自血療法治療痤瘡臨床療效及對(duì)患者血清炎癥因子的影響*

顏雪珍,屈強(qiáng)強(qiáng),黃麗萍,楊 崢

陜西省中醫(yī)醫(yī)院針灸科(西安 710003)

痤瘡是臨床上常見的一種發(fā)生于皮脂腺、毛囊等部位的慢性炎癥性皮膚病，常分布在面部、上胸背部等皮脂腺分泌旺盛的部位，尤其好發(fā)于青春期男女[1]。臨床癥狀常以面部粉刺、炎性丘疹、膿皰、結(jié)節(jié)、囊腫、瘢痕及色素沉著等多形性皮損為主[2]。有研究顯示，痤瘡的發(fā)病率高達(dá)85%，盡管不會(huì)危及生命，但給患者心理和生活帶來極大的影響[3]。因此痤瘡的發(fā)病機(jī)制以及治療已經(jīng)成為當(dāng)今社會(huì)研究的一大熱門。筆者采用自血穴位注射治療尋常型痤瘡患者30例，并選取20例健康志愿者作為對(duì)照。同時(shí)對(duì)健康志愿者及患者治療前后血清白細(xì)胞介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子(TNF-α)水平進(jìn)行觀察，以探究其作用機(jī)制。

資料與方法

1 一般資料 選擇2018年8月至2018年12月在陜西省中醫(yī)醫(yī)院針灸科就診的30例尋常型痤瘡患者做為治療組，同期在本院招募健康志愿者20例作為對(duì)照組，治療組患者中男性5例，女性25例，年齡20～45歲，平均年齡為(26.40±5.76)歲；對(duì)照組男性4例，女性16例，年齡20～32歲，平均年齡為(25.85±4.22)歲。兩組一般資料的比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)陜西省中醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過[倫理批件號(hào)：(2017)倫理第(9)號(hào)]，研究對(duì)象均簽署知情同意書。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照中醫(yī)藥科技出版社《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》與趙辨著《中國(guó)臨床皮膚病學(xué)》中關(guān)于痤瘡的診斷及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[4-5]。尋常痤瘡診斷標(biāo)準(zhǔn)：好發(fā)于青少年，皮損主要位于顏面部，其次是胸背部，多對(duì)稱分布，皮損多表現(xiàn)為炎癥性丘疹、黑頭、白頭粉刺、膿皰等特點(diǎn)，嚴(yán)重者可出現(xiàn)結(jié)節(jié)、囊腫和瘢痕，常伴皮脂溢出。痤瘡的嚴(yán)重程度分級(jí)以Pillsbury四級(jí)改良分級(jí)法為依據(jù)。輕度(Ⅰ級(jí)):粉刺為主要皮損,可有少量丘疹和膿皰,總病灶數(shù)少于30個(gè)。中度(Ⅱ級(jí)):有粉刺,并有中等數(shù)量的丘疹和膿皰,總病灶數(shù)在31～50之間。中重度(Ⅲ級(jí)):大量丘疹和膿皰,偶見大的炎性皮損,分布廣泛,總病灶數(shù)在51～100之間,結(jié)節(jié)小于3個(gè)。重度(Ⅳ級(jí)):結(jié)節(jié)/囊腫性或聚合性痤瘡,多數(shù)有疼痛并形成囊腫,病灶數(shù)在100個(gè)以上；結(jié)節(jié)/囊腫在3個(gè)以上。

病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合尋常痤瘡的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，選擇Pillsbury分級(jí)中屬Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)的患者；②不伴其他各系統(tǒng)的嚴(yán)重疾病或精神病；③年齡18～45歲；④簽署知情同意者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①孕婦及哺乳期的婦女；②壞死型痤瘡、職業(yè)型痤瘡、及聚合型痤瘡；③就診前1個(gè)月系統(tǒng)使用過激素類、或其他影響免疫因素的藥物；④合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病，精神病患者；⑤有肝炎、艾滋病等傳染病史者；⑥不符合納入標(biāo)準(zhǔn)的其它病例。

2 治療方法

2.1 對(duì)照組：不予任何干預(yù)措施。

2.2 治療組：采用自血穴位注射療法。選穴：雙側(cè)曲池、血海、足三里。定位：參照中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 12346-2006《腧穴名稱與定位》。

操作方法：患者在Ⅲ級(jí)醫(yī)療環(huán)境中(清潔治療室)接受治療，取仰臥位或坐位，暴露施術(shù)部位，肘正中靜脈所在部位消毒后，使用一次性10 ml無菌注射器抽取血液約6 ml，雙側(cè)曲池、血海、足三里嚴(yán)格消毒，注射針頭刺入穴位約0.5～0.8寸,得氣后，每個(gè)穴位注射1 ml，出針后輕微按壓片刻。2次/周，共治療4周。

3 觀察指標(biāo)

3.1 臨床癥狀評(píng)分：根據(jù)皮損積分為標(biāo)準(zhǔn)，皮損積分,即皮膚出油情況、皮損程度、數(shù)量、顏色、腫痛5項(xiàng)積分之和。計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)：皮膚出油情況：干性(0分)，中性(2分)，混合性(4分)，油性(6分)；痤瘡皮損程度：正常(0分)：治療前無或治療后消失，輕度(2分)：粉刺為主，少量丘疹和膿皰，中度(4分)：粉刺，中等數(shù)量丘疹和膿皰，偶見結(jié)節(jié)，重度(6分)粉刺、丘疹、膿皰并見，可有結(jié)節(jié)和囊腫；痤瘡皮損數(shù)量:正常：治療前無或治療后消失(0分)，輕度(2分)：總病灶數(shù)少于30個(gè)，中度(4分)：總病灶數(shù)31～50個(gè)，重度(6分)：總病灶數(shù)51～100個(gè)，結(jié)節(jié)/囊腫小于3個(gè)；痤瘡皮損顏色:正常(0分)：治療前無或治療后消失，輕度(2分)：粉刺尖端色白或黑，中度(4分)：粉刺尖端色黑，丘疹色微紅，重度(6分)：丘疹色紅掀熱，膿皰黃綠色；痤瘡皮損腫痛:正常：治療前無或治療后消失(0分)，輕度(2分)：輕微腫脹疼痛，中度(4分)：局部腫脹疼痛較明顯，無或略有破損，重度(6分)：腫硬疼痛明顯，明顯破潰，流血性膿液。

3.2 血清白細(xì)胞介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子(TNF-α)含量檢測(cè)：抽取治療組患者干預(yù)前及干預(yù)4周后、對(duì)照組靜脈血各3 ml置于干燥管中，低速離心機(jī)離心5min(1500轉(zhuǎn)/min)，吸取上層血清置于消毒試管，保存在-20℃冰箱中備用。主要儀器為美國(guó)BioTek的SYNERGY2多功能酶標(biāo)儀、湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司的TDZ5-WS低速多管離心機(jī)、上海利聞科學(xué)儀器有限公司的渦旋震蕩儀，達(dá)優(yōu)IL-8 ELISA試劑盒及TNF-α ELISA試劑盒均購(gòu)自于深圳達(dá)科為生物工程有限公司。主要檢測(cè)步驟：①?gòu)谋渲腥〕鯡LISA試劑盒及收集的痤瘡患者血清樣本，室溫解凍后充分混勻；②配制Biotinylated antibody工作液；③配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液；④加樣；⑤加檢測(cè)抗體；⑥配制洗滌液；⑦配制Streptavidin-HRP工作液；⑧洗板；⑨加酶：每孔加入Streptavidin-HRP工作液100 ul/well。蓋上封板膜，室溫(18℃～25℃)孵育20min。⑩洗板：同步驟⑧。顯色：每孔加入TMB 100 ul，在18～25℃的室溫中避光孵育20min左右，孔內(nèi)顏色變?yōu)樯钏{(lán)色為止。終止反應(yīng)：迅速加入Stop solution 100 ul/well，各孔由藍(lán)色立即轉(zhuǎn)為黃色。讀板：終止反應(yīng)10 min內(nèi)，立即將檢測(cè)樣品酶標(biāo)板放入BioTek酶標(biāo)儀中，用檢測(cè)波長(zhǎng)450 nm讀取各孔樣本OD值。根據(jù)以上步驟分別用IL-8、TNF-α ELISA試劑盒檢測(cè)IL-8、TNF-α的OD值。結(jié)果計(jì)算根據(jù)實(shí)驗(yàn)配制標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度及檢測(cè)的相應(yīng)OD值，以標(biāo)準(zhǔn)品的血清濃度水平為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品OD值為縱坐標(biāo)，在Curve Expert 1.4上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣本血清OD值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出相應(yīng)血清IL-8和TNF-α的濃度值。

4 療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)治療前后臨床皮膚損害消退率來評(píng)定[3]。臨床痊愈：皮損消退，或僅遺留有色素沉著，癥狀消失，積分值減少≥95%；顯效：皮損大部分消退，癥狀明顯減輕，95%>積分值減少≥70%；有效：皮損部分消退，癥狀改善，70%>積分值減少≥30%；無效；皮損消退不明顯，或臨床癥狀反見加重，積分值減少<30%。痊愈率=痊愈例數(shù)/病例總數(shù)×100%，有效率=(痊愈例數(shù)+顯效例數(shù)+有效例數(shù))/病例總數(shù)×100%。皮膚損害消退率=[(療前皮損積分-療后皮損積分)/療前皮損積分]×100%。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)數(shù)資料結(jié)果采用卡方檢驗(yàn)。計(jì)量資料結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，數(shù)據(jù)均采用正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)，若符合正態(tài)分布或近似正態(tài)分布，采用t檢驗(yàn)，不符合采用秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 治療組治療前后癥狀評(píng)分比較 治療后皮膚出油，皮損程度、數(shù)量、顏色、腫痛及皮損總積分均較治療前減低(P<0.05)，見表1。

表1 治療組治療前后皮損積分比較

注：與干預(yù)前比較，*P<0.05

2 兩組治療前后患者血清IL-8、TNF-α含量比較 治療組干預(yù)前外周血IL-8表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，治療后外周血IL-8的表達(dá)較治療前降低(P<0.05)，治療后IL-8 的表達(dá)高于對(duì)照組(P<0.05)；治療組干預(yù)前外周血TNF-α表達(dá)明顯高于對(duì)照組(t=-136.86，P=0.000)，治療后外周血TNF-α的表達(dá)較治療前降低(P<0.05)，治療后TNF-α的表達(dá)高于對(duì)照組(P<0.05)。 見表2。

表2 兩組治療前后患者外周血IL-8、TNF-α含量比較(pg/ml)

3 治療組臨床療效 痤瘡患者經(jīng)自血療法治療后，痊愈2例，顯效2例，有效21例，無效5例，總有效率為83.3%。

討 論

痤瘡是臨床上常見的炎癥性皮膚病，無法根治，嚴(yán)重影響患者的身心健康[6]。我國(guó)人群中痤瘡的發(fā)病率為70%～87%，痤瘡的流行病學(xué)在全球范圍內(nèi)是一致的，據(jù)估計(jì)痤瘡會(huì)影響全球9.4%的人群，使其成為全球第八大疾病[7]。

大量研究顯示[8]炎癥是痤瘡發(fā)病機(jī)制的核心，貫穿于痤瘡發(fā)病的始終。多種因素及多種細(xì)胞因子參與了痤瘡的炎癥反應(yīng)，痤瘡丙酸桿菌是引起炎癥反應(yīng)的首要因素[9]。多年來,對(duì)痤瘡丙酸桿菌誘導(dǎo)炎癥機(jī)制進(jìn)行了大量研究，Beylot 等[10]發(fā)現(xiàn)，痤瘡丙酸桿菌可被TLR2識(shí)別，并通過下游的髓樣分化因子MyD88、IRAK、TRAF6 等信號(hào)通路激活TLR2依賴的核因子-κB(Nuclear factor κB，NF-κB)途徑，從而激活單核細(xì)胞，釋放TNF-α、IL-1、IL-8、IL-12等炎癥細(xì)胞因子，激發(fā)級(jí)聯(lián)效應(yīng)，啟動(dòng)痤瘡免疫炎癥反應(yīng)。研究顯示[11]IL-8為前炎癥細(xì)胞因子，對(duì)中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、T細(xì)胞均具有明顯的趨化作用，可釋放溶酶體酶及活性氧，啟動(dòng)抗菌炎癥反應(yīng)。TNF-α為機(jī)體炎癥、免疫反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)因子，可使炎癥細(xì)胞聚集，激活有絲分裂原活化蛋白激酶，降解膠原纖維[12]。上述炎癥因子主要通過趨化激活中性粒細(xì)胞，促進(jìn)中性粒細(xì)胞溶酶體酶活性及吞噬作用，使痤瘡炎癥部位的延性細(xì)胞得到補(bǔ)充，從而增加局部炎癥反應(yīng)[13]。

自血療法是一種非特異性刺激的自然療法，是指抽取患者少量肘靜脈血(不加抗凝劑及任何藥物)，立即注入選定穴位的中醫(yī)特色療法。該法已成為皮膚科常用治療手段，痤瘡病更是成為其優(yōu)勢(shì)病種[14]。本次研究顯示：痤瘡患者血清中TNF-α、IL-8水平高于健康人，說明炎癥反應(yīng)是痤瘡發(fā)病機(jī)制的核心，炎癥反應(yīng)貫穿痤瘡發(fā)病的始終；痤瘡患者經(jīng)自血療法治療后皮損積分較治療前明顯下降，表明自血療法能夠有效改善痤瘡患者的皮損，臨床療效確切；自血療法治療后痤瘡患者血清中TNF-α、IL-8水平較治療前明顯下降并接近健康人水平；證明自血療法能夠有效減輕痤瘡患者的炎癥反應(yīng)，從而使得面部炎癥反應(yīng)得到控制，改善痤瘡皮損狀態(tài)。這與吳瀟雅等[15]人研究的結(jié)果一致。

綜上所述，炎癥是痤瘡發(fā)病機(jī)制中重要的組成部分，目前控制痤瘡的炎癥反應(yīng)已經(jīng)成為治療痤瘡的研究熱點(diǎn)。本研究顯示自血療法能夠有效下調(diào)痤瘡患者血清中TNF-α、IL-8水平，提示自血穴位注射療法治療痤瘡的機(jī)制之一可能與控制炎癥反應(yīng)有關(guān)，這就為痤瘡患者炎癥反應(yīng)的控制提供一種安全有效的手段。