探討免疫組化、特染套染技術(shù)在硬化性膽管炎（SC）病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值分析

蔡航航

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院，湖北 武漢 430000）

肝臟病理是肝臟疾病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，而肝臟病理診斷的重要技術(shù)就是肝臟穿刺法。研究發(fā)現(xiàn)，正常成人肝臟中只有膽管上皮細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)CK7表達(dá)，而肝細(xì)胞則無CK7表達(dá)，因此，CK7也被稱為“膽管型細(xì)胞角蛋白”[1]。本文將在硬化性膽管炎（SC）病理診斷中應(yīng)用免疫組化及Masson 染色套染技術(shù)，并分析其應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)抽取2017年7月～2019年6月我院病理科收到并檢驗(yàn)的S12例SC病理標(biāo)本。所有標(biāo)本均使用福爾馬林固定，按照標(biāo)準(zhǔn)檢測流程進(jìn)行操作，步驟包括脫水、石蠟包埋、切片、免疫組化及特染等。

1.2 方法

（1）免疫組化：常規(guī)脫蠟、修復(fù)，室溫孵育，PBS洗滌，加入第一抗體，恒溫孵育1.15 h（37℃）。注意切片應(yīng)保持濕潤，但表面禁止有液體及氣泡，應(yīng)使抗體與組織充分接觸。加入鼠抗人單克隆抗體，使用PBS洗滌，隨后再加入增強(qiáng)劑，孵育15～20 min（37℃）。再次使用PBS洗滌，加入辣根酶，對(duì)羊抗小鼠/兔 IgG 聚合物進(jìn)行標(biāo)記，孵育15～20 min（37℃）。進(jìn)行DAB顯色、脫水、樹膠封固。（2）Masson 三色染色：常規(guī)脫蠟，依次使用Weigert鐵蘇木素、麗春紅酸性品紅染液 、苯胺藍(lán)染液進(jìn)行染色，前兩種染色5～10 min，最后染色3～5 min，進(jìn)行沖洗、脫水、樹膠封固。（3）免疫組化+Masson：首先進(jìn)行免疫組化染色，水洗，使用麗春紅酸性品紅染液 、苯胺藍(lán)染液染色，不使用蘇木素染色，沖洗、脫水、樹膠封固。

1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

免疫組化：CK7陽性：細(xì)胞漿著黃色；Masson三色染色套染：陽性：肌纖維、纖維素、紅細(xì)胞顯示紅色，膠原纖維、細(xì)胞核分別為藍(lán)色及藍(lán)黑色。

2 結(jié) 果

免疫組化染色結(jié)果：所有標(biāo)本均顯示CK7陽性。Masson 三色染色結(jié)果：所有患者均符合陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。免疫組化+Masson染色套染結(jié)果：同時(shí)具備以上特征。

3 討 論

研究發(fā)現(xiàn)[2]，膽管上皮細(xì)胞可見CK7表達(dá)，而肝細(xì)胞中則無CK7表達(dá)，而肝硬化結(jié)節(jié)中，可見CK7表達(dá)。通過染色、標(biāo)記CK7，可了解膽管及管腔、界面小膽管增生、膽管上皮變性及增生等情況，反映匯管區(qū)纖維化程度。Masson 染色是肝臟纖維化程度判斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”?？梢?，除SC以外，以上兩種技術(shù)還被應(yīng)用于其他肝臟疾病診斷并取得了顯著的成果，例如藥物性肝損傷、膽汁性膽管炎等。但與其他肝臟疾病的表現(xiàn)、特征不同，SC患者經(jīng)染色后無匯管區(qū)纖維化，其典型改變?yōu)槟懝苤車w維組織增生，纖維化呈同心圓、洋蔥皮樣。以往在進(jìn)行病理診斷時(shí)，均首先觀察CK7免疫組化染色切片，確定增生膽管及變性上皮，隨后觀察Masson染色切片，確定是否有纖維化，往往需要反復(fù)比對(duì)兩個(gè)切片，才能夠發(fā)現(xiàn)特征性病變，不僅費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，且可能出現(xiàn)漏診。在本次研究中，所有標(biāo)本免疫組化染色均顯示CK7陽性，符合Masson染色陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，免疫組化+Masson染色后顯示，同時(shí)具備以上兩種特征。利用免疫組化、特染套染技術(shù)后，可在同一張切片上反映膽管損傷情況、纖維化情況，不僅定位準(zhǔn)確、質(zhì)量優(yōu)良，同時(shí)色彩鮮明，方便觀察及判斷，顯示出極高的應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，在SC病理診斷中應(yīng)用免疫組化及Masson染色套染技術(shù)可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定位，診斷結(jié)果穩(wěn)定可靠，可反映病變膽管及周圍纖維化程度，為病理醫(yī)師提供豐富的診斷依據(jù)。