CA125，HE4和MMP7聯(lián)合檢測在I型和II型上皮性卵巢癌患者診斷中的價(jià)值

付妮娜，范婧暉，鐘 慧

（1.寶雞市婦幼保健院檢驗(yàn)科，陜西寶雞 721000；2.陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院婦科，陜西咸陽 712000）

卵巢癌是女性群體中第二大高發(fā)癌癥，其死亡率位居?jì)D科惡性腫瘤的首位。據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析，每年我國約有5.2萬人死于卵巢癌，占全球總死亡人數(shù)的42%。卵巢癌因發(fā)病隱匿，缺乏明顯癥狀和有效診斷指標(biāo)等，因此約有70%的病人在就診時(shí)已屬晚期，5年生存率僅為25%～30%[1-2]。卵巢癌病人預(yù)后差、易復(fù)發(fā)、生存年限低，因此研究卵巢癌有效的臨床診斷指標(biāo)對于改善患者的生存質(zhì)量具有重要意義[3-5]。

糖類抗原125(CA125)是目前國內(nèi)外普遍認(rèn)可和廣泛應(yīng)用的用于卵巢癌臨床診療的標(biāo)志物，但其特異度不高，在非卵巢癌(如子宮內(nèi)膜癌、子宮腺肌瘤、卵巢囊腫等)中也具有一定的陽性率，這樣會(huì)對臨床鑒別診斷造成不小的干擾[6-9]。

人附睪蛋白4(HE4)與CA125相類似，也可用于卵巢癌的診療中且特異度較高[10]?；|(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)是一種與癌的轉(zhuǎn)移、侵襲相關(guān)的蛋白[11]。關(guān)于上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）的臨床研究學(xué)者大多會(huì)集中于單一指標(biāo)的診斷價(jià)值分析，而對于多指標(biāo)聯(lián)合檢測的價(jià)值分析報(bào)道較少。本文擬評估CA125，HE4和MMP7三者單獨(dú)與聯(lián)合使用在上皮性卵巢癌中的診斷價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對象 本研究納入自2016年1月～2017年9月我院收治的243例卵巢癌住院患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：在我院接受治療并證實(shí)為卵巢癌的患者且病理報(bào)告完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：出現(xiàn)顆粒細(xì)胞癌或惡性畸胎瘤以及轉(zhuǎn)移灶的腫瘤患者。對年齡在47～56歲之間的婦女進(jìn)行更年期狀態(tài)檢查，定義為閉經(jīng)一年。其中良性卵巢腫瘤140例(57.6%)，絕經(jīng)前患者32例，平均年齡41.3±4.2歲；絕經(jīng)后患者108例，平均年齡66.3±3.6歲。交界性腫瘤30例(12.3%)，絕經(jīng)前患者17例，平均年齡40.3±3.6歲；絕經(jīng)后患者13例，平均年齡64.8±4.3歲。EOC患者73例(30.0%)，絕經(jīng)前患者14例，平均年齡44.3±3.9歲； 絕經(jīng)后患者59例，平均年齡65.2±4.2歲。根據(jù)研究對象的臨床病理將EOC進(jìn)一步分為I型和II型腫瘤。I型包括低級（G1）漿液性，低級（G1）子宮內(nèi)膜樣，所有透明細(xì)胞、黏液和過渡（brenner）癌。 II型包括高級（G2-G3）漿液性，高級（G2-G3）子宮內(nèi)膜樣，未分化癌和惡性混合性中胚層腫瘤。其中EOC受試者中14例為絕經(jīng)前婦女，I型7例，II型7例，59例為絕經(jīng)后婦女，I型20例，II型39例。本研究經(jīng)由醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者或其親屬均簽署書面知情同意書。

1.2 試劑和儀器 高速離心機(jī)購于廣州吉迪儀器有限公司；酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)試劑盒購自美國Immutopics公司；真空采血管購于廣州兆康生物科技有限公司。

1.3 方法 根據(jù)國際婦產(chǎn)聯(lián)合會(huì)(International Federation of Obstetrics and Gynecology，F(xiàn)IGO)的標(biāo)準(zhǔn)術(shù)后將EOC可分為I～I(xiàn)V期。其中，Ⅰ和Ⅱ期是EOC的早期階段，Ⅲ和Ⅳ期是EOC的晚期階段，Ⅰ和Ⅱ型腫瘤分別又可分為早期和晚期階段（選取組織樣本Ⅰ型和Ⅱ型腫瘤，剔除未分化組織樣本4例），見表1。空腹采集患者靜脈血3 ml立即將其置于真空試管內(nèi)(無抗凝劑)，室溫下靜置30min，待自然凝固狀送至檢驗(yàn)科分析。使用酶聯(lián)免疫法(ELISA)分別檢測CA125，HE4和MMP7的濃度水平。

表1 I型和II型EOC類型分類

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS17.0和Stata 12.1統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。兩組數(shù)據(jù)之間的比較使用t檢驗(yàn)分析。組間或三個(gè)或更多個(gè)組的關(guān)系采用Kruskal-Wallis單因素方差分析。對各指標(biāo)繪制受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)，并計(jì)算曲線下面積(area under curve，AUC)值。針對I型和II型的個(gè)體標(biāo)記及其組合，陽性預(yù)測值(positive predictive value，PPV)和陰性預(yù)測值(negative predictive value，NPV)計(jì)算敏感度和特異度，以P ＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CA125，HE4和MMP7的表達(dá)水平在I，II型EOC中的診斷價(jià)值 I，II型EOC中的CA125均顯著高于良性腫瘤組(P＜0.001)。I，II型EOC中的HE4均顯著高于良性腫瘤組(P＜0.001)。MMP7在良性腫瘤中未發(fā)現(xiàn)，而在I，II型EOC中的陽性表達(dá)率分別為62.3%和70.6%。

血清中CA125，HE4和MMP7臨界值分別設(shè)定為 60.0 U/ml，70.0 pmol/L和67 ng/ml。

相較于I型EOC中單一和多指標(biāo)聯(lián)合的AUC值，II型EOC中多指標(biāo)聯(lián)合(CA125+HE4+MMP7)的AUC檢測值較高，見表2。

表2 CA125，HE4和MMP7的表達(dá)水平診斷I，II型EOC的效能評價(jià)

2.2 CA125，HE4和MMP7在早晚期I，II型EOC中的診斷價(jià)值 早期I，II型EOC 患者CA125的M值顯著低于晚期(P=0.000)。早期I，II型EOC 患者HE4的M值顯著低于晚期(P=0.002)。早期I，II型EOC 患者中MMP7的M值與晚期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.055)。

早期EOC 患者血清中CA125，HE4和MMP7臨界值分別設(shè)定為 68.0 U/ml、93.0 pmol/L和25.5 ng/ml；晚期EOC 患者血清中CA125，HE4和MMP7臨界值分別設(shè)定為 112.0 U/ml、136.0 pmol/L和48.2 ng/ml。

相較于早期I型單一和多指標(biāo)聯(lián)合和II型單一指標(biāo)中的AUC值，II型EOC晚期患者中多指標(biāo)聯(lián)合(CA125+HE4+MMP7)的AUC檢測值較高，見表3。

表3 CA125，HE4和MMP7的表達(dá)水平診斷早晚期I， II型EOC的效能評價(jià)

2.3 CA125，HE4和MMP7在 絕 經(jīng) 前 后I，II型EOC的診斷價(jià)值 見表4。絕經(jīng)前EOC患者血清中CA125，HE4和MMP7臨界值分別設(shè)定為 33.0 U/ml，60.0 pmol/L和55.5 ng/ml；絕 經(jīng) 后EOC患者血清中CA125，HE4和MMP7臨界值分別設(shè)定 為 56.0 U/ml，87.0 pmol/L和48.2 ng/ml。相 較于I，II型EOC患者與良性腫瘤組，多指標(biāo)聯(lián)合(CA125+HE4+MMP7)在絕經(jīng)后EOC患者的AUC檢測值較高。

3 討論

在過去的數(shù)十年間關(guān)于卵巢癌的研究已經(jīng)取得了較大進(jìn)展，但是由于該病相對較隱匿，患者一般發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于晚期階段，且其五年生存率僅為46.2%，因此對于卵巢癌的早期檢測意義重大。CA125是目前國內(nèi)外廣泛應(yīng)用的用于卵巢癌臨床診斷和檢測的腫瘤標(biāo)志物之一，有研究報(bào)道指出當(dāng)卵巢出現(xiàn)異常時(shí)，CA125的濃度水平就開始偏高[12-13]，但是也有研究認(rèn)為血清中CA125升高僅會(huì)出現(xiàn)在40%～50%的早期卵巢癌患者中。HE4的敏感度與CA125相當(dāng)并且特異度更高[14-15]。MMP7是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中分子量最小的成員，其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用，研究認(rèn)為其與癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、侵襲有關(guān)[16]。

表4 CA125，HE4和MMP7的的表達(dá)水平診斷絕經(jīng)前后I, II型EOC的效能評價(jià)

本研究旨在評估生物標(biāo)志物CA125，HE4和MMP7單獨(dú)和聯(lián)合應(yīng)用對I，II型EOC患者的診斷價(jià)值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CA125，HE4和MMP7是II型EOC患者的高度代表性標(biāo)志物。CA125+HE4+MMP7聯(lián)合標(biāo)記物在II型EOC患者中的檢測值較高，尤其在晚期階段。另外，CA125，HE4和MMP7單獨(dú)或CA125+HE4+MMP7聯(lián)合應(yīng)用對I型EOC不具有良好的診斷能力。LU等[17]人以相同的分類方法分出I，II型EOC并測試分析14種血清標(biāo)記物，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CA125具備最大的診斷能力，II型EOC的AUC值為 0.93，I型EOC的AUC值為 0.89。這與本研究中報(bào)道結(jié)果相一致。

本研究基于FIGO的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)將EOC可分為I～I(xiàn)V期，使用ELISA分別檢測CA125，HE4和MMP7的濃度水平。最新的分子生物學(xué)特性將EOC作為一種高度異質(zhì)性疾病，基于形態(tài)學(xué)和分子遺傳學(xué)，提出了一種新型的腫瘤起源和進(jìn)展模型，將EOC分為I，II型腫瘤。I型腫瘤以懶惰的方式表現(xiàn)，有穩(wěn)定的基因組和沒有TP53 (Tumor protein, TP53)突變[18-19]。II型腫瘤有高度的遺傳不穩(wěn)定性，有大多數(shù)TP53突變[20]。

總體而言，分子生物學(xué)對于更好了解EOC的發(fā)病機(jī)制是至關(guān)重要的，其將有利于改善EOC患者的早期診斷和生存。本研究證實(shí)CA125，HE4和MMP7對II型EOC患者具有較好的診斷能力，尤其是晚期II型EOC。