祛風(fēng)止痛貼膏薄層鑒別方法的建立

李向欣，王法宇，高梓漠，何 蕊，王 琦，都 帥，李慶杰*

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長(zhǎng)春 130021；2.北京醫(yī)藥集團(tuán)職工大學(xué)中藥系，北京 100053；3.南昌大學(xué)瑪麗女王學(xué)院，南昌 330000；4.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，長(zhǎng)春 130118）

祛風(fēng)止痛貼膏為長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院的院內(nèi)制劑，通過與臨床經(jīng)驗(yàn)相結(jié)合，用以治療體質(zhì)虛弱、肝腎虧虛、腎虛腰痛或者足膝痿弱所致的腰椎間盤突出癥。但由于長(zhǎng)期以來，缺少對(duì)組方藥的定性鑒別，不能有效地對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制，使每批成品的質(zhì)量亦不能得到有效保證[1-3]。當(dāng)歸、赤芍、馬錢子和麻黃作為祛風(fēng)止痛貼膏中的有效成分，與其制劑的療效密切相關(guān)[4-8]。因此，為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，我們建立了4 種藥材的薄層色譜鑒別方法，更好的對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制，保證制劑的質(zhì)量控制和臨床療效。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 SK8200HP 超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司），XMTD-8222 恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），BT125D 型十萬分之一電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），CAMAG 薄層掃描色譜儀（瑞士 CAMAG 公司）。

1.2 試劑 高效預(yù)制薄層板（青島海洋化工廠）。藁本內(nèi)酯對(duì)照品（111737-201608）、芍藥苷對(duì)照品（110736-201741）、士的寧對(duì)照品（110705-201307）、馬錢子堿對(duì)照品（110705-201306）、鹽酸麻黃堿對(duì)照品（120927-201514）、當(dāng)歸對(duì)照藥材（120927-201617）、赤芍對(duì)照藥材（121092-201003）、馬錢子對(duì)照藥材（121164-200603）、麻黃對(duì)照藥材（121604-201502），均購(gòu)于中國(guó)藥檢所。祛風(fēng)止痛貼膏由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)研究中心提供。其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 當(dāng)歸的鑒別 取批號(hào)為20180310 供試品15.0 g，加入150 mL H2O，并將其一起放入體積為250 mL 的圓底燒瓶中。將燒瓶上端連到揮發(fā)油收集裝置，并從揮發(fā)油收集裝置上端倒入蒸餾水，直到水充滿揮發(fā)油收集裝置，并溢流到下面連接的圓底燒瓶中為止，再向揮發(fā)油收集裝置中加入CH3CH2OOCCH32 mL，并在揮發(fā)油收集裝置上端連接冷凝管，采用電熱套加熱至回流，保持回流狀態(tài)2 h，取CH3CH2OOCCH3層，作為供試品。取藁本內(nèi)酯對(duì)照品，用CH3OH 作為溶劑配制成1 mg/mL 的對(duì)照品溶液。再取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.5 g，用CH3CH2OCH2CH3作為溶劑，采用超聲波提取機(jī)超聲10 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)覥H3CH2OOCCH31 mg/mL 制成對(duì)照藥材溶液。按照本制劑的處方及比例稱取除當(dāng)歸以外的其他藥材，并按照本制劑的加工方法制備，得到當(dāng)歸陰性樣品，按照供試品溶液的處理方法操作得到當(dāng)歸陰性樣品溶液。取以上4 種溶液各5 μL，依次先后點(diǎn)在硅膠G板上，用正己烷（CH3CH2CH2CH2CH2CH3）醋酸乙酯（CH3CH2OOCCH3）（9:1）作為展開溶劑，上行展開，取出以后晾干，等待觀察[9-11]。層析結(jié)果：通過在365 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)供試品、對(duì)照品、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置有相同斑點(diǎn)，陰性樣品對(duì)應(yīng)位置不存在干擾，并且特征斑點(diǎn)清晰，具有良好的重現(xiàn)性，見圖1。

圖1 當(dāng)歸薄層鑒別

2.2 赤芍的薄層鑒別 取鑒別 1）項(xiàng)下水液，加入水飽和正丁醇CH3（CH2）3OH 溶液，均勻振搖提取3 次，每次使用水飽和正丁醇30 mL，合并CH3（CH2）3OH溶液，蒸干后殘?jiān)覥H3OH 1 mL 溶解，得到供試品溶液。另取赤芍對(duì)照藥材0.5 g，加CH3OH 10 mL，采用超聲波提取機(jī)超聲5 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)覥H3OH 1 mL，得到對(duì)照藥材溶液。取芍藥苷對(duì)照品加CH3OH 制成1 mg/mL 溶液，作為對(duì)照品溶液。按照本制劑的處方及比例稱取除赤芍以外的其他藥材，并按照本制劑的加工方法制備，得到赤芍陰性樣品，按照供試品溶液的處理方法操作得到赤芍陰性樣品溶液。吸取上述4 種溶液各5 μL，依次先后點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以（CHCL3）三氯甲烷-（CH3OH）甲醇-（H2O）水（13:7:2）的下層溶液為展開劑，上行展開，取出后晾干并噴以5%香草醛硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰[12-14]。層析結(jié)果：通過觀察發(fā)現(xiàn)，供試品、對(duì)照品、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置有相同斑點(diǎn)，陰性樣品對(duì)應(yīng)位置不存在干擾，并且特征斑點(diǎn)清晰，具有良好的重現(xiàn)性，見圖2。

圖2 赤芍薄層鑒別

2.3 馬錢子的薄層鑒別 取批號(hào)為20180310 供試品20 g，加入H2O 稀釋至30 mL，加適量NH3·H2O 對(duì)照比色卡調(diào)PH 至10，加入CHCl3，每次20 mL，分3 次振搖提取，合并上層清液，蒸干。殘?jiān)? mL CHCL3溶解得到供試品溶液。再取馬錢子對(duì)照藥材0.5 g，加入5 mL（CHCL3）三氯甲烷-（CH3CH2O）乙醇（10:1）的混合溶液與0.5 mL NH3·H2O 試液，加上塞子密閉，采用超聲波清洗機(jī)超聲處理20 min，超聲后濾紙過濾，取過濾后的溶液作為對(duì)照藥材溶液。另取士的寧對(duì)照品、馬錢子堿對(duì)照品，加CHCL3制成2 mg/mL 的溶液，得到對(duì)照品溶液。按制劑的處方比例稱取馬錢子以外的其他藥材并按照本制劑的加工方法制備，得到馬錢子陰性樣品。按供試品溶液制備方法操作得制馬錢子陰性樣品溶液。吸取上述4 種溶液各10 μL，依次先后點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以（C7H8）甲苯-（CH3COH3）丙酮-（CH3CH2O）乙醇-（NH3·H2O）濃氨試液（4:5:0.6:0.4）為展開劑，上行展開，取出后晾干，噴以改良鉍鉀試液[15-16]。層析結(jié)果：通過觀察發(fā)現(xiàn)，供試品色譜中，在與對(duì)照品及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品色譜對(duì)應(yīng)位置不存在干擾，并且斑點(diǎn)分離清晰，具有良好重現(xiàn)性，見圖3。

圖3 制馬錢子薄層鑒別

2.4 麻黃的薄層鑒別 取批號(hào)為20180310供試品45 g，加硅藻土15 g，研磨均勻，加CH3OH 120 mL，共同放置于250 mL 的錐形瓶?jī)?nèi)，采用超聲波提取機(jī)超聲20 min，濾過后濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL 使溶解，加適量HCL 對(duì)照比色卡調(diào)pH 至2～3，用C4H10O提取3 次，每次30 mL，棄去上層C4H10O 溶液，加入適量NH3·H2O 對(duì)照比色卡調(diào)PH 至10～11，再用C4H10O 分3 次提取，每次30 mL，合并上層C4H10O 液，蒸干，殘?jiān)覥H3OH 0.5 mL 溶解，作為供試品溶液。再取麻黃對(duì)照藥材1.0 g，同上法制成其對(duì)照藥材溶液。另取鹽酸麻黃堿對(duì)照品，用CH3OH 作為溶劑制成1 mg/mL 的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照本制劑的處方及比例稱取除麻黃以外的其他藥材，并按照本制劑的加工方法制備，得到當(dāng)歸陰性樣品，按照供試品溶液的處理方法操作得到麻黃陰性樣品溶液。吸取上述4 種溶液各5 μL，依次先后點(diǎn)于硅膠G 薄層板上，以（CHCL3）三氯甲烷-（CH3OH）甲醇-（NH3·H2O）濃氨試液（20:5:0.5）為展開劑，上行展開，取出后晾干，噴以茚三酮試液，在105 ℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰[17-19]。層析結(jié)果，通過觀察發(fā)現(xiàn)，供試品、對(duì)照品、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置有相同斑點(diǎn)，陰性樣品對(duì)應(yīng)位置不存在干擾，并且特征斑點(diǎn)清晰，具有良好的重現(xiàn)性，見圖4。

圖4 麻黃薄層鑒別

3 討論

中藥復(fù)方制劑是指在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，以中藥飲片為原料，根據(jù)規(guī)定的處方制劑工藝加工成一種供臨床使用的劑型。其質(zhì)量與中藥藥材的質(zhì)量和制劑密切相關(guān)，只有保證中藥材的質(zhì)量，才能確保批次不同的中藥復(fù)方制劑具有穩(wěn)定的質(zhì)量[20]。薄層鑒別作為中藥制劑鑒別的主要方法之一，因其設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便而被廣泛應(yīng)用，使用薄層鑒別首先就是要考慮方法的適用性，盡量使用毒性較小的試劑進(jìn)行提取和薄層展開，以保證試驗(yàn)的操作性[21]。

祛風(fēng)止痛貼膏是由16 味中藥組成的復(fù)方制劑，組成成分復(fù)雜，干擾多。各味藥的鑒別分別嘗試了多種樣品提取及純化方法，優(yōu)化色譜條件，最后選定了本文中的當(dāng)歸、赤芍、馬錢子和麻黃的定性鑒別方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果中陰性對(duì)照表明其他成分對(duì)本方法無干擾，該方法操作便捷、結(jié)果可靠，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可用于本品質(zhì)量控制。

本文通過薄層鑒別法對(duì)祛風(fēng)止痛貼膏進(jìn)行了定性鑒別，下一步還將從含量測(cè)定方面進(jìn)行研究，為祛風(fēng)止痛貼膏的質(zhì)量提供更全面、更可靠的支持。