美麗芍藥中酚酸類成分的研究

梁文娟 郗建宇 尹 迪 孫春吉 王洪玲

（1.云南農(nóng)業(yè)大學食品科學技術(shù)學院， 云南 昆明650201； 2.江西中醫(yī)藥大學中藥資源與民族藥研究中心， 江西 南昌330004）

芍藥科世界上僅一屬［1-2］，芍藥屬植物大多可供藥用，其中的常用藥材白芍、赤芍和牡丹皮等收錄于歷代本草和歷版《中國藥典》；對芍藥屬植物的化學成分研究主要集中在芍藥苷及其同系物等單萜苷類物質(zhì)，對其藥理活性的研究主要圍繞中樞神經(jīng)和心血管系統(tǒng)保護、抗炎保肝、抗腫瘤和止痛等作用［3-5］。為豐富對芍藥屬植物化學成分和藥用資源的認識，本研究對采自云南巧家的美麗芍藥的根進行化學成分研究。美麗芍藥Paeonia maireiLevl.為芍藥科芍藥屬多年生草本植物，分布于云南東北部、貴州西部、四川中南部、甘肅和陜西南部，模式標本采自云南巧家；美麗芍藥的根可藥用，具有行瘀活血、止痛之效［6］，在云南當?shù)赜幸欢ǖ挠盟幓A(chǔ)。目前關(guān)于美麗芍藥的化學成分和藥理活性研究較少［7-8］。迄今為止，已知成分主要包括生物堿、萜、甾體、蒽醌類的19個化合物［7-8］。本實驗對美麗芍藥干燥根的70%乙醇部位進行化學成分研究，共分離鑒定出9個酚酸類化合物，其中化合物1～8 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

島津LC-MS-IT-TOF 質(zhì)譜儀（日本島津公司）；Waters AutoSpec Premier P776 離子井飛行時間質(zhì)譜儀、高效液相色譜（美國Waters 公司）；核磁共振儀Brucker DRX-500（德國布魯克公司）；薄層色譜硅膠、柱層析硅膠（200～300目，煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司）；柱層析葡聚糖凝膠LH-20（美國Pharmacia 公司）；Milli-QAdvantageA10 超純水系統(tǒng)（美國Millipore 公司）。分析純甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙酮（天津化學試劑有限公司）；顯色劑為自制H2SO4（10%） 乙醇溶液。

樣品于2016 年9 月采自云南巧家，由中國科學院昆明植物研究所張書東副研究員鑒定為美麗芍藥Paeonia maireiLevl.，標本存放于云南農(nóng)業(yè)大學食品學院（20160926）。

2 提取與分離

美麗芍藥干燥根3.5 kg，經(jīng)粉碎后用70% 乙醇，回流提取3 次，每次1 h，提取液經(jīng)減壓濃縮至小體積，將濃縮液過D101 大孔樹脂，分別用水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇洗脫得水部位（Fr.1：210 g）、30%乙醇部位（Fr.2：72 g）、50%乙醇部位（Fr.3：32 g）、70%乙醇部位（Fr.4：23 g）。Fr.4 經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-丙酮梯度洗脫，得 5個部分 Fr.4-1～ Fr.4-5。Fr.4-2 經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇） 洗脫，再經(jīng)反復硅膠柱層析和HPLC 等方法分離純化得化合物1（5 mg）、2（4 mg）、3（6 mg）、9（5 mg）。Fr.4-3 經(jīng)反復硅膠柱色譜和Sephadex LH-20 凝膠柱層析，得化合物5（4 mg）、7（4 mg）、8（5 mg）。Fr.4-5 通過硅膠柱層析，經(jīng)甲醇-二氯甲烷體系梯度洗脫（10∶90、20∶ 80、30∶ 70、50∶ 50、100∶ 0），再 經(jīng)Sephadex LH-20 多次純化，得化合物4（6 mg）、6（5 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無定型粉末，C9H8O3，ESI-MSm／z：165.2［M＋H］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.59（1H，d，J＝15.9 Hz，H-2），7.44（2H，dd，J＝8.6，1.9 Hz，H-5，9），6.80（2H，dd，J＝8.6，1.9 Hz，H-6，8），6.27（1H，d，J＝15.9 Hz，H-3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（s，C-1），115.6（d，C-2），146.6（d，C-3），127.2（s，C-4），131.1（d，C-5，9），116.8（d，C-6，8），161.2（s，C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］基本一致，故鑒定為反式對羥基肉桂酸。

化合物2：白色無定型粉末，C9H8O2，ESI-MSm／z：149.1［M ＋H］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.67（1H，d，J＝16.0 Hz，H-3），7.59（2H，m，H-5，9），7.39（3H，m，H-6，7，8），6.47（1H，d，J＝ 16.0 Hz，H-2）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（s，C-1），119.4（d，C-2），146.3（d，C-3），135.8（s，C-4），130.0（d，C-5，9），129.2（d，C-6，8），131.4（d，C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻［10］基本一致，故鑒定為反式肉桂酸。

化合物3：白色無定型粉末，C10H10O4，ESI-MSm／z：195.2［M ＋H］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.59（1H，d，J＝15.9 Hz，H-3），7.17（1H，d，J＝2.0 Hz，H-5），7.05（1H，dd，J＝8.2，2.0 Hz，H-9），6.80（1H，d，J＝8.2 Hz，H-8），6.30（1H，d，J＝15.9 Hz，H-2），3.88（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（s，C-1），115.9（d，C-2），146.9（d，C-3），127.8（s，C-4），111.7（d，C-5），150.5（s，C-6），149.4（s，C-7），116.4（d，C-8），124.0（d，C-9），56.4（s，-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］基本一致，故鑒定為阿魏酸。

化合物4：白色無定型粉末，C9H8O4，ESI-MSm／z：203.1［M ＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.52（1H，d，J＝15.9 Hz，H-3），7.02（1H，d，J＝2.1 Hz，H-5），6.92（1H，dd，J＝8.2，2.1 Hz，H-9），6.76（1H，d，J＝8.2 Hz，H-8），6.21（1H，d，J＝15.9 Hz，H-2）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（s，C-1），115.5（d，C-2），147.0（d，C-3），127.8（s，C-4），115.1（d，C-5），149.5（s，C-6），146.8（s，C-7），116.5（d，C-8），122.8（d，C-9）。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］基本一致，故鑒定為咖啡酸。

化合物5：白色無定型粉末，C7H6O4，ESI-MSm／z：177.1［M ＋ Na］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.42（2H，overlapped，H-3，H-7），6.78（1H，d，J＝8.0 Hz，H-6）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：170.2（s，C-1），123.1（s，C-2），117.7（d，C-3），146.1（s，C-4），151.5（s，C-5），115.7（d，C-6），123.9（d，C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］基本一致，故鑒定為原兒茶酸。

化合物6：白色無定型粉末，C8H8O3，ESI-MSm／z：153.2［M ＋ H］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：9.74（1H，s，H-1），7.42（2H，overlapped，H-3，H-7），6.93（1H，d，J＝7.9 Hz，H-6），3.91（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：192.9（d，C-1），130.7（s，C-2），111.3（d，C-3），149.7（s，C-4），154.7（s，C-5），116.3（d，C-6），127.9（d，C-7），56.3（s，-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［13］基本一致，故鑒定為香草醛。

化合物7：黃色無定型粉末，C15H14O6，ESI-MSm／z：413.2［M ＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.85（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2′），6.76（2H，overlapped，H-5′，6′），5.97（1H，d，J＝2.3 Hz，H-8），5.87（1H，d，J＝2.3 Hz，H-6），4.58（1H，d，J＝7.6 Hz，H-2），4.00（1H，m，H-3），2.85（1H，m，H-4a），2.53（1H，m，H-4b）；13C-NMR CD3OD，125 MHz）δ：82.7（d，C-2），68.8（d，C-3），28.5（t，C-4），157.6（s，C-5），96.3（d，C-6），157.9（s，C-7），95.5（d，C-8），156.9（s，C-9），100.8（s，C-10），132.2（s，C-1′），115.2（d，C-2′），146.2（s，C-3′），146.3（s，C-4′），116.1（d，C-5′），120.0（d，C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［14］基本一致，故鑒定為兒茶素。

化合物8：黃色無定型粉末，C15H14O6，ESI-MSm／z：389.1［M-H］-。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.96（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2′），6.79（2H，overlapped，H-5′，6′），5.93（1H，d，J＝2.3 Hz，H-8），5.90（1H，d，J＝2.3 Hz，H-6），4.81（1H，s，H-2），4.16（1H，m，H-3），2.86（1H，m，H-4a），2.73（1H，m，H-4b）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：79.9（d，C-2），67.5（d，C-3），29.3（t，C-4），157.7（s，C-5），96.4（d，C-6），158.0（s，C-7），95.9（d，C-8），157.4（s，C-9），100.0（s，C-10），132.3（s，C-1′），115.3（d，C-2′），145.8（s，C-3′），145.9（s，C-4′），115.9（d，C-5′），119.4（d，C-6′）。以上 數(shù)據(jù)與文獻［14］基本一致，故鑒定為表兒茶素。

化合物9：白色無定型粉末，C7H6O5，ESI-MSm／z：193.2［M ＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.05（2H，s，H-3，H-7）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：170.4（s，C-1），121.9（s，C-2），110.3（d，C-3，7），146.4（d，C-4，6），139.6（d，C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻［7］基本一致，故鑒定為沒食子酸。

4 討論

本研究從美麗芍藥根70%乙醇部分離鑒定出9個化合物，主要涉及小分子酚酸類成分，其中化合物1～8 為首次從該植物中分離得到。以上酚酸類成分都有不同程度活性研究報道，其中Zeni 等［15］發(fā)現(xiàn)阿魏酸具有抗抑郁作用，其逆轉(zhuǎn)CUMS 誘導的抑郁行為可能與影響5-羥色胺能神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)。尹雪等［16］發(fā)現(xiàn)原兒茶酸對1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶誘導的帕金森病模型小鼠有保護作用，通過提高帕金森病模型小鼠中腦和紋狀體內(nèi)多巴胺D2 受體和酪氨酸羥化酶表達，降低誘導型一氧化氮合酶的表達發(fā)揮作用。肉桂酸作為桂枝茯苓丸的主要起效物質(zhì)，具有活血化瘀、消炎止痛、鎮(zhèn)靜等作用［17］。前期藥理學研究指出咖啡酸具有抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用，提示其在防治氧化應激和炎癥反應中可能的應用前景［18］?；诖?，為了豐富對美麗芍藥植物資源的認識，有必要對分離得到的單體化合物進行更深入的活性篩選，為該植物藥用資源的開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)支撐。