COX-2在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義*

吳敏，程衛(wèi)

（湖南省婦幼保健院，湖南 長(zhǎng)沙 410008）

子宮內(nèi)膜異位癥（Endometriosis,EMT）是育齡期婦女的常見(jiàn)病，臨床主要表現(xiàn)為疼痛、不孕、月經(jīng)異常等。手術(shù)和藥物治療是主要的治療手段，手術(shù)的創(chuàng)傷和藥物治療停藥后病情反復(fù)給女性帶來(lái)很大的困擾，也給家庭和社會(huì)增添了沉重的負(fù)擔(dān)。目前EMT發(fā)病原因尚未明確，探究其發(fā)病機(jī)制具有積極意義。有研究表明，高表達(dá)的環(huán)氧合酶2（Cyclooxygenase 2,COX-2）可能是EMT的發(fā)病機(jī)制之一，COX-2 參與EMT的血管形成，引起痛經(jīng)、不孕[1]。本研究旨在檢測(cè)COX-2在EMT 中的表達(dá)，探討COX-2與EMT 發(fā)生的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月1日—2017年12月31日于湖南省婦幼保健院婦科手術(shù)切除且經(jīng)病理確診為卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫患者36例。術(shù)中按美國(guó)生育協(xié)會(huì)（AFS）標(biāo)準(zhǔn)分期，其中Ⅰ期2例，Ⅱ期10例，Ⅲ期14例，Ⅳ期10例；增殖期15例，分泌期21例；患者年齡21 ～46歲，平均34.6歲。選取同期于本院就診的子宮內(nèi)膜標(biāo)本正常患者25例，患者年齡24 ～38歲，平均32.4歲。標(biāo)本取自同期因輸卵管性不孕行宮腔鏡檢查+診刮，并經(jīng)病理診斷為正常的增殖期或分泌期子宮內(nèi)膜。其中增殖期13例，分泌期12例。所有患者術(shù)前3個(gè)月內(nèi)無(wú)激素治療史。

1.2 方法

1.2.1 取材 選取腹腔鏡術(shù)中剝除的卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫組織及同時(shí)行診刮術(shù)獲取的在位子宮內(nèi)膜組織，以及正常子宮內(nèi)膜組織，置于10%甲醛溶液中固定，石蠟包埋，5μm 厚連續(xù)切片，HE 染色后鏡下觀察到典型子宮內(nèi)膜組織為納入標(biāo)本，并分別作為異位內(nèi)膜組、在位內(nèi)膜組和對(duì)照組，分別有36、36和25例。

1.2.2 COX-2 采用免疫組織化學(xué)二步法檢測(cè)COX-2。經(jīng)脫蠟、脫水、滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶、抗原修復(fù)、封閉、一抗、二抗、DAB 顯色、蘇木精復(fù)染及封片等步驟，具體依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。試劑一抗（鼠抗人COX-2 單克隆抗體）、二步法免疫組織化學(xué)法檢測(cè)試劑（PV-6002）及DAB 顯色劑均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。使用該公司提供的已知陽(yáng)性標(biāo)本做為陽(yáng)性對(duì)照，PBS 代替一抗做為陰性對(duì)照。

1.2.3 免疫組織化學(xué) 以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒定義為陽(yáng)性，無(wú)棕黃色顆粒定義為陰性。COX-2 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：高倍顯微鏡（10×40）下觀察細(xì)胞著色情況，陽(yáng)性細(xì)胞主要在胞質(zhì)表達(dá)，呈棕黃色。免疫組織化學(xué)半定量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[2]：每張切片任意選5個(gè)視野，觀察其陽(yáng)性細(xì)胞胞漿表達(dá)強(qiáng)度，無(wú)表達(dá)為陰性（0分）、陽(yáng)性顆粒呈淺黃色為可疑陽(yáng)性（1分）、淺棕色為弱陽(yáng)性（2分）、棕黃色為陽(yáng)性（3分）及棕褐色為強(qiáng)陽(yáng)性（4分）。計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（5個(gè)視野的平均數(shù)），無(wú)表達(dá)為陰性（0分）、＞ 0% ～15%為可疑陽(yáng)性（1分）、＞15% ～50%為弱陽(yáng)性（2分）、＞50% ～85%為陽(yáng)性（3分）及＞85%～100%為強(qiáng)陽(yáng)性（4分）。陽(yáng)性指數(shù)=陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度×陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)×1/2。結(jié)果由2 名病理醫(yī)師獨(dú)立判斷綜合而成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)或方差分析，進(jìn)一步兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組COX-2表達(dá)強(qiáng)度比較

異位內(nèi)膜組COX-2表達(dá)強(qiáng)度為（3.25±0.26）分，在位內(nèi)膜組為（3.16±0.28）分，對(duì)照組為（1.85± 0.29）分，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=359.800，P=0.000）。異位內(nèi)膜組和在位內(nèi)膜組較對(duì)照組高（P＜0.05）；異位內(nèi)膜組與在位內(nèi)膜組COX-2表達(dá)強(qiáng)度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 在位內(nèi)膜組與對(duì)照組增殖期和分泌期的COX-2表達(dá)強(qiáng)度比較

在位內(nèi)膜組增殖期和分泌期的COX-2表達(dá)強(qiáng)度分別為（3.38±0.25）和（3.26±0.26）分，對(duì)照組分別為（1.67±0.38）和（1.95±0.21）分，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=33.321和14.629，均P=0.000），在位內(nèi)膜組較對(duì)照組高。

2.3 異位內(nèi)膜組與對(duì)照組不同AFS分期的COX-2表達(dá)強(qiáng)度比較

異位內(nèi)膜組Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期COX-2表達(dá)強(qiáng)度分別為（2.88±0.25）和（3.18±0.28）分，對(duì)照組為（1.85±0.29）分，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=124.586，P=0.000），異位內(nèi)膜組Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期較對(duì)照組高（P＜0.05），異位內(nèi)膜組Ⅰ、Ⅱ期與Ⅲ、Ⅳ期COX-2表達(dá)強(qiáng)度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

環(huán)氧合酶包括COX-1、COX-2 同工酶。靜息時(shí)COX-1 催化細(xì)胞釋放前列腺素E2，主要維持細(xì)胞自身穩(wěn)定。COX-2 則幾乎不在正常情況下表達(dá)，當(dāng)出現(xiàn)炎癥及細(xì)胞增殖分化時(shí)，被細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子及腫瘤促進(jìn)劑等誘導(dǎo)，其表達(dá)可以迅速增高8 ～10倍。COX-2是前列腺素物質(zhì)生成的限速酶，被廣泛認(rèn)為是炎癥過(guò)程中的重要誘導(dǎo)酶之一[3]。有研究發(fā)現(xiàn)，COX-2 可以在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞表達(dá)，在位子宮內(nèi)膜上皮中的表達(dá)明顯高于腺上皮，且子宮內(nèi)膜異位癥病灶的COX-2 蛋白和mRNA表達(dá)均高于在位子宮內(nèi) 膜[4-6]。子宮內(nèi)膜異位癥在位子宮內(nèi)膜COX-2的表達(dá)高于正常子宮內(nèi)膜。本研究也得出類(lèi)似的結(jié)果。

而COX-2的表達(dá)與月經(jīng)周期的關(guān)系文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)論不一。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)在位內(nèi)膜COX-2 mRNA的表達(dá)高峰在增殖期，而異位子宮內(nèi)膜COX-2 mRNA的表達(dá)高峰在分泌期，提示子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位、異位子宮內(nèi)膜COX-2 蛋白和mRNA的差異性表達(dá)可能在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制中起重要作用，子宮內(nèi)膜異位癥中COX-2 異常高表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展和復(fù)發(fā)有關(guān)[4-6]。張烜等[7]研究發(fā)現(xiàn)，在位內(nèi)膜COX-2表達(dá)均為分泌期高于增殖期；內(nèi)異癥在位、異位內(nèi)膜COX-2表達(dá)無(wú)論增殖期、分泌期均高于同期的對(duì)照組，且COX-2表達(dá)與AFS分期無(wú)相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)各組COX-2 增殖期與分泌期的表達(dá)均無(wú)差異，且在Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示COX-2的表達(dá)可能在早期EMT的發(fā)生中發(fā)揮 作用。

在EMT的早期檢測(cè)方面，各學(xué)者將COX-2與其他指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)的探索，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)COX-2在在位、異位子宮內(nèi)膜的過(guò)表達(dá)以及腹腔液中前列腺素E2水平的異常升高可能是子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生、發(fā)展的原因之一[7]。還有研究報(bào)道，COX-2 mRNA與血清CA125及異位病灶的大小相關(guān)[8]。子宮內(nèi)膜異位癥患者的血清CA125和子宮內(nèi)膜COX-2水平呈正相關(guān)，且兩者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)診斷早期子宮內(nèi)膜異位癥有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值[9]。還有研究發(fā)現(xiàn)COX-2 選擇性抑制劑NS-398 可以促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖，其機(jī)制可能與抑制COX-2的表達(dá)、降低PGE2 以及Bcl-2 釋放、改變細(xì)胞周期有關(guān)[10]。提示COX-2 將來(lái)有望成為子宮內(nèi)膜異位癥的治療 靶點(diǎn)。