金錢通淋口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

吳燕紅，許妍，蔡靖波，丁銀平，鄔秋萍

江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，南昌 330029

金錢通淋口服液是江西省藥物研究所與江西鹿迪制藥有限公司共同研制生產(chǎn)的中藥三類新藥，處方由金錢草、海金沙、忍冬藤、白茅根、石韋五味藥組成，功能為清熱祛濕，利水通淋。用于下焦?jié)駸崴铝茏C，癥見尿頻尿急，灼熱刺痛，腰痛拒按，尿色黃赤；急性膀胱炎、急性腎盂腎炎及慢性腎盂腎炎急性發(fā)作見上述證候者。近年來有關(guān)金錢通淋口服液的藥學(xué)研究報(bào)道有：工藝方面主要是膜分離技術(shù)在金錢通淋口服液中的應(yīng)用以及正交試驗(yàn)對(duì)金錢通淋口服液進(jìn)行工藝優(yōu)選［1-3］；標(biāo)準(zhǔn)方面的研究報(bào)道主要是對(duì)其中綠原酸的含量進(jìn)行測(cè)定［4-5］；目前尚無對(duì)金錢通淋口服液進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)提高方面的報(bào)道。金錢通淋口服液法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)項(xiàng)目主要有金錢草和忍冬藤的薄層鑒別以及總黃酮的含量。故本研究擬在對(duì)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行方法驗(yàn)證的基礎(chǔ)上對(duì)其現(xiàn)行質(zhì)控方法進(jìn)行全面提升以更科學(xué)地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

LC-20AD 高效液相色譜儀（日本Shimadzu 公司）；TLC Visualizer 薄層成像系統(tǒng)（瑞士 Camag 公司）；色譜柱：Agela Venusil MP C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；BT25S 型十萬分之一電子天平（賽多利斯）；CP225D 型萬分之一電子天平（賽多利斯）。

金錢草對(duì)照藥材（批號(hào)：121187-201403）、忍冬藤對(duì)照藥材（批號(hào)：121069-201004）、馬錢苷對(duì)照品（批號(hào)：121187-201403，含量：98.3%）均購自中國食品藥品檢定研究院；金錢通淋口服液由江西誠志永豐藥業(yè)有限責(zé)任公司（批號(hào)分別為：160501-1、160502-1、160503-1）和江西青峰藥業(yè)有限公司（批號(hào)分別為：20160923、20160924、20160925）提供。

硅膠GF254薄層板（10 cm×20 cm,青島海洋化工有限公司）。試劑：乙腈為色譜純，其他均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC 鑒別

2.1.1 金錢草TLC 鑒別 取本品10 mL，用乙酸乙酯振搖提取3 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)右掖? mL 使溶解,作為供試品溶液。另取金錢草對(duì)照藥材2 g，加水100 mL，煎煮1 h，放冷，濾過，濾液濃縮至約20 mL，加乙醇30 mL，攪勻，靜置，濾過，濾液蒸至無醇味，加水至約10 mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。按處方配比，取缺金錢草的其他藥味，按照制法制成陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備缺金錢草的陰性對(duì)照溶液。吸取上述三種溶液各10 μL，照薄層色譜法（中國藥典2015 年版四部通則0502）試驗(yàn)，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.1.2 忍冬藤TLC 鑒別 取本品20 mL，用水飽和的正丁醇振搖提取3 次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2 次，每次20 mL，棄去洗滌液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL 使溶解，作為供試品溶液。另取忍冬藤對(duì)照藥材2 g，加水80 mL，煎煮30 min，放冷，濾過，濾液同法制成對(duì)照藥材溶液。按處方配比，取缺金錢草的其他藥味，按照制法制成陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備缺忍冬藤的陰性對(duì)照溶液。吸取上述三種溶液各5～10 μL 照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部通則0502）試驗(yàn)，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254 薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10 ℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。

2.2 忍冬藤的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 采用Agela Venusil MP C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱（200 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（8∶92）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長分別為236 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取馬錢苷對(duì)照品11.21 mg，置50mL 量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品母液；再精密量取馬錢苷對(duì)照母液5 mL 至25 mL 量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 樣品溶液的制備 精密量取本品2 mL，置25 mL 量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 專屬性實(shí)驗(yàn) 分別吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液以及陰性對(duì)照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，比較供試品溶液、對(duì)照品溶液及去忍冬藤的陰性對(duì)照溶液色譜圖。結(jié)果表明供試品中馬錢苷色譜峰與雜質(zhì)峰有較好的色譜分離，陰性對(duì)照無干擾。

2.2.5 線性關(guān)系的考察 精密量取“2.2.2”項(xiàng)下馬錢苷對(duì)照品1、2、5、10、20 μL、對(duì)照品母液5、10、20 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以馬錢苷對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=1 579 956.425 1X-2 195.285 4，r=1.000 0，馬錢苷在0.044 08～4.407 7 μg 之間呈良好的線性。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取馬錢苷對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6 次，結(jié)果馬錢苷峰面積RSD為0.3%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品（批號(hào):160503-1）6 份，照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備樣品測(cè)定，結(jié)果樣品中馬錢苷的平均含量為6.453 7 mg/g，RSD 為1.5%。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液（批號(hào):160503-1）10 μL，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣一次，結(jié)果表明樣品溶液中的馬錢苷在24 h 內(nèi)峰面積無明顯變化，RSD 為0.6%。

2.2.9 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收試驗(yàn)，精密量取已知含量的本品（批號(hào)：160503-1，含馬錢苷0.562 3 mg/mL）1mL，共六份，置25 mL 量瓶中，精密加入馬錢苷對(duì)照品溶液（0.275 24 mg/mL）2 mL，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果回收率良好，適合本品的含量測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.10 樣品測(cè)定 取本品6 批，照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，照“2.2.1”項(xiàng)下測(cè)定，結(jié)果誠志永豐藥業(yè)三批樣品的含量分別為0.574 6、0.574 6、0.562 3 mg/mL，青峰藥業(yè)三批樣品含量分別為0.402 4、0.404 2、0.399 2 mg/mL。

3 討論

3.1 金錢草和忍冬藤的薄層色譜鑒別

在對(duì)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行方法驗(yàn)證中發(fā)現(xiàn)金錢草和忍冬藤的薄層鑒別陰性均有干擾，無法避免假陽性結(jié)果，故對(duì)鑒別進(jìn)行了修訂。修訂后的方法專屬性強(qiáng)，可很好地對(duì)金錢草和忍冬藤的投料質(zhì)量進(jìn)行控制。

3.2 含量測(cè)定樣品制備方法的考察

試驗(yàn)考察了超聲處理30 min、超聲處理1 h、直接稀釋三種提取方法對(duì)馬錢苷含量的影響，結(jié)果顯示三種提取方法差異不大，因直接稀釋操作簡(jiǎn)單，故確定本品提取方法為直接稀釋。試驗(yàn)還考察了甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇4 種提取溶劑對(duì)含量的影響，結(jié)果以50%甲醇為提取溶劑效果最佳。

3.3 關(guān)于本品馬錢苷含量的限度

根據(jù)本品6 批樣品的測(cè)定結(jié)果，并參考《中國藥典》2015 年版一部忍冬藤飲片限度［即含馬錢苷（C17H26O10）不得少于0.10%］，因制劑中忍冬藤經(jīng)水煎煮提取工藝，故制劑中轉(zhuǎn)移率按50%折算，擬定限度為“本品每1 mL 含忍冬藤以馬錢苷（C17H26O10）計(jì)，不得少于0.25 mg”。

本研究對(duì)金錢通淋口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了全面提高，建立的薄層鑒別和含量測(cè)定方法專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，能夠很好地對(duì)金錢通淋口服液的質(zhì)量進(jìn)行控制。