色譜數(shù)據(jù)處理對藥品檢測結(jié)果的影響探討

章滿君 呂少風(fēng) 蔣小英

（1.浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠，浙江 新昌

312500；2.浙江昌海制藥有限公司，浙江 紹興312366；3.浙江醫(yī)藥股份有限公司昌海生物分公司，浙

江 紹興 312300）

近年來，色譜法在藥品研發(fā)、質(zhì)量控制以及復(fù)雜成分的分離分析等領(lǐng)域得到較為廣泛的應(yīng)用[1～2]，已成為各國藥典[3]中應(yīng)用范圍最廣泛的檢測技術(shù)之一。色譜分析法雖然在檢測靈敏度、分離度、數(shù)據(jù)采集效率、數(shù)據(jù)自動(dòng)化處理等各個(gè)方面都有發(fā)展，但是在色譜數(shù)據(jù)的處理方面始終未能有統(tǒng)一的技術(shù)規(guī)范，因此各企業(yè)在應(yīng)用實(shí)踐中也各有不同，數(shù)據(jù)處理規(guī)范管理程度良莠不齊。美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)和美國藥典(USP)均強(qiáng)調(diào)了色譜技術(shù)的重要性，并大大提高了其在驗(yàn)證方面的運(yùn)用比重。

1 色譜數(shù)據(jù)處理不規(guī)范的原因分析

綜合分析目前關(guān)于色譜數(shù)據(jù)處理方面的缺陷情況，主要的問題是：沒有建立科學(xué)有效的規(guī)程、沒有固定的積分參數(shù)或手動(dòng)積分方式、選擇性報(bào)告數(shù)據(jù)、操縱數(shù)據(jù)、沒有審計(jì)追蹤、數(shù)據(jù)未經(jīng)授權(quán)的訪問、修改或刪除，即數(shù)據(jù)處理不規(guī)范。原因可從客觀因素和主觀因素兩個(gè)方面來說。

1.1 客觀因素

在法規(guī)方面，各國GMP 都有關(guān)于數(shù)據(jù)可靠性、準(zhǔn)確性、追溯性等原則性要求，但是關(guān)于色譜數(shù)據(jù)處理方式或積分參數(shù)設(shè)置并沒有相關(guān)的行業(yè)指南或者具體的指導(dǎo)原則，只能根據(jù)操作經(jīng)驗(yàn)或者查閱相關(guān)文獻(xiàn)作為參考。

在藥政部門的監(jiān)管方面，早年對色譜數(shù)據(jù)處理方面的關(guān)注程度相對較低，在實(shí)際的GMP檢查中很少涉及，因此企業(yè)在內(nèi)部管理上也大多不嚴(yán)格。近年來由于美國FDA在GMP檢查中將數(shù)據(jù)可靠性方面的檢查作為重點(diǎn)，因此許多企業(yè)在色譜數(shù)據(jù)處理和管理方面暴露出缺陷。

儀器硬件及軟件方面，不同的色譜儀器廠家，不同的儀器型號(hào)，在數(shù)據(jù)采集和數(shù)據(jù)處理上也各不相同。在建立產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和方法時(shí)，不能統(tǒng)一色譜數(shù)據(jù)處理方法。

1.2 主觀因素

企業(yè)重視程度不夠。一些企業(yè)對數(shù)據(jù)規(guī)范處理的重視程度不夠，或者有意利用其中的漏洞為企業(yè)創(chuàng)造利益。

迫于時(shí)間和經(jīng)濟(jì)壓力。由于沒有相應(yīng)的法規(guī)和指導(dǎo)原則，所以大部分積分參數(shù)需要進(jìn)行大量重復(fù)的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行摸索，而這不可避免地提高了企業(yè)的檢測成本，降低了效益。因此一些企業(yè)迫于時(shí)間和經(jīng)濟(jì)壓力，為降低檢測成本而簡化了摸索合適參數(shù)的過程。

缺乏監(jiān)管。由于檢測工作的專業(yè)性強(qiáng)，企業(yè)往往對實(shí)驗(yàn)室的日常工作缺乏監(jiān)管，沒有建立起很好的監(jiān)督檢查機(jī)制，檢測結(jié)果的檢查大多由分析人員執(zhí)行，因此在監(jiān)督有效性上就存在風(fēng)險(xiǎn)。

技術(shù)能力欠缺/培訓(xùn)不充分。有些企業(yè)對GMP/GLP的培訓(xùn)意識(shí)不強(qiáng)，不能從根本上理解GMP/GLP。對于員工培訓(xùn)不到位，敷衍了事。

個(gè)人職業(yè)素質(zhì)欠缺。質(zhì)量意識(shí)是一個(gè)企業(yè)對質(zhì)量工作的認(rèn)識(shí)和了解，包括企業(yè)的管理層到每一個(gè)員工。這對質(zhì)量行為起著極其重要的影響和制約作用，也是企業(yè)生存和發(fā)展的思想基礎(chǔ)。

2 色譜數(shù)據(jù)處理不規(guī)范的影響因素考察

2.1 積分參數(shù)對計(jì)算結(jié)果的影響

色譜工作站的積分過程主要由積分事件表中的斜率靈敏度、峰寬靈敏度、最小峰面積及最小峰高等參數(shù)來控制，其中斜率靈敏度和峰寬靈敏度影響色譜峰起止點(diǎn)的識(shí)別，最小峰面積及最小峰高影響色譜峰是否被分析。文章討論不同積分參數(shù)對拖尾因子、分離度、信噪比及峰面積的影響。

斜率靈敏度應(yīng)能確保靈敏度測試溶液最小峰能夠成功積出，常設(shè)置為工作站中的初始默認(rèn)值，即1.0；峰寬通常設(shè)置為不大于最窄色譜峰的半峰寬（溶劑峰除外），常用初始默認(rèn)值0.04；有關(guān)物質(zhì)、殘留溶劑項(xiàng)下舍棄面積一般根據(jù)報(bào)告限最小峰面積的0.5 倍設(shè)置，含量項(xiàng)下舍棄面積一般根據(jù)對照溶液最小理論峰面積的0.5 倍設(shè)置；舍棄峰高一般設(shè)置為最小舍棄峰面積的0.5倍以下，或設(shè)為0。

2.1.1 不同積分參數(shù)對拖尾因子的影響

拖尾因子是用于評價(jià)峰形對稱性的一個(gè)參數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，斜率靈敏度、峰寬靈敏度及舍棄峰面積在常用參數(shù)設(shè)置原則上下波動(dòng)不大時(shí)，對拖尾因子不會(huì)有影響。但當(dāng)斜率靈敏度過小或者過大時(shí)，均會(huì)使拖尾因子稍減??；而峰寬靈敏度的過大時(shí)會(huì)使拖尾因子稍偏大，舍棄峰面積則對拖尾因子無影響。

2.1.2 不同積分參數(shù)對分離度的影響

分離度又稱分辨率，判斷分離物質(zhì)在色譜柱中的分離情況，通常用R=1.5 作為相鄰兩組分已完全分離的標(biāo)志。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，斜率靈敏度、峰寬靈敏度及舍棄峰面積的設(shè)置對分離度均無影響。

2.1.3 不同積分參數(shù)對信噪比的影響

信噪比，評價(jià)色譜系統(tǒng)檢測微量物質(zhì)的能力。配制低濃度的樣品溶液，改變噪聲選取范圍、位置及積分參數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，斜率靈敏度、峰寬靈敏度及舍棄峰面積的設(shè)置對信噪比的大小均無影響。而噪聲的選取范圍及選取位置卻對目標(biāo)峰的信噪比有很大影響，當(dāng)所選取的時(shí)間段里基線波動(dòng)較大時(shí)，噪聲變大，信噪比變小，人為主觀因素影響較大。

2.1.4 不同積分參數(shù)對峰面積的影響

選擇不同的積分參數(shù)對峰面積有較大影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)斜率靈敏度選取較大值時(shí)，會(huì)導(dǎo)致一些小峰不被積出，使得樣品雜質(zhì)峰減少；而當(dāng)斜率靈敏度選取較小值時(shí)，基線上的一些小波動(dòng)容易被積出，導(dǎo)致樣品雜質(zhì)峰增加，并且使得一些峰型較差的色譜峰峰面積變大。當(dāng)峰寬靈敏度選取較大值時(shí)，會(huì)使雜質(zhì)峰減少，個(gè)別色譜峰的峰面積也會(huì)有較大變化。舍棄峰面積的改動(dòng)對色譜峰面積不會(huì)有影響，只是當(dāng)舍棄峰面積較小時(shí)，一些小峰會(huì)被積出。

2.2 不同校正參數(shù)對定量計(jì)算結(jié)果的影響

化學(xué)工作站中主要有六種定量方法，分別為百分比法、歸一化法、外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)百分比法、內(nèi)標(biāo)百分比法。

外標(biāo)法的計(jì)算需要通過建立校正表，設(shè)置校正參數(shù)，用校準(zhǔn)曲線計(jì)算未知樣品中的化合物含量，但是校正參數(shù)的設(shè)置又包括兩種情況：強(qiáng)制過原點(diǎn)與不過原點(diǎn)，不同校正參數(shù)的設(shè)置對樣品組分含量或有影響。通常情況下，多濃度建立校正表或高低濃度建立校正表，應(yīng)當(dāng)選擇不過原點(diǎn)校正；在單一濃度建校正表時(shí)應(yīng)當(dāng)選擇過原點(diǎn)校正。同時(shí)，校正方法的確定，還需結(jié)合考慮方法驗(yàn)證，及其該產(chǎn)品檢測時(shí)方法中是否有其他特殊規(guī)定。

2.3 手動(dòng)積分對定量計(jì)算結(jié)果的影響

理想條件下，在通過系統(tǒng)適用性試驗(yàn)后，對照品、供試品的色譜應(yīng)一直以相同的方法進(jìn)行積分。但是實(shí)際情況并非如此，尤其是接近定量限、檢測限，有些峰自動(dòng)積不上，需要手動(dòng)積分。手動(dòng)積分雖然會(huì)受主觀因素的影響，在科學(xué)分析色譜結(jié)果時(shí)也是需要的。如當(dāng)出現(xiàn)異常峰，分離度不好的峰時(shí)，手動(dòng)強(qiáng)制分割；當(dāng)進(jìn)行手動(dòng)積分時(shí)，特別是手動(dòng)劃定基線進(jìn)行積分時(shí)，積分結(jié)果容易受到分析員主觀因素的影響。企業(yè)應(yīng)規(guī)定在何種情況下如何進(jìn)行手動(dòng)積分。

3 結(jié)語

鑒于色譜數(shù)據(jù)處理對藥品檢驗(yàn)結(jié)果的重要影響，筆者建議企業(yè)采取以下措施來提高數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和有效性，進(jìn)而有效的規(guī)避數(shù)據(jù)完整性問題的發(fā)生。

建立規(guī)范的操作規(guī)程。良好的文件是質(zhì)量保證系統(tǒng)的基本要素，結(jié)合崗位制定相應(yīng)操作規(guī)范，使檢測工作有據(jù)可依、有典可查，提高工作效率和準(zhǔn)確度。

規(guī)范方法開發(fā)及驗(yàn)證，通過驗(yàn)證獲得準(zhǔn)確的色譜數(shù)據(jù)處理方法，規(guī)范積分參數(shù)設(shè)置，控制隨意手動(dòng)積分，定期對方法進(jìn)行評估與確認(rèn)，以保證分析方法的針對性和準(zhǔn)確性，從源頭上解決數(shù)據(jù)的不規(guī)范處理。

標(biāo)準(zhǔn)化工作流程及定期內(nèi)部審核機(jī)制能夠有效的規(guī)范工作人員的工作程序，減少出錯(cuò)幾率。

加強(qiáng)人員培訓(xùn)、提高技術(shù)能力。掌握色譜工作站的原理，理解不同色譜數(shù)據(jù)處理手段（參數(shù)設(shè)置等）對結(jié)果的影響。將產(chǎn)品的質(zhì)量評價(jià)風(fēng)險(xiǎn)降到最低。

建立良好的企業(yè)文化。在企業(yè)經(jīng)營管理中，良好的企業(yè)文化發(fā)揮的作用不容小覷，它不僅可以在“新產(chǎn)品研發(fā)、產(chǎn)品的升級與維護(hù)、新制度的執(zhí)行與考評”等方面發(fā)揮不可估量的推進(jìn)作用，更能有力的提高企業(yè)人員的執(zhí)行力與責(zé)任心，并進(jìn)一步建立良好的質(zhì)量文化，為藥企創(chuàng)造一筆不可估量的寶貴財(cái)富。