巴氏蘑菇雜交新菌株的栽培篩選*

郭仲杰，廖劍華，蔡志欣，盧圓萍，陳美元

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所 特色食用菌繁育與栽培國家地方聯(lián)合工程研究中心，福建 福州 350014）

巴氏蘑菇（Agaricus blazei Murrill，又名姬松茸、巴西蘑菇）原產(chǎn)于巴西東南部圣保羅市 Piedade 山地草原上，美國加利福尼亞州南部和佛羅里達(dá)州海岸草地以及秘魯?shù)葒嘤蟹植糩1]。在巴西圣保羅地區(qū)，巴氏蘑菇被作為健康食品由來已久，在當(dāng)?shù)卣Z言中被稱作“Cogmelo de Deus”，即“上帝的蘑菇”的意思。在第39屆日本癌病學(xué)總會(1980年)和第54屆日本藥理學(xué)總會(1981年)，伊藤均和志村圭四郎等相繼發(fā)表有關(guān)巴氏蘑菇抗腫瘤和生物活性的研究報告，作為代替多孔菌和靈芝的新的藥用和食用菌而受到人們的關(guān)注。

1975年，日本的室內(nèi)高壟栽培法首次獲得成功，經(jīng)努力改良才確立了現(xiàn)在的大規(guī)模人工栽培方法[1]。1976年三重、愛知、歧集三個縣以經(jīng)濟(jì)效益為目標(biāo)推廣普及其栽培技術(shù)，直至1978年才商業(yè)化栽培成功。1988年巴氏蘑菇傳至越南、泰國、印度尼西亞、臺灣等東南亞地區(qū)。1992年，福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所引進(jìn)了巴氏蘑菇菌種[2]，1994年開始先后在福建省仙游、莆田、松溪、順昌、屏南、尤溪、羅源、霞浦等地推廣，仙游縣巴氏蘑菇栽培面積高峰時達(dá)150萬m2，年產(chǎn)鮮品6000 t，產(chǎn)值7000萬元以上。目前巴氏蘑菇栽培已從福建省進(jìn)一步推廣到云南、廣西、四川等省、區(qū)。2003年郭倩等對我國巴氏蘑菇種質(zhì)資源多樣性進(jìn)行了報道，他結(jié)合拮抗試驗方法，對國內(nèi)收集到的19個巴氏蘑菇菌株遺傳多樣性進(jìn)行了初步研究，認(rèn)為這19個巴氏蘑菇菌株主要來源于2個菌株的組織分離物[3]。國內(nèi)栽培的品種主要是引自日本馴化的品種“巖出101”，近年來福建省農(nóng)科院土肥所通過孢子的物理誘變及化學(xué)誘變技術(shù)，選育出誘變新菌株，產(chǎn)量得到提高[4，5]。

巴氏蘑菇商業(yè)栽培已有40年的歷史，新品種的選育主要是通過誘變獲得新菌株，尚未開展雜交育種的研究。為了加快品種的選育，獲得出菇整齊、高產(chǎn)高、質(zhì)量優(yōu)、適合工廠化栽培的新品種，福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所率先采用單孢分離技術(shù)，分離不育菌株進(jìn)行雜交育種研究，填補(bǔ)巴氏蘑菇雜交育種的空白，為菌種的更新?lián)Q代奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.2 方法

1.2.1 初篩

所獲的雜交菌株以塑料淺箱進(jìn)行栽培，每個塑料淺箱投二次發(fā)酵好的糞草培養(yǎng)料17 kg，面積為0.17 m2，每個菌株3重復(fù)，在床架上按隨機(jī)區(qū)組排列。

1.2.2 復(fù)篩

以床架式栽培進(jìn)行出菇試驗，每區(qū)試驗面積2 m2，每平方米投二次發(fā)酵好的糞草培養(yǎng)料100 kg，每菌株3重復(fù)。

1.2.3 中型生產(chǎn)栽培對比

于2019年9～11月在寧德市蕉城區(qū)新秀食用菌合作社進(jìn)行生產(chǎn)性栽培對比試驗，采用隧道進(jìn)行一次發(fā)酵，菇房內(nèi)二次發(fā)酵方式進(jìn)行堆料制備，中試栽培面積為每個菌株30 m2，設(shè)置在同一座菇房，3個重復(fù)，每平方米投二次發(fā)酵培養(yǎng)料100 kg，每個菌株的培養(yǎng)料投料量相同，播種、覆土?xí)r間同步進(jìn)行，水份及通風(fēng)管理按常規(guī)方式。

1.3 測定指標(biāo)

測定不同雜交菌株在培養(yǎng)料中菌絲生長速度、菌絲爬土速度、覆土到采菇時間以及產(chǎn)質(zhì)量等農(nóng)藝現(xiàn)狀，記錄各菌株3個重復(fù)的單位面積產(chǎn)量和子實體的單朵重量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2019 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差，再利用SPSS20.0對總產(chǎn)量進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 初篩中不同雜交菌株的菌絲生長比較

163株雜交菌株在培養(yǎng)料中走菌的速度存在明顯差異，其中有9株雜交新菌株的菌絲生長濃密粗壯潔白，菌絲生長速度比對照親本沒有差別，但從覆土到出菇也比對照快1～3 d。其中J17056出菇比對照菌株“姬A”快3 d，J17002和J17069比對照菌株“姬A”快2 d，其余6株比對照快1 d（表1）。另有24株雜交菌株出菇比對照慢2～3 d，其余的雜交菌株菌絲生長速度及出菇時間與對照沒有差別。

2.2 初篩中不同雜交菌株的產(chǎn)質(zhì)量比較

不同雜交菌株的產(chǎn)質(zhì)量存在明顯的差異，其中5株雜交菌株比對照產(chǎn)量高，差異達(dá)極顯著水平（表2），占雜交新菌株的2.8%，產(chǎn)量與對照菌株沒有顯著差異的有7株，占雜交新菌株的4%，其余雜交菌株比對照產(chǎn)量低，占雜交新菌株的93.2%。

不同雜交菌株的子實體大小也有明顯的差異，在上述產(chǎn)量較高的5株中，3株棕色雜交新菌株子實體與大菇型親本菌株“姬松茸A”菇型相當(dāng)，單粒重達(dá)27.6～29.4 g。2株白色雜交菌株子實體菇型較小，與小菇型親本“AT11”相當(dāng)。

表1 出菇較快的雜交菌株走菌對比 （單位：d）

表2 不同雜交菌株的產(chǎn)質(zhì)量對比

2.3 雜交菌株菌蓋顏色分析

姬松茸不育菌株交配獲得新菌株出菇結(jié)果表明，菌蓋表面顏色主要有2種類型，除了與親本具有相同的棕色菌蓋特征外，還有一部分菌株表現(xiàn)為純白色菌蓋（見圖1、圖2），雜交菌株中的白色菌株占比為17.3%。

2.4 復(fù)篩中不同雜交菌株的菌絲生長比較

根據(jù)初篩的結(jié)果，上述5株產(chǎn)量較高的雜交菌株進(jìn)行復(fù)篩栽培對比試驗，5株雜交菌株在培養(yǎng)料中走菌的速度與對照沒有明顯的差別(表3)，菌絲均生長濃密、粗壯、潔白。菌絲爬土的速度與對照親本也基本相當(dāng)，在土層中菌絲生長粗壯有力，沒有明顯的差異。其中白色菌株J17056從覆土到出菇的時間比對照快2 d，其他菌株與對照親本基本相同。

表3 不同雜交菌株的走菌對比 （單位：d）

表4 不同菌株的產(chǎn)質(zhì)量對比

表5 不同菌株生長發(fā)育情況 （單位：d）

2.5 復(fù)篩中不同雜交菌株的產(chǎn)質(zhì)量比較

優(yōu)選的5株雜交菌株的在產(chǎn)質(zhì)量存在一定的差異（表4），其中J180223號棕色菌株出菇整齊度高，轉(zhuǎn)潮快，產(chǎn)量最高，比對照“姬松茸A”產(chǎn)量平均增產(chǎn)22.4%。J17056白色菌株產(chǎn)量次之，平均比對照“姬松茸A”增長13.8%，兩株雜交菌株與對照菌株差異均達(dá)到極顯著水平。其他菌株產(chǎn)量與對照相當(dāng)，沒有達(dá)到顯著差異水平。

不同雜交菌株的子實體單粒重也有一定的差異，其中J17002菇型較大，單菇重量比對照提高8%，J17056白色菌株比對照菇型小，單粒重比對照輕，其余3菌株與對照沒有顯著的差別。

2.6 生產(chǎn)性栽培試驗中菌絲生長速度的比較

根據(jù)復(fù)篩的結(jié)果，優(yōu)選出雜交棕色菌株J17056和白色菌株J180223進(jìn)行生產(chǎn)性栽培對比試驗，結(jié)果表明(表5)，在培養(yǎng)料菌絲走菌階段，兩株雜交菌株的菌絲生長速度與親本對照菌株沒有差別，菌絲爬土能力與對照相當(dāng)，其中J17056從覆土到采收的時間比對照快2 d，菌株J180223從覆土到采收時間與對照沒有顯著差異。

2.7 生產(chǎn)性栽培試驗中產(chǎn)質(zhì)量的比較

由表6可見，從2019年9月10日開始采收到2019年11月5日采收結(jié)束，共采收4潮。棕色雜交菌株J180223鮮菇總產(chǎn)量1248 kg，平均單產(chǎn)13.87 kg/m2，比親本菌株“姬A”增產(chǎn)22.5%，單粒重與親本“姬A”相當(dāng)。白色菌株J17056鮮菇總產(chǎn)量1189 kg，平均單產(chǎn)13.21 kg/m2，比親本菌株“姬A”增產(chǎn)16.7%，但菇型較小，單粒重比親本“姬A”輕。

3 討論

巴氏蘑菇新菌株的選育主要通過輻射誘變獲得，目前沒有雜交菌株在生產(chǎn)上應(yīng)用。本研究發(fā)現(xiàn)，巴氏蘑菇通過單孢分離可以獲得的沒有鎖狀聯(lián)合的不育菌株，不育菌株間的配對雜交，可以獲得正常生長具有鎖狀聯(lián)合的雜交新菌株，新菌株在走菌速度、爬土能力及出菇的產(chǎn)質(zhì)量與其親本間存在有一定的差異，部分菌株表現(xiàn)出優(yōu)良的農(nóng)藝性狀，具有菌絲生長快，爬土能力強(qiáng)，產(chǎn)量較高，子實體結(jié)實，菇型較大等特性，因此巴氏蘑菇通過不育菌株的配對雜交可以快速改良品種的特性，為篩選獲得適合工廠化栽培的優(yōu)良菌株提供新的育種新途徑。

姬松茸野生分離馴化獲得的栽培菌株為棕色，胡潤芳[6]在栽培菇床上發(fā)現(xiàn)一朵白色子實體，經(jīng)組織分離獲得白色突變菌株。劉朋虎[4，5]等通過對棕色菌株進(jìn)行輻射誘變，獲得白色的突變菌株，上述研究結(jié)果表明，白色菌株是棕色菌株突變而來。本研究發(fā)現(xiàn)，通過不同棕色菌株的雜交試驗，獲得雜交新菌株中會出現(xiàn)菌蓋顏色為白色性狀的菌株，說明姬松茸菌蓋白色性狀在傳統(tǒng)的棕色菌株中已經(jīng)存在，菌蓋的白色性狀相對于棕色性狀是隱形基因，因此巴氏蘑菇菌蓋白色性狀并不是由棕色性狀突變形成的，菌蓋顏色的遺傳規(guī)律有待進(jìn)一步研究。