車前子酒炙工藝優(yōu)選及其不同炮制品對比研究*

田灣灣，鐘琳瑛，張 琦，劉彩鳳，梁 軍，楊琳潔，劉冬涵，白 潔，杜守穎

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 102488）

車前子始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]，為車前科植物車前Plantago asiatica L.或平車前Plantago depressa Willd.的干燥成熟種子，具有清熱利尿通淋，滲濕止瀉，明目，祛痰的作用[2]。車前子炮制歷史悠久，漢代《華氏中藏經(jīng)》首次記載“炒”法，唐代有酒浸、酒洗的方法；宋代有酒浸炒、酒浸焙、酒蒸等；明代出現(xiàn)了米泔水浸蒸法；清代不僅強(qiáng)調(diào)入湯液炒、入丸散酒浸、再蒸熟等，還首次出現(xiàn)了用鹽炒的方法[3]?？梢?，車前子的炮制方法歷來注重炒法，多使用酒制，而鹽為較后期出現(xiàn)的炮制輔料?，F(xiàn)行的藥典及地方標(biāo)準(zhǔn)中均不再使用酒炒車前子，現(xiàn)行炮制品規(guī)格有生品和鹽炙品兩種，鹽炙逐漸取代酒炙成為現(xiàn)代車前子的主要炮制方法，改變原因未知。

在古代經(jīng)典名方如易黃湯、完帶湯、利火湯等中均采用酒炒車前子入藥[4]，經(jīng)典名方是中藥方劑的杰出代表，是歷代醫(yī)家臨床經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)，目前仍廣泛應(yīng)用、療效確切。車前子主要含有苯乙醇苷類、環(huán)烯醚萜類、黃酮類、生物堿類及多糖類成分[5]，其中，京尼平苷酸和毛蕊花糖苷在車前子中的含量很高，也是作為2015年版中國藥典控制車前子內(nèi)在質(zhì)量的指標(biāo)性成分。出膏率的多少在一定程度上能夠反映出中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)或有效成分的溶出情況，能作為評價(jià)中藥質(zhì)量的定性指標(biāo)[6]。由此，本課題對酒炙車前子的炮制工藝進(jìn)行了研究，優(yōu)選出最佳的酒炙工藝，并與生品和鹽炙品在指標(biāo)性成分的含量、水提液指紋圖譜的相似度、出膏率等方面進(jìn)行了比較，以期為生品和鹽炙品能否取代酒炙品提供依據(jù)，并為古代經(jīng)典名方中不再使用的炮制品規(guī)格的炮制工藝研究及不同炮制品之間的比較提供思路。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津高效液相色譜儀LC-20A[二極管陣列檢測器（DAD）檢測器，島津（中國）有限公司]；賽多利斯BSA 224S電子分析天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]；JM-B100002電子天平（余姚市紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司）；HH-6型電熱恒溫水浴鍋 （北京科偉永興儀器有限公司）；DZF-6051型真空干燥器 （北京利康達(dá)圣科技有限公司）；BY-400C-1型醫(yī)用離心機(jī)；H22-X3型九陽電陶爐 （杭州九陽生物電器有限公司）。

1.2 材料 實(shí)驗(yàn)用車前子于2018年購自北京市鶴延齡藥業(yè)有限公司，并經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)劉春生教授鑒定為車前科植物車前Plantago asiatica L．的干燥成熟種子。炮制用黃酒：塔牌紹興花雕酒（酒精度15．0%vol），購自浙江塔牌紹興酒有限公司。京尼平苷酸對照品（含量 97．4%，批號 111828-201604），毛蕊花糖苷對照品（含量 92．5%，批號 111530-201713），上述標(biāo)準(zhǔn)品均購自中國食品藥品檢定研究院；異毛蕊花糖苷（含量≥98%，批號61303-13-7），購自上海源葉生物科技有限公司。甲醇、乙腈、冰醋酸為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定方法 按照“2015年版中國藥典”中車前子“含量測定”方法對車前子中的指標(biāo)性成分京尼平苷酸和毛蕊花糖苷進(jìn)行含量測定。

2.1.1 色譜條件 色譜柱Agilent ZORBAX SB-C18（4．6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇（A）-0．5%醋酸水溶液（B），梯度洗脫：0～1 min，5%A；1～40 min，5%～60%A；40～50 min，60%～5%A； 流速 1 mL/min；柱溫30℃；進(jìn)樣體積10 μL；檢測波長254 nm。

2.1.2 混合對照品溶液的制備 分別精密稱取京尼平苷酸對照品和毛蕊花糖苷對照品適量，置10mL棕色量瓶中，加60%甲醇制成京尼平苷酸1．162mg/mL、毛蕊花糖苷1．154 mg/mL的對照品母液。吸取上述對照品母液1 mL于10 mL量瓶，加60%甲醇稀釋為含京尼平苷酸 0．1162mg/mL、毛蕊花糖苷 0．1154mg/mL的混合對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取車前子粉末（過二號篩）約 1．000 0 g，精密稱定，置 100 mL 具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，于87℃水浴下加熱回流2 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過0．45 μm的微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。樣品及對照品溶液的高效液相色譜（HPLC）圖見圖 1。

2.1.4 精密度考察 取“2．1．2”項(xiàng)下混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，測定峰面積。結(jié)果京尼平苷酸和毛蕊花糖苷峰面積的RSD分別為0．05%和 0．41%，均小于 3%，表明儀器具有良好的精密度。

圖1 車前子樣品含量測定色譜圖Fig.1 Chromatogram of Plantaginis Semen sample content determination

2.1.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2．1．2”項(xiàng)下的混合對照品溶液 5、10、15、20、25、30、35 μL 注入HPLC 儀進(jìn)樣，以進(jìn)樣質(zhì)量（X，μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y，Vu）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到京尼平苷酸的回歸方程為 Y=667 730X+381．21，r=0．999 9。毛蕊花糖苷的回歸方程為Y=709 330X+10 947，r=0．999 9。結(jié)果表明京尼平苷酸和毛蕊花糖苷分別在0．581 0～3．486 0 μg 和 0．533 0～3．734 5 μg 范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2 車前子酒炙工藝研究

2.2.1 加酒量的考察 準(zhǔn)確稱取車前子藥材100 g各 5 份，分別噴灑黃酒 10 、12．5、15、17．5、20 g，充分拌勻，加蓋悶潤30 min，于120℃下炒制7 min。按照“2．1”項(xiàng)下的方法對車前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量進(jìn)行測定，平行2份。測定結(jié)果見表1。

表1 不同加酒量對車前子指標(biāo)成分含量的影響（）Tab.1 Effect of different yellow wine volume on the content of ingredients in Plantaginis Semen（）%

表1 不同加酒量對車前子指標(biāo)成分含量的影響（）Tab.1 Effect of different yellow wine volume on the content of ingredients in Plantaginis Semen（）%

加酒量（g） 京尼平苷酸含量 毛蕊花糖苷含量10．0 0．964±0．003 0．872±0．002 12．5 0．961±0．002 0．874±0．003 15．0 0．957±0．010 0．869±0．002 17．5 0．941±0．001 0．859±0．002 20．0 0．941±0．000 0．862±0．005

由表1可知，不同加酒量，對于車前子中的京尼平苷酸含量來說，隨著加酒量的增加，其含量基本呈下降趨勢，經(jīng) SAS（8．2版）單因素方差分析，F(xiàn)=9．63，P=0．0144＜0．05，說明不同加酒量對京尼平苷酸有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，經(jīng) SNK 多重比較，{10 g，12．5 g，15 g}＞{17．5g，20 g}，說明對于京尼平苷酸來說，每 100 g 車前子，加酒量為10～15 g時(shí)，含量均較高。對于車前子中的毛蕊花糖苷來說，經(jīng)SAS（8．2版）單因素方差分析，F(xiàn)=8．81，P=0．017 4＜0．05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明隨著加酒量增加，其含量也基本呈下降趨勢。經(jīng)SNK 多重比較，{10 g，12．5 g，15 g}＞{17．5 g，20 g}，與車前子中京尼平苷酸的變化保持一致，說明加酒量為10～15 g時(shí)，車前子中毛蕊花糖苷的含量也較高。為節(jié)約成本，經(jīng)綜合考慮，每100 g車前子，選擇加酒量為10 g。

2.2.2 悶潤時(shí)間的考察 準(zhǔn)確稱取100 g車前子3 份，各加黃酒 10 g，分別悶潤 30、45、60 min，于120℃下炒制 7 min。按照“2．1”項(xiàng)下的方法對車前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量進(jìn)行測定，平行2份。測定結(jié)果見表2。

表2 悶潤時(shí)間對車前子中指標(biāo)成分含量的影響（）Tab.2 Effect of different moistening time on the content of ingredients in Plantaginis Semen（）%

表2 悶潤時(shí)間對車前子中指標(biāo)成分含量的影響（）Tab.2 Effect of different moistening time on the content of ingredients in Plantaginis Semen（）%

悶潤時(shí)間（min） 京尼平苷酸含量 毛蕊花糖苷含量30 0．963±0．002 0．888±0．001 45 0．971±0．003 0．884±0．001 60 0．972±0．007 0．900±0．004

由表2可知，不同悶潤時(shí)間對于車前子中京尼平苷酸的含量來說，含量無明顯差異。經(jīng)SAS（8．2版）單因素方差分析，F(xiàn)=2．43，P=0．2355＞0．05，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；均值比較，可優(yōu)選悶潤60 min。對于車前子中毛蕊花糖苷的含量來說，經(jīng)SAS（8．2版）單因素方差分析，F(xiàn)=25．43，P=0．013＜0．05， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，經(jīng)SNK多重比較，{60 min}＞{30 min，45 min}，即悶潤60 min時(shí)，毛蕊花糖苷含量最高。綜合考慮，悶潤時(shí)間優(yōu)選60 min。

2.2.3 炒制溫度的考察 酒炙一般要求文火炒制，對于文火的溫度，普遍認(rèn)為的范圍是80～150℃，也有從直觀的感覺描述“文火”是將鐵鍋預(yù)熱約3 min，然后取適量清水將之滴于鍋中，此時(shí)水滴隨之轉(zhuǎn)化為水泡，且向四周噴濺，并發(fā)出“吱”聲者為度[7]，經(jīng)實(shí)驗(yàn)，這種程度的溫度約為120℃。文獻(xiàn)中也多將文火確定為（120±5） ℃、中火為（170±5）℃、武火為（200±5）℃[8]。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的條件，用紅外激光測溫儀，距離炒藥鍋鍋底10 cm，測鍋底正中心的溫度，考察了用電陶爐400 W加熱時(shí)，空鍋鍋溫隨著加熱時(shí)間延長的變化情況，見圖2。由此，確定考察炒制溫度為90、120、150℃。具體操作如下：準(zhǔn)確稱取100 g車前子3份，加黃酒10 g，悶潤60 min，分別在90、120、150 ℃下炒制 7 min。 按照“2．1”項(xiàng)下的方法對車前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量進(jìn)行測定，平行2份。測定結(jié)果見表3。

表3 不同炒制溫度對車前子中指標(biāo)成分含量的影響（）Tab.3 Effect of different stir-frying temperature on the content of ingredients in Plantaginis Semen（）%

炒制溫度（℃） 京尼平苷酸含量 毛蕊花糖苷含量90 1．039±0．001 0．902±0．003 120 1．046±0．000 0．903±0．001 150 1．054±0．001 0．927±0．001

由表3可知，不同炒制溫度，對于車前子中的京尼平苷酸的含量來說，隨著炒制溫度的升高，其含量也隨之增加，經(jīng)SAS（8．2版）單因素方差分析，F(xiàn)=144．60，P=0．0010＜0．05， 說明不同炒制溫度對京尼平苷酸的含量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，經(jīng)SNK多重比較，{150℃}＞{120℃}＞{90℃}，說明對于京尼平苷酸來說，文火范圍內(nèi)優(yōu)選150℃。不同炒制溫度，對于車前子中毛蕊花糖苷的含量來說，經(jīng)SAS（8．2版）單因素方差分析，F(xiàn)=85．23，P=0．002 3＜0．05，說明不同炒制溫度對毛蕊花糖苷的含量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，經(jīng)SNK多重比較，{150℃}＞{120℃，90℃}，說明對于毛蕊花糖苷來說，文火范圍內(nèi)也優(yōu)選150℃，與京尼平苷酸保持一致。綜上，最佳炒制溫度優(yōu)選150℃。

2.2.4 炒制時(shí)間的考察 教科書中對于車前子的炒制要求為“文火炒至略帶火色”[9]。經(jīng)小試實(shí)驗(yàn)，炒制5 min時(shí)，沒有黃酒味逸出，炒制7 min時(shí)，能帶火色，呈棕褐色，有香氣逸出，炒制11 min時(shí)已有焦香氣，車前子呈現(xiàn)黑紅色。結(jié)合鍋溫隨加熱時(shí)間延長溫度變化的情況，設(shè)計(jì)了炒制 5、7、9、11 min 4個(gè)水平。具體操作如下：準(zhǔn)確稱取100 g車前子4份，加黃酒 10 g，悶潤 60 min，分別在 150℃下炒制 5、7、9、11 min。 按照“2．1”項(xiàng)下的方法對車前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量進(jìn)行測定，平行2份。測定結(jié)果見表4。

表4 不同炒制時(shí)間對車前子中指標(biāo)成分含量的影響（）Tab.4 Effect of different stir-frying time on the content of ingredients in Plantaginis Semen（）%

表4 不同炒制時(shí)間對車前子中指標(biāo)成分含量的影響（）Tab.4 Effect of different stir-frying time on the content of ingredients in Plantaginis Semen（）%

炒制時(shí)間（min） 京尼平苷酸含量 毛蕊花糖苷含量5 1．021±0．000 0．915±0．005 7 1．046±0．000 0．925±0．001 9 1．054±0．001 0．941±0．002 11 1．072±0．000 0．948±0．000

由表4可知，不同炒制時(shí)間，對于車前子中京尼平苷酸的含量來說，隨著炒制時(shí)間的延長，其含量也隨之增加。經(jīng)SAS（8．2版）單因素方差分析，F(xiàn)=146 3．67，P＜0．000 1，說明不同炒制時(shí)間對京尼平苷酸的含量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，經(jīng)SNK多重比較，{11 min}＞{9 min}＞{7 min}＞{5 min}。 對于車前子中毛蕊花糖苷的含量來說，隨著炒制時(shí)間的延長，其含量也隨之增加，經(jīng) SAS（8．2 版）單因素方差分析，F(xiàn)=72．51，P=0．000 6＜0．01，說明不同炒制時(shí)間對毛蕊花糖苷的含量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，經(jīng)SNK多重比較，{11min}＞{9min}＞{7 min}＞{5 min}。綜合考慮，隨著炒至?xí)r間的延長，車前子中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量均會(huì)隨之提高，但是結(jié)合炒制狀態(tài)，炒制11 min時(shí)已有焦香氣散出，不宜過度炒制，從炒制程度來說，已接近炒焦的狀態(tài)，不宜優(yōu)選11 min，所以，優(yōu)選炒制時(shí)間9 min。

2.2.5 車前子酒炙單因素考察驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 分別稱取2份車前子藥材，各100 g，按照最佳炮制工藝進(jìn)行炮制，即加黃酒10 g，悶潤60 min，于150℃下炒制9 min。經(jīng)含量測定，結(jié)果見表5，表明該車前子最佳酒炙工藝穩(wěn)定可行。

2.3 車前子不同炮制品指標(biāo)成分含量的比較 分別稱取車前子、酒車前子、鹽車前子各100 g，酒車前子按照上述最佳酒炙工藝炮制而成，鹽車前子由同批車前子自制，參考藥典和文獻(xiàn)中的最佳鹽炙方法炮制而成[10]，按照“2．1”項(xiàng)下的方法對三者中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的含量進(jìn)行測定，各平行2份。測定結(jié)果見表6。

經(jīng)單因素方差分析：對于京尼平苷酸來說，F(xiàn)=76．77，P=0．002 7＜0．05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，經(jīng) SNK 多重比較，{酒車前子，鹽車前子}＞{車前子}，說明鹽車前子和酒車前子中的京尼平苷酸含量沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但均與車前子有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，經(jīng)炮制后含量增加。

表5 車前子酒炙工藝單因素驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)Tab.5 Single factor verification experiment of wine cellar process in Plantaginis Semen %

表6 車前子不同炮制品中指標(biāo)成分含量的比較（）Tab.6 Comparison on the content of index components in different processed products of Plantaginis Semen（）%

表6 車前子不同炮制品中指標(biāo)成分含量的比較（）Tab.6 Comparison on the content of index components in different processed products of Plantaginis Semen（）%

不同炮制品 京尼平苷酸含量 毛蕊花糖苷含量車前子 1．180±0．006 0．861±0．007酒車前子 1．233±0．003 0．906±0．002鹽車前子 1．238±0．006 0．868±0．002

對于毛蕊花糖苷，F(xiàn)=63．74，P=0．003 5＜0．01，經(jīng)SNK 多重比較，{酒車前子}＞{車前子，鹽車前子}，說明，經(jīng)酒炙后，毛蕊花糖苷的含量顯著增加，酒炙有助于毛蕊花糖苷的提取。

2.4 車前子不同炮制品水提液指紋圖譜的比較

2.4.1 色譜條件 Waters Xselect HSS T3色譜柱（4．6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈（A）-0．1%磷酸水（B），流速為 1 mL/min，DAD 全波長掃描（檢測波長254 nm），柱溫為30℃，進(jìn)樣體積10 μL。 洗脫梯度如下：0～6 min，3%A；6～22 min，3%～15%A，22～55 min，15%～40%A。

2.4.2 供試品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取最佳工藝炮制的酒車前子、鹽車前子、車前子各4 g，置于500 mL圓底燒瓶中，加入300mL水，加熱回流75min，用1層300目尼龍布趁熱過濾，放置室溫后，再調(diào)整體積至300 mL。取5 mL水提液離心10 min（10 000 r/min）后，用0．45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

2.4.3 對照品溶液的制備 分別稱取適量的京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品，置于10 mL棕色容量瓶中，用60%的甲醇超聲溶解后，再定容至刻度線，混合均勻，配置成適宜濃度的對照品溶液。

2.4.4 精密度考察 準(zhǔn)確稱取4．00 g車前子藥材，按 “2．4．2”項(xiàng)下制備的車前子供試品溶液，按照“2．4．1”項(xiàng)下的方法連續(xù)進(jìn)樣 6 次，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算所得圖譜保留時(shí)間及峰面積的RSD，并將所得圖譜導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng) （2012版）”進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，HPLC譜圖的各主要色譜峰保留時(shí)間及峰面積的 RSD 分別在 0．04%～0．12%、0．09%～0．70%，相似度大于 0．99，表明儀器精密度良好。

2.4.5 重復(fù)性考察 準(zhǔn)確稱取4．00 g車前子藥材6 份，按“2．4．2”項(xiàng)下制備的車前子供試品溶液，按照“2．4．1”項(xiàng)下的方法平行進(jìn)樣，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算所得圖譜保留時(shí)間及峰面積的RSD，并進(jìn)行相似度分析，結(jié)果顯示，HPLC圖譜的各主要色譜峰保留時(shí)間及峰面積的 RSD 分別在 0．03%～0．10%、0．66%～6．50%，相似度均大于0．99，表明重復(fù)性良好。

2.4.6 穩(wěn)定性考察 準(zhǔn)確稱取4．00 g車前子藥材，按 “2．4．2”項(xiàng)下制備的車前子供試品溶液，按照“2．4．1”項(xiàng)下的方法，分別于 0、3、6、9、15、24 h 進(jìn)樣測定，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算所得圖譜保留時(shí)間及峰面積的RSD，并進(jìn)行相似度分析，結(jié)果顯示，HPLC圖譜的各主要色譜峰保留時(shí)間及峰面積的RSD分別在0．03%～0．10%、0．15%～3．01%，不同時(shí)間進(jìn)樣測得的圖譜之間的相似度均大于0．99，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.7 車前子不同炮制品指紋圖譜的測定與分析 取“2．4．2 項(xiàng)”下制備的供試品溶液各 10 μL，按照“2．4．1 項(xiàng)”下的色譜條件進(jìn)行測定，得到不同炮制品的HPLC指紋圖譜，將不同炮制品的色譜圖AIA文件導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)（2012版）”，進(jìn)行共有峰數(shù)據(jù)處理，設(shè)置生車前子色譜圖S1為參照指紋圖譜，經(jīng)多點(diǎn)校正后進(jìn)行全譜峰匹配，共標(biāo)定14個(gè)共有峰，指認(rèn)3個(gè)共有峰，其中9、12、14號峰分別為京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和異毛蕊花糖苷所對應(yīng)的色譜峰，見圖3-5。經(jīng)相似度評價(jià)后，三者水提液的指紋圖譜相似度均大于0．99。進(jìn)一步對各共有峰進(jìn)行分析比較。由于14號峰峰面積相對較大，分離度較好，且其峰面積在不同炮制品中的RSD最小，故選擇其作為參照峰，各共有峰的相對峰面積見表7。以14個(gè)共有峰峰面積為指標(biāo)，對三者進(jìn)行配對t檢驗(yàn)，結(jié)果為：生品與酒炙品：t=-1．56，P=0．142 0；生品與鹽炙品：t=-1．52，P=0．152 2；酒炙品與鹽炙品：t=0．02；P=0．982 7≈1；雖然三者均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是由此能看出酒炙品與鹽炙品保持良好的一致性，而與生品差異較大。

圖3 車前子水提液特征圖譜Fig.3 HPLC fingerprint of Plantaginis Semen water extract

圖4 車前子混合對照品色譜圖Fig.4 HPLC fingerprint of mixed reference solution

圖5 車前子不同炮制品水提液特征圖譜比對Fig.5 Comparison on HPLC reference fingerprint spectra in Plantaginis Semen water extract of different processed products

2.4.8 不同炮制品出膏率的測定 將 “2．4．2項(xiàng)”下制備的車前子不同炮制品水提液經(jīng)過濃縮后，進(jìn)行真空減壓干燥，測定出膏率，平行兩份，結(jié)果見表8，生車前子的出膏率14．88%，鹽車前子為15．88%，酒車前子的出膏率為 16．25%。經(jīng)方差分析，F(xiàn)=16．17，P=0．024 7，經(jīng) SNK 多重比較，{酒車前子，鹽車前子}＞{車前子}，進(jìn)一步說明炮制能增加車前子的溶出，鹽車前子和酒車前子的出膏率均明顯高于生車前子。

3 討論與結(jié)論

3.1 車前子酒炙工藝各因素和水平的設(shè)立 關(guān)于車前子酒炙工藝各因素和水平的設(shè)立，參考了2015年版中國藥典中“0321炮制通則”中的酒炙方法，即“取待炮制品，加黃酒拌勻，悶透，置炒制容器內(nèi)，用文火炒至規(guī)定的程度時(shí)，取出，放涼。酒炙時(shí)，除另有規(guī)定外，一般用黃酒。每100 kg待炮制品用黃酒10～20 kg”，以及教科書中對酒車前子的炮制工藝“用黃酒將車前子拌勻，用文火炒至略帶火色”[2，9]。由此，每 100 g 車前子，設(shè)置了 10、12．5、15、17．5、20 g的加酒量，其中，加酒量為10～15 g時(shí)，車前子能夠充分拌勻，達(dá)到“輕捏成團(tuán)，松開即散”的程度；而加酒量為17．5 g和20 g時(shí)，車前子呈過分濕潤，幾乎能捏出黃酒的狀態(tài)。從指標(biāo)成分的含量及節(jié)省成本的角度，均以加酒量10 g為優(yōu)；悶潤時(shí)間的考察，在小試時(shí)，考察了 30、60、90 min，其中悶潤 60 min 與悶潤90 min在指標(biāo)性成分的含量上沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，故又細(xì)設(shè)為悶潤 30、45、60 min 3個(gè)水平，結(jié)果表明悶潤60 min較好；這恰好符合含有苷類和有機(jī)酸類的藥材應(yīng)“少泡多潤”的原則[11]，并且經(jīng)酒炙后，提高了車前子中苷類成分的溶解度。

表7 不同炮制品相對峰面積比較Fig.7 Comparison of relative peak area of different processed products

表8 車前子不同炮制品的出膏率（）Tab.8 Paste rate of different processed products of Plantaginis Semen（）%

表8 車前子不同炮制品的出膏率（）Tab.8 Paste rate of different processed products of Plantaginis Semen（）%

不同炮制品 出膏率車前子 14．88±0．13酒車前子 16．25±0．25鹽車前子 15．88±0．13

炒制溫度的設(shè)立，即以普遍認(rèn)為的文火溫度，設(shè)立了90、120、150℃3個(gè)水平；炒制時(shí)間的設(shè)立，以使車前子炒干并達(dá)到炒至略帶火色為目的，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室小試實(shí)驗(yàn)，設(shè)立了5、7、9、11 min 4個(gè)水平。結(jié)果優(yōu)選為150℃下炒制9 min，炒制溫度和炒制時(shí)間對飲片的質(zhì)量影響較大，溫度較低，容易變成僵子；溫度過高，黃酒迅速揮發(fā)，容易炒焦；并且炒制過程中要均勻翻攪，及時(shí)出鍋，不宜過度炒制，以防炒焦或炭化，使藥效降低。

3.2 HPLC指紋圖譜 波長的選擇，在190～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行了全波長掃描，在254 nm以下，供試品溶液出峰較多，但是有陰性溶劑峰的干擾，254 nm以上，出峰較少，特征峰信號較弱，特征不明顯，故選擇254 nm為車前子水提液指紋圖譜的檢測波長。共指認(rèn)了14個(gè)特征峰，其中9、12、14號分別為京尼平苷酸、毛蕊花糖苷和異毛蕊花糖苷的色譜峰，相對含量較高，其他成分的含量較低。在后續(xù)研究中，建議采用液質(zhì)聯(lián)用的方法，對其他成分進(jìn)行進(jìn)一步指認(rèn)。

3.3 不同炮制品的對比研究 在指標(biāo)成分的含量、水提液指紋圖譜的相似度及出膏率方面，鹽車前子和酒車前子均保持良好的一致性，考慮到經(jīng)典名方多為水煎煮，故只是對車前子的水提液指紋圖譜進(jìn)行了研究，三者水提液的指紋圖譜相似度良好，經(jīng)炮制后未見峰數(shù)目的增多或減少，沒有特異峰出現(xiàn)。車前子經(jīng)炮制后，其含量和出膏率均較生品有所提高。由此，筆者認(rèn)為單從指標(biāo)成分含量、指紋圖譜相似度及出膏率3個(gè)方面，可考慮用現(xiàn)行的鹽車前子取代酒車前子，但是在經(jīng)典名方研究中，還應(yīng)結(jié)合文獻(xiàn)研究考慮不同炮制品的應(yīng)用沿革、古代醫(yī)家的用藥習(xí)慣及傳統(tǒng)的功效差異。鑒于年代久遠(yuǎn)、古籍失傳或古籍中也未明確記載等因素，有些問題也無從考證，故筆者認(rèn)為還需結(jié)合藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)來深入研究鹽車前子和酒車前子之間是否有差異，張丹等[12]在對車前子不同炮制品的止瀉作用研究中，發(fā)現(xiàn)酒品的止瀉作用與鹽品相當(dāng)，但還需要進(jìn)一步對炮制后車前子的成分及藥效作用靶點(diǎn)和機(jī)制進(jìn)行深入研究。在經(jīng)典名方的開發(fā)研究中，本研究為不再使用的炮制品規(guī)格的炮制工藝研究及不同炮制品之間的比較提供了參考。