，CD133和CD44的表達增加。CD133通過誘導CREB結(jié)合蛋白-β-連環(huán)蛋白信號和TIC中的細胞增殖促進干細胞增殖[9]。CD24、CD133陽性的LCSC可表達誘導型一氧化氮合酶，誘導型一氧化氮合酶進一步激活Notch1信號傳導通路，促進小鼠異種移植腫瘤形成[10]。研究表明，敲低CD133表達，人肝癌細胞MHCC-H的侵襲性能力明顯下降，同時，與侵襲性密切相關(guān)的基因基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)2和MMP9表達降低，提示下調(diào)CD133的表達，可使LCSC的惡性生物學行為下降[11]。

3 中醫(yī)藥在干預LCSC中的應用研究

3.1 肝癌發(fā)病的中醫(yī)機理 《諸病源候論》中提及“主臟受邪……留滯不去，乃成積聚”，強調(diào)肝癌的發(fā)病是在正氣虛的基礎上，氣郁，血瘀，痰結(jié)，濕聚，熱毒等病理產(chǎn)物糾結(jié)，日久聚結(jié)形成癌。在治療方面，《景岳全書》概括了攻、消、補、散四者，《醫(yī)宗必讀》強調(diào)“屢攻屢補，以平為期”的道理，皆認為應調(diào)動機體自身正氣來抵御病邪侵襲，達到“養(yǎng)正積自除”的目的。這與現(xiàn)代醫(yī)學的“干細胞理論”—靶向腫瘤干細胞并使其向正常細胞分化的理論一致。

3.2 中醫(yī)治療肝癌的方藥

3.2.1 一貫煎：一貫煎中的生地滋陰血、補肝腎，枸杞益肝陰、養(yǎng)肝體，川楝子具有滋陰疏肝的功效，能疏泄肝氣。單思等[12]研究發(fā)現(xiàn)，一貫煎可通過TP53、核因子κB (nuclear factor kappaB，NF-κB)、STAT1、細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶 (extracellular regulated protein kinase，ERK)1/2、MMP2等位點干預肝癌信號通路。Xu等[13]的研究表明，中藥復方一貫煎可激活Wnt信號通路，促進胎兒肝干細胞/祖細胞再生分化為肝細胞，增強胎兒肝干細胞/祖細胞移植的治療效果。

3.2.2 姜黃素：姜黃素是一種從姜黃中提取的酸性多酚類物質(zhì)。 姜黃素直接調(diào)控人肝癌細胞增殖，降低 STAT3 磷酸化來下調(diào)LCSC相關(guān)標記物的水平，包括STAT3、磷酸化STAT3、CD24、CD133、CD44 和 CD90 蛋白，從而起到抑制肝癌細胞增殖的作用[14]。另外，姜黃素能通過抑制芳香烴受體、細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶等信號通路來抑制鄰苯二甲酸酯誘導的細胞遷移、侵襲和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換，降低體外肝癌細胞中腫瘤干細胞的比例，并抑制體內(nèi)腫瘤生長和轉(zhuǎn)移[15]。

3.2.3 解毒消癥飲：解毒消癥飲有清熱解毒、活血散結(jié)等功效，其提取物EE-JXY可下調(diào)CD90、CD133 mRNA及蛋白的表達水平，逆轉(zhuǎn)LCSC的自我更新[16]。

3.2.4 金雀異黃素：金雀異黃素是大豆體內(nèi)的一種異黃酮類物質(zhì)。李翀等[17-19]的研究表明，金雀異黃素能下調(diào)CD133和CD44蛋白水平，抑制人肝細胞癌 SMMC-7721細胞系癌球形成力，逆轉(zhuǎn)LCSC樣細胞對氟尿嘧啶的耐藥性；其還可協(xié)同腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體降低NF-κB(p65)蛋白表達水平，從而誘導LCSC樣細胞凋亡。

3.2.5 苦參堿：苦參堿是苦參的干燥根、植株的乙醇提取物?？鄥A及其衍生物具有降低細胞增殖和誘導細胞凋亡的作用。研究表明，苦參堿能提高細胞黏附調(diào)節(jié)基因、E-鈣粘蛋白、層粘連蛋白和纖連蛋白的表達，抑制體外LCSC的增殖，對LCSC具有抵抗作用[19]。

3.2.6 片仔癀：片仔癀可泄熱解毒，涼血化瘀。魏麗慧等[20]的研究結(jié)果顯示，相比對照組，片仔癀中、高劑量組肝干細胞的存活率降低(P<0.05)，提示中藥片仔癀可抑制LCSC增殖及誘導其凋亡。

3.2.7 蔓荊子總黃酮：蔓荊子總黃酮可以下調(diào)叉頭框蛋白M1和MMP2的表達，抑制SMMC-7721細胞源性 LCSC 的遷移和侵襲能力，從而起到降低肝癌的惡性程度、抑制肝癌轉(zhuǎn)移的作用[21]。

3.2.8 小白菊內(nèi)酯：彭紹平[22]研究發(fā)現(xiàn)，小白菊內(nèi)酯和三氧化二砷通過線粒體途徑、p53途徑和NF-κB途徑，協(xié)同控制肝癌CD133+HepG2細胞增殖，并誘導其凋亡,同時可有效殺傷LCSC。

3.2.9 扶正化瘀解毒方：陳飛宇[23]對扶正化瘀解毒方中石見穿的化學成分樺木酸進行研究，發(fā)現(xiàn)樺木酸作用于LCSC后,可通過調(diào)控Wnt通路控制HepG2細胞及其腫瘤干細胞的增殖和凋亡，使得G1/G0期及G2/M期細胞明顯減少,且呈現(xiàn)一定的劑量-效應關(guān)系。

3.2.10 芹菜素：中醫(yī)藥講究藥食同源，芹菜是常見蔬菜，其中的芹菜素一種黃酮類化合物，具有抗癌作用。姜素芳等[24]研究發(fā)現(xiàn)，芹菜素可以降低LCSC的腫瘤球形成率以及酪蛋白激酶Ⅱα蛋白表達水平。

3.2.11 桔梗皂苷：桔梗皂苷是桔?？浦参锝酃５母稍锔?。宣麗楊[25]研究了桔梗皂苷D和5-氟尿嘧啶對HepG2細胞源性LCSC的活性和凋亡的影響，發(fā)現(xiàn)桔梗皂苷D能下調(diào)HCLS1相關(guān)蛋白X1的表達，從而抑制LCSC對5-氟尿嘧啶的抗藥性。

3.2.12 壁虎：壁虎可祛風活絡、散結(jié)。黃慧玲等[26]的實驗結(jié)果顯示，壁虎能抑制Wnt信號通路、腫瘤球的形成，降低LCSC表面標記物CD133、CD44的表達，因此可以影響LCSC的特性，進而發(fā)揮抗腫瘤作用。

3.2.13 白楊素：白楊素為中藥蜂膠膠囊的主要活性成分，通過抑制酪蛋白激酶Ⅱα表達以阻斷Hedgeh?g信號轉(zhuǎn)導,從而抑制肝癌干樣細胞球形成[27]。

3.2.14 三七皂苷：三七含皂苷、黃酮、多糖、淀粉、蛋白質(zhì)、三七素及多種微量元素，其中三七總皂苷對心血管疾病有很好的防治作用[28]。此外，也有相關(guān)研究報告了其在癌癥的治療中的應用，如張瑋[29]研究發(fā)現(xiàn)，三七總皂苷聯(lián)合順鉑可以降低肝癌細胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表達,增加凋亡蛋白Bax表達而加速肝癌細胞的凋亡，抑制肝癌細胞遷移和侵襲力,從而抑制LCSC的干細胞特性。

4 小 結(jié)

中醫(yī)藥可以通過誘導LCSC分化，降低LCSC表面標記物水平，以及降低LCSC對藥物的抵抗性，發(fā)揮治療肝癌的作用。隨著對癌癥治療研究的深入，藥物治療癌癥的作用機制日趨清晰，中醫(yī)藥具有毒副反應少，治療靶點多等優(yōu)點，今后應在辨證論治中發(fā)揮中醫(yī)對肝癌的治療作用。