食管鱗狀癌組織E-cadherin和Vimentin的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的關(guān)系

劉鄭生，田海衛(wèi),趙銀利

（寶雞市人民醫(yī)院a.腫瘤內(nèi)科；b.胸外腫瘤科，陜西寶雞 721000）

食管癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其死亡率高居惡性腫瘤的第四位[1-2]。浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤重要的生物學(xué)特性，與基因和分子水平的變化密切相關(guān)[3-4]。因此探究腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移機(jī)制，尋找能有效預(yù)測(cè)食管癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)患者的預(yù)后和臨床治療具有重要意義。上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial to mesenchymal transition, EMT)是腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制之一[5]。E-鈣黏蛋白（E-cadherin）可增強(qiáng)細(xì)胞間的黏連，是上皮細(xì)胞的標(biāo)志物之一[6]；波形蛋白（Vimentin）可促進(jìn)上皮細(xì)胞形態(tài)的改變以增強(qiáng)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力，是間質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物之一[7]。在EMT形成過(guò)程中E-cadherin表達(dá)降低和Vimentin表達(dá)升高是標(biāo)志性的改變[8-9]。

本研究檢測(cè)了126例食管鱗狀癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)患者的E-cadherin和Vimentin表達(dá)水平并分析其與臨床特征之間的關(guān)系。具體報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2016年10月～2018年3月我院收治的126例ESCC患者作為研究對(duì)象，其中男性67例，女性59例。年齡范圍為33～76歲,平均年齡為61.2±13.7歲。腫瘤部位頸及胸上段13例，胸中段61例，胸下段52例。腫瘤直徑＞5cm有68例，腫瘤直徑＜5cm有58例。病理學(xué)分型：I型30例，II型51例，III型45例。TNM分期：I期30例，II期44例，III期31例，IV期21例。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移70例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移56例。組織浸潤(rùn)黏膜下層或淺肌層16例，浸潤(rùn)深肌層或外膜層110例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)臨床表現(xiàn)和輔助檢查結(jié)果證實(shí)為ESCC者，無(wú)家族史者，正常組織距癌灶邊緣＞5cm者。排除標(biāo)準(zhǔn)：復(fù)發(fā)性食管癌者，并發(fā)其它腫瘤者，有放、化療史者，近、長(zhǎng)期服用影響機(jī)體免疫藥物者，臨床資料不完整者，伴有嚴(yán)重心肝腎功能障礙者，伴有全身感染性疾病者，妊娠期或哺乳期女性，長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)不良者。

1.2 試劑和儀器 鼠抗人E-cadherin單克隆抗體(ab1416)和鼠抗人Vimentin單克隆抗體(ab8978)均購(gòu)自Abcam公司。SP免疫組織化學(xué)試劑盒和DAB酶顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋公司。

1.3 方法 采用SP免疫組織化學(xué)試劑盒和DAB酶顯色試劑盒進(jìn)行測(cè)定，具體操作步驟詳見(jiàn)試劑盒說(shuō)明書。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 21.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉ±s)表示，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法檢驗(yàn)，采用t檢驗(yàn)或Mann-Whitney U檢驗(yàn)兩獨(dú)立樣本間的差異。采用pearson相關(guān)性分析分析兩變量間的相關(guān)性。采用雙尾檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 E-cadherin和Vimentin在ESCC患者癌和癌旁組織中的表達(dá) 見(jiàn)圖1。IHC結(jié)果顯示，ESCC患者癌組織中E-cadherin的表達(dá)水平顯著高于癌旁正常黏膜組織（P ＜0.001），癌旁正常黏膜組織中Vimentin的表達(dá)水平顯著高于癌組織(P ＜0.001)。

圖1 ESCC患者癌及癌旁組織中E-cadherin與Vimentin的表達(dá)水平（A.IHC染色；B.吸光度分析）

2.2 E-cadherin與Vimentin的相關(guān)性分析 見(jiàn)圖2。Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，ESCC患者腫瘤組織中E-cadherin和Vimentin水平呈顯著負(fù)相關(guān)（r =-0.574, P ＜0.001），而癌旁正常組織中E-cadherin和Vimentin水平無(wú)顯著相關(guān)性（r = 0.096, P = 0.510）。

2.3 E-cadherin和Vimentin表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見(jiàn)表1。臨床病理特征分析結(jié)果顯示，E-cadherin的表達(dá)降低和Vimentin的表達(dá)升高與ESCC的病理分型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)深度均顯著相關(guān)（P＜0.001），與ESCC患者的性別、年齡、腫瘤直徑及腫瘤部位無(wú)顯著關(guān)聯(lián)（P＞0.05）。

3 討論

食管鱗癌是我國(guó)常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)生發(fā)展具有多因素參與、多基因改變、多步驟演進(jìn)等特征，但其具體調(diào)控機(jī)制尚不明確[10]。因此深入研究食管癌的分子機(jī)制具有非常重要的意義和價(jià)值。侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的主要生物學(xué)特性[11-12]，其是一個(gè)多因素、多功能的復(fù)雜過(guò)程，總體包括癌細(xì)胞從原發(fā)部位脫落、結(jié)合并降解基底膜、侵入血管及淋巴管、在循環(huán)中運(yùn)行和滯留、穿出血管和淋巴管、增殖形成轉(zhuǎn)移灶[13]。本研究檢測(cè)E-cadherin和Vimentin在ESCC中的表達(dá)，分析其與ESCC患者臨床病理特征的關(guān)聯(lián)性。

圖2 ESCC患者癌及癌旁組織中E-cadherin與Vimentin的相關(guān)性分析（A.癌組織; B.癌旁正常組織 ）

表1 E-cadherin和Vimentin表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

E-cadherin是I型鈣黏蛋白家族的重要成員，在所有上皮細(xì)胞中表達(dá)。E-cadherin的表達(dá)缺失或下降與EMT緊密相關(guān)，其對(duì)惡性腫瘤的發(fā)展和分化起著重要的作用。E-cadherin可與連環(huán)蛋白（α, β, γ-catenin）結(jié)合形成E-Cad-Cat復(fù)合體，不僅可介導(dǎo)細(xì)胞黏附，還可參與細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)，對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移起著重要作用。研究結(jié)果表明E-cadherin可促進(jìn)同構(gòu)型細(xì)胞間的黏附，從而使腫瘤細(xì)胞之間保持密切聯(lián)系、難于逃脫原發(fā)部位。因此，E-cadherin表達(dá)量的降低極有可能是促使腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶并最終導(dǎo)致轉(zhuǎn)移的重要原因。本研究中，ESCC患者腫瘤組織中E-cadherin的表達(dá)水平顯著高于癌旁正常黏膜組織（P＜0.001），且E-cadherin的表達(dá)降低與ESCC的病理分型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織浸潤(rùn)深度均顯著相關(guān)（P＜0.001）。

Vimentin是EMT的典型標(biāo)志之一，可廣泛表達(dá)于神經(jīng)元前體細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、胰腺前體細(xì)胞等間質(zhì)細(xì)胞。本研究中，癌旁正常黏膜組織中Vimentin的表達(dá)水平顯著高于癌組織(P＜0.001)，且Vimentin的表達(dá)升高與ESCC的病理分型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織浸潤(rùn)深度均顯著相關(guān)（P＜0.001）。

在EMT過(guò)程中，E-cadherin作為上皮細(xì)胞標(biāo)志物可參與維持細(xì)胞形態(tài)和生物學(xué)行為的過(guò)程，Vimentin作為間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物可發(fā)揮促細(xì)胞遷移、腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的作用?？祻?qiáng)等[14-15]的研究指出，E-cadherin降低和Vimentin增加在肝內(nèi)膽管癌的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，E-cadherin和Vimentin可通過(guò)促進(jìn)EMT增強(qiáng)肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。本研究中結(jié)果顯示ESCC患者腫瘤組織中E-cadherin和Vimentin呈顯著負(fù)相關(guān)，而癌旁正常組織中E-cadherin和Vimentin無(wú)顯著相關(guān)性。

綜上所述，ESCC患者腫瘤組織中E-cadherin的表達(dá)降低和Vimentin的表達(dá)升高與ESCC的病理分型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)深度均顯著相關(guān)（P＜0.001），與ESCC患者的性別、年齡、腫瘤直徑及腫瘤部位無(wú)顯著關(guān)聯(lián)（P＞0.05）。E-cadherin與Vimentin的檢測(cè)會(huì)對(duì)ESCC患者具有潛在的診斷與治療價(jià)值。