血清ANCA和GAB不同類型抗體檢測在潰瘍性結(jié)腸炎中的臨床應(yīng)用

王美娥，胡朝軍，李萍，鄧垂文，吳子燕，曾小峰，張奉春，李永哲，張蜀瀾

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院a.風(fēng)濕免疫科 風(fēng)濕免疫病學(xué)教育部重點實驗室, b.檢驗科 侵襲性真菌病機制研究與精準(zhǔn)診斷北京市重點實驗室,北京 100730；2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗科，泉州 362000)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是主要病變在結(jié)腸或直腸黏膜下層的慢性特發(fā)性炎癥疾病，屬于炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)的一種，臨床表現(xiàn)以腹痛、腹瀉、黏液膿血便為主。亞洲不同地區(qū)UC發(fā)病率不同，但呈逐年上升趨勢[1]，然而UC的臨床檢出率偏低，因此迫切需要綜合多種方法提高臨床檢出率。UC診斷尚需在排除感染性及非感染性結(jié)腸炎的前提下,通過內(nèi)鏡和病理檢查進(jìn)行判斷，但這些檢測有創(chuàng)、依從性差，不適合于早期篩查[2]。研究表明，腸道免疫系統(tǒng)在UC的發(fā)病機制中發(fā)揮著重要作用，因此血清中自身抗體檢測對UC診斷具有一定的價值[3-4]?？怪行粤＜?xì)胞胞漿抗體(anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,ANCA)和抗小腸杯狀上皮細(xì)胞抗體(antibodies to goblet cells,GAB)目前被認(rèn)為是UC的特異性血清學(xué)抗體，適用于早期篩查。但臨床常規(guī)測定主要以IgG為主，而在腸道黏膜免疫當(dāng)中起到關(guān)鍵作用的是分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,sIgA)。sIgA作為腸黏膜上的主要免疫球蛋白，是腸道黏膜上的第一道防線，但I(xiàn)gA抗體對診斷UC是否比IgG更有價值，與IgG聯(lián)合檢測是否有助于提高UC疾病的診斷水平，尚不明了。本研究通過對血清中ANCA和 GAB不同類型抗體的測定，旨在探討不同類型抗體對UC診斷的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機選取2018年4月至2019年4月在北京協(xié)和醫(yī)院診斷為UC的患者93例，其中男47例，女46例；年齡18～78歲， (42.6±12.6)歲。UC的診斷符合2012年在廣州召開的全國消化病學(xué)術(shù)會議上制定的炎癥性腸病診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。其他腸道疾病組93例，均為就診時主訴腹痛、腹瀉、發(fā)熱，后經(jīng)結(jié)腸鏡、病理組織學(xué)等檢查排除UC的患者，其中男52例，女41例，年齡11～71歲，(34.5±10.4)歲。2組一般資料間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，組間具有可比性。

1.2試劑與儀器 慢性炎癥性腸病抗體檢測試劑盒、熒光顯微鏡EUPOStar Ⅲ Plus(德國歐蒙公司)。

1.3方法

1.3.1采集標(biāo)本 所有患者采集靜脈血2 mL，2 000 r/min離心15 min分離血清，血清-20 ℃凍存。

1.3.2抗體測定 ANCA-IgG、IgA和GAB-IgG、IgA的檢測均采用間接免疫熒光法，采用慢性炎癥性腸病抗體檢測試劑盒。馬賽克生物薄片(三基質(zhì))上覆有乙醇固定的中性粒細(xì)胞、猴小腸杯狀細(xì)胞、猴胰腺腺泡和胰島細(xì)胞，實驗操作按德國歐蒙公司試劑盒說明書進(jìn)行。IgG和IgA檢測原理和實驗步驟均相同，但在制片過程中加入的酶標(biāo)二抗類型不同。核周型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibodies, pANCA)IgG、IgA在熒光顯微鏡下表現(xiàn)均為乙醇固定的人中性粒細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)環(huán)繞細(xì)胞核周圍光滑的帶狀熒光, 胞漿型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cytoplasmic anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,cANCA)IgG、IgA表現(xiàn)均為乙醇固定的人中性粒細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)彌漫性分布粗大的顆粒型熒光染色，并在核葉之間有重染。GAB-IgG、IgA在熒光顯微鏡下的表現(xiàn)均為小腸上皮層杯狀細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)云霧狀、均勻模糊、邊緣不清的熒光染色。

1.3.3結(jié)果判讀 GAB-IgA、IgG的效價>10為陽性，<10為陰性。ANCA的判讀同上。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析 用軟件SPSS 17.0進(jìn)行。陽性率比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1ANCA-IgG、ANCA-IgA、GAB-IgG、GAB-IgA單項檢測的陽性率 UC組ANCA-IgG、 ANCA-IgA、GAB-IgG、GAB-IgA陽性率分別為43.0%、26.8%、38.7%、5.3%，高于其他腸道疾病組的2.1%、0%、5.3%、0%，其中兩組間ANCA-IgA、ANCA-IgG、GAB-IgG陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2分別為44.40、28.88、30.06，P<0.05)，而兩組間GAB-IgA陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.29，P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者血清中ANCA-IgA/IgG、GAB-IgA/IgG結(jié)果

2.2ANCA-IgA/IgG、GAB-IgA/IgG分別聯(lián)合檢測的陽性率 組合中一個指標(biāo)為陽性則判斷為陽性。ANCA-IgA/IgG聯(lián)合檢測UC組的陽性率為49.5%，高于其他腸道疾病組的2.1%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=54.36，P<0.05)。GAB-IgA/IgG聯(lián)合檢測UC組的陽性率為38.7%，高于其他腸道疾病組的5.3%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=30.07，P<0.05)。見表1。

2.3ANCA-IgG/IgA、GAB-IgG/IgA四項聯(lián)合檢測的陽性率 組合中一個為陽性則判斷為陽性。UC組的陽性率為70.9%，高于其他腸道疾病組的7.5%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=78.79,P<0.05)。見表1。

2.4ANCA、GAB中IgA、IgG的敏感性與特異性的比較 ANCA-IgA、GAB-IgA的特異性(100%、100%)高于ANCA-IgG、GAB-IgG(97.8%、94.6%)，但敏感性(26.8%、5.3%)低于ANCA-IgG、GAB-IgG(43.0%、38.7%)。見表2。

表25種檢測方式的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值(%)

檢測項目敏感性特異性陽性預(yù)測值 陰性預(yù)測值A(chǔ)NCA-IgG43.097 95.263.2ANCA-IgA26.810010057.8GAB-IgG38.794.687.860.7GAB-IgA5.310010051.4ANCA-IgA/IgG49.597.895.865.9GAB-IgA/IgG38.794.687.860.7ANCA-IgA/IgG+GAB-IgA/IgG70.992.590.476.1

2.5ANCA-IgA/IgG、GAB-IgA/IgG 4項指標(biāo)聯(lián)合檢測的診斷價值 4項聯(lián)合檢測的敏感性、特異性為70.9%、92.5%，相比于單獨檢測ANCA-IgA/IgG、GAB-IgA/IgG的敏感性和特異性為49.5%、38.7%和97.8%、94.6%，聯(lián)合4項指標(biāo)特異性下降，但敏感性有所升高。見表2。

3 討論

UC是一種以腹痛、腹瀉、黏液血便為主要臨床表現(xiàn)的消化系統(tǒng)疑難疾病，在排除各種其他原因引起的腸道炎癥基礎(chǔ)上，綜合臨床表現(xiàn)、實驗室和放射學(xué)檢查、內(nèi)鏡及病理學(xué)檢查作出診斷。而血清學(xué)標(biāo)志物檢測方便、無創(chuàng)，對疾病比較特異。臨床常規(guī)測定主要以IgG為主，實驗室采用的方法有間接免疫法、ELISA等。在國內(nèi)開展血清學(xué)IgA檢測的實驗室不多。本文旨在探討IgG、IgA的聯(lián)合檢測是否有一定的臨床應(yīng)用價值。

國內(nèi)外研究表明，ANCA、GAB對UC的診斷及鑒別診斷有臨床價值[4]。本研究ANCA-IgG、GAB-IgG在UC中的敏感性分別為43.0%、38.7%，ANCA-IgG的診斷敏感性比國內(nèi)研究[6-8](50.0%～80.0%)稍低，與IgA抗體同時檢測的敏感性、特異性均有所提高。GAB的診斷敏感性、特異性均相對較差，國內(nèi)研究也較少。何淳等[6]研究GAB-IgG陽性率為30.0%，本研究陽性率為38.7%。目前國內(nèi)外研究尚少，不宜進(jìn)行統(tǒng)計分析。本研究通過對2種類型抗體進(jìn)行測定，ANCA-IgA特異性高于ANCA-IgG，GAB-IgA高于GAB-IgG，ANCA-IgA、GAD-IgA在本研究高達(dá)100%、100%，可能對UC的明確診斷更有價值。但I(xiàn)gA的敏感性低于IgG，對UC的檢出率低，不適合單獨檢測IgA，IgA、IgG聯(lián)合檢測可提高檢出率。而ANCA-IgA/IgG、GAB-IgA/IgG 4種抗體聯(lián)合檢測可提高敏感性至70.9%，因此聯(lián)合檢測可以提高UC的檢出率，減少漏檢率、誤診率。但是本研究存在一些不足，比如例數(shù)太少、納入的研究為回顧性病例、缺乏多中心研究、缺乏隨訪。ANCA間接免疫熒光法檢測的是所有抗原，包括未知的抗原。而UC中ANCA的靶抗原尚不明確，可能是今后研討的方向。

綜上所述，針對UC，臨床實驗室開展不同類型免疫球蛋白自身抗體的檢測可能存在一定的臨床應(yīng)用價值。ANCA、GAB-IgA比IgG特異性好，IgG輔之IgA同時檢測有助于提高UC的診斷水平。