HPLC法測(cè)定抱莖苦荬菜中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量

郝羚竹，翟宏宇，閆茹月

（1.吉林省藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117）

0 引言

抱莖苦荬菜，又名苦碟子、滿天星等，是一種干燥而飽滿的抱莖苦荬菜屬植物[Ixeris sonchifolia（Bge.）Hance]，主要分布于中國(guó)內(nèi)蒙古、東北地區(qū)等[1]。這個(gè)藥材是菊科植物抱莖苦荬菜經(jīng)采收、摘選后干燥的地上部分。于大約夏季六月至七月期間，花開(kāi)時(shí)進(jìn)行采收，先除去根部，再除去其雜質(zhì)，最后曬干而得[2]。

它是抱莖苦荬菜屬的多種可防病、治病的植物之一，值得注意的是，抱莖苦荬菜整棵植物都可以入藥使用。其藥效包括清熱、解毒、涼血、促進(jìn)血液循環(huán)、緩解組織膿液所導(dǎo)致疼痛的作用[3]。它可用于治療頭痛、牙痛、胸痛、胃腹部疼痛、手術(shù)后中小疼痛，治療闌尾炎、痢疾、腸炎、嘔吐血液等[4]。相關(guān)學(xué)者曾進(jìn)行研究，結(jié)果表明，抱莖苦荬菜還具有防止糖尿病等功效[5-6]。因?yàn)樗梢粤己玫乇Ｗo(hù)心肌細(xì)胞，并使微動(dòng)脈中的血液和微靜脈中的血液二者之間的循環(huán)有效改善，促進(jìn)血液中的各種物質(zhì)和組織之間交換的特性，所以它常用于治療冠狀動(dòng)脈血管發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化病變而導(dǎo)致的各種癥狀的心臟病[7-9]。柳曉琳等人[10]的研究表明，抱莖苦荬菜還具有抗癌功效。

本文采用高效液相色譜法測(cè)定抱莖苦荬菜中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量并對(duì)其方法學(xué)進(jìn)行考察（圖1～4）。該方法分離效果好，簡(jiǎn)便、快速，可作為抱莖苦荬菜的質(zhì)量控制指標(biāo)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200 Series高效液相色譜儀；BS 124S型電子天平（德國(guó)Sartorius）；KQ-700DV超聲波清洗器。

1.2 試藥

圖1 供試品

圖2 對(duì)照藥材

圖3 對(duì)照品

圖4 陰性

木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111968-201602，純度97.7%)；甲醇、乙腈、磷酸為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。樣品由華夏藥業(yè)提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Apollo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（18：82）；流速：0.8 mL·min-1，柱溫：35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：348 nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含32 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取抱莖苦荬菜藥材粉末約0.8 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)重，加熱回流提取1 h，冷卻至室溫，再次稱(chēng)重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3 方法學(xué)考察

3.1 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下木犀草素-7-Oβ-D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品溶液1、3、5、8、10、12、15 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為Y=2687.4X+14.451（=0.9998）。結(jié)果表明，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在0.04318～0.6477 μg，呈良好的線性關(guān)系。

3.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一批抱莖苦荬菜供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積值，其RSD為1.58%，表明儀器具良好的精密性。

3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一批抱莖苦荬菜供試品溶液，分別在0、1、3、12、22、32 h進(jìn)樣測(cè)定峰面積，RSD為1.29%，表明木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在32 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.4 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取同一批抱莖苦荬菜藥材6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析測(cè)定，計(jì)算樣品中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量，其結(jié)果RSD為1.44%（n=6），表明該方法的重現(xiàn)性良好。

3.5 回收率試驗(yàn)

分別稱(chēng)取已知含量的抱莖苦荬菜藥材粉末（批號(hào)：1707006）6份，每份0.4 g，精密稱(chēng)定，分別精密加入木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品溶液（濃度0.01608 mg/mL）50 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果其平均回收率為98.92%，RSD ＝0.51%（n=6）。

3.6 樣品含量測(cè)定

取10批抱莖苦荬菜藥材，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果顯示，10批抱莖苦荬菜藥材中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量分別 為0.306%、0.214%、0.228%、0.321%、0.289%、0.247%、0.198%、0.277%、0.180%、0.256%。

4 討論

4.1 色譜柱的選擇

本試驗(yàn)考察了Apollo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Luna C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）三種色譜柱，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷均可達(dá)到基線分離，以Apollo C18色譜柱柱效最高。

4.2 柱溫的選擇

本試驗(yàn)考察了30 ℃、35 ℃、40 ℃三種條件下的柱溫，以35 ℃時(shí)測(cè)定木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的分離效果為最好。

4.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷對(duì)照品溶液于200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在210 nm、255 nm、348 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，在348 nm波長(zhǎng)下，供試品色譜中雜質(zhì)峰少。因此選定檢測(cè)波長(zhǎng)為348 nm。