生物樣本庫建設(shè)過程中生物安全和生物危害指導(dǎo)文件——了解生物安全等級，滿足生物樣本庫安全要求

劉妍，張小燕，林愛芬 編譯，胡迅 審校

·新型冠狀病毒專欄·

生物樣本庫建設(shè)過程中生物安全和生物危害指導(dǎo)文件——了解生物安全等級，滿足生物樣本庫安全要求

劉妍，張小燕，林愛芬 編譯，胡迅 審校

100039 北京，解放軍總醫(yī)院第五醫(yī)學(xué)中心臨床研究管理中心（劉妍）；201210 上海，生物芯片上海國家工程研究中心（張小燕）；317000 臺州，浙江省臺州醫(yī)院生物資源中心（林愛芬）；610041 成都，四川大學(xué)華西醫(yī)院生物樣本庫（胡迅）

當(dāng)生物樣本庫處理不同類型的實(shí)驗(yàn)室樣本時，能及時了解潛在的生物危害，以確保操作員和實(shí)驗(yàn)室人員的安全十分重要。生物安全等級（BSL）是一系列用于通知實(shí)驗(yàn)室人員有關(guān)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中生物危害風(fēng)險等級的名稱。根據(jù)疾病控制和預(yù)防中心（CDC）的規(guī)定[微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的生物安全，第 5 版，HHS 出版號（CDC）21-1112]，按照風(fēng)險增加的順序，共有四個級別。本文將重點(diǎn)探討這些等級之間的主要區(qū)別，包括簡要介紹對生物危害物質(zhì)進(jìn)行分類的危害特征，并定義滿足安全要求的要點(diǎn)。

生物安全； 安全要求； 生物危害； 生物安全等級； 個人防護(hù)裝備

1 前言

生物安全等級（biological safety levels，BSL）是一系列安全預(yù)防措施，可幫助降低實(shí)驗(yàn)室人員接觸潛在傳染性生物危害物的風(fēng)險。CDC 定義并付諸四個生物安全等級的實(shí)施。每個 BSL 都有具體的控制措施，包括微生物操作、安全設(shè)備和設(shè)施防護(hù)措施，以保護(hù)實(shí)驗(yàn)室工作人員、公眾和環(huán)境免受實(shí)驗(yàn)室使用的傳染性生物危害物的影響。隨著風(fēng)險等級的提高，這些遏制措施以金字塔狀的方式建立在前一種安全等級上。BSL 決定了在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中允許開展的工作類型，并且在設(shè)施的設(shè)計(jì)中發(fā)揮著巨大作用。

1.1 生物危害物質(zhì)風(fēng)險評估

風(fēng)險評估在確定實(shí)驗(yàn)室的 BSL 方面起著重要作。CDC 將風(fēng)險評估定義為一種合理的針對生物危害物的安全操作過程，即采取適當(dāng)?shù)拇胧┮苑乐蛊湓斐蓪?shí)驗(yàn)室相關(guān)的感染發(fā)生。風(fēng)險評估主要考慮兩大類：生物物質(zhì)的風(fēng)險和實(shí)驗(yàn)室操作流程的風(fēng)險。同樣，BSL 的主要決定因素取決于實(shí)驗(yàn)室程序以及所使用的生物物質(zhì)。在風(fēng)險評估過程中，主要考慮以下參數(shù)：①感染性：病原體建立感染的能力或病原體的水平傳播能力；②傳播能力；③進(jìn)行的工作性質(zhì)。

具體而言，在對實(shí)驗(yàn)室處理的生物危害物進(jìn)行風(fēng)險評估時，要仔細(xì)檢查這種物質(zhì)的主要危險特性。包括：①在易感的人或動物宿主中感染并引起疾病的能力；②通過所致疾病的嚴(yán)重程度來衡量毒力；③是否具有有效的預(yù)防措施和治療方法；④危險物質(zhì)的其他特征包括實(shí)驗(yàn)室感染的傳播途徑、感染劑量及其在環(huán)境中的穩(wěn)定性、宿主范圍和流行特性。

綜上因素都有助于相應(yīng)危險物質(zhì)的風(fēng)險評估。世界衛(wèi)生組織（WHO）已為生物醫(yī)學(xué)環(huán)境中使用的有害物質(zhì)建立了風(fēng)險組別分類[1]。這些危險物質(zhì)主要根據(jù)自然疾病的傳播途徑分為不同的層級。值得注意的是，這 4 個風(fēng)險組別分類不等于在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中實(shí)施的 BSL。

2 生物安全等級區(qū)別

CDC 設(shè)定了 4 個 BSL，它們構(gòu)成了在這些實(shí)驗(yàn)設(shè)施中進(jìn)行生物危害交流和培訓(xùn)工作的重要組成部分。大多數(shù)機(jī)構(gòu)都設(shè)有生物安全審查委員會，以確保這些準(zhǔn)則能很好地遵守，并且通常能解決實(shí)驗(yàn)室特定的問題。涉及人體樣本的臨床工作通常在 BSL2 指南下進(jìn)行，盡管通常并不知道這些臨床樣本的傳染性。當(dāng)處理含血液或血液痕跡的樣本時，BSL2 的合規(guī)水平與職業(yè)安全與健康管理局（OSHA）（執(zhí)行安全與健康立法的監(jiān)督機(jī)構(gòu)）標(biāo)準(zhǔn)非常吻合[2]。嚴(yán)格遵守 CDC 給出的準(zhǔn)則和建議將有助于溝通以產(chǎn)生更安全的工作空間，并促進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的合規(guī)性。本文介紹了標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室中的生物安全等級的區(qū)別和分類，但沒有涉及針對脊椎動物生物安全等級標(biāo)準(zhǔn)提供的特定指南。CDC 在微生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的生物安全[3]中提供了對生物安全等級、安全性實(shí)踐以及動物生物安全性等級監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)的全面而深入的探討。

2.1 生物安全等級 1

生物安全等級 1（BSL1）是最低的風(fēng)險等級，主要的工作和程序涉及的是已建立的特征性的微生物菌株，尚未知它們可否持續(xù)地在健康成年人中引起疾病。這些微生物通常對環(huán)境的威脅也最小。例如：枯草芽孢桿菌、尾刺耐格里原蟲、釀酒酵母和大腸桿菌。在 BSL1 實(shí)驗(yàn)室的研究通常在開放的實(shí)驗(yàn)室工作臺上進(jìn)行，而無需特殊的防護(hù)。CDC 建議遵循以下標(biāo)準(zhǔn)微生物實(shí)踐。

2.1.1 BSL1的程序和實(shí)踐

1．在工作/處理有潛在危險的材料之后以及離開實(shí)驗(yàn)室之前，必須要洗手。

2．禁止在實(shí)驗(yàn)室區(qū)域飲食、吸煙、戴隱形眼鏡、化妝和存放食物。實(shí)驗(yàn)室中使用的冰箱和冰柜必須清楚地標(biāo)明僅供實(shí)驗(yàn)室使用。

3．禁止用口吸法移液。

4．建議減少尖銳物的使用，例如巴斯德玻璃移液器、針頭和手術(shù)刀，包括實(shí)施工程控制措施和正確使用尖頭針頭（用過的針頭不要套回針帽，須棄于防刺穿的容器中等）。

5．盡可能減少飛濺物和氣溶膠的產(chǎn)生。

6．接觸微生物/其他 BSL1 指定試劑后要對工作臺表面進(jìn)行消毒處理。

2.1.2 BSL1 的安全設(shè)備

BSL1 實(shí)驗(yàn)室不需要像生物安全柜這種特殊設(shè)備。以下是在 BSL1 使用的主要屏障和個人防護(hù)設(shè)備：

1．建議使用一般的實(shí)驗(yàn)室外套。

2．進(jìn)行可能會產(chǎn)生氣溶膠和危險物質(zhì)飛濺的程序時，需要使用防護(hù)眼鏡。

3．處理危險或潛在危險的材料時，應(yīng)戴手套以防止手暴露。如果手套被污染或刺穿，則應(yīng)及時更換。手套不能重復(fù)使用，并且在實(shí)驗(yàn)室人員對乳膠過敏的情況下，應(yīng)提供乳膠手套的替代品。離開實(shí)驗(yàn)室之前，要求必須洗手。

2.1.3 BSL1 的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施

1．洗手池。

2．可以將工作區(qū)與其余設(shè)施分隔開的門，并有門禁控制出入。

3．實(shí)驗(yàn)臺應(yīng)防水且耐熱、耐有機(jī)溶劑和酸堿。

4．實(shí)驗(yàn)室工作用椅應(yīng)使用無孔防滲且易于消毒及除污的材質(zhì)。

2.2 生物安全等級 2

生物安全等級 2（BSL2）建立在 BSL1 的安全預(yù)防措施和工作程序的基礎(chǔ)上。BSL2 類的生物有害物質(zhì)會對環(huán)境造成中等危害，如果實(shí)驗(yàn)室人員因不慎皮膚接觸、吸入或食入也會導(dǎo)致中等危害。BSL2 有害物質(zhì)包括金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和人類細(xì)胞系等。BSL2 實(shí)驗(yàn)室與 BSL1 實(shí)驗(yàn)室的區(qū)別在于，增加了專門針對處理 BSL2 病原體的特定培訓(xùn)。這些實(shí)驗(yàn)室對進(jìn)入工作區(qū)有限制，BSL2 有害物質(zhì)的處理、使用和操作都在工作區(qū)里進(jìn)行。最后，所有可能產(chǎn)生傳染性或可能產(chǎn)生傳染性氣溶膠/飛濺物的操作均要在生物安全柜（BSC）中進(jìn)行。

2.2.1 BSL2的程序和實(shí)踐

1．在使用 BSL2 危險物質(zhì)時，應(yīng)有嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室門禁。

2．進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的每個人都應(yīng)該看到有關(guān)潛在危險的警告標(biāo)志。

3．應(yīng)對實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)行操作 BSL2 危險物質(zhì)的相關(guān)培訓(xùn)。

4．應(yīng)為實(shí)驗(yàn)室人員提供所操作感染物相關(guān)的免疫接種。

5．必須準(zhǔn)備一份易于操作、實(shí)施的實(shí)驗(yàn)室專用生物安全手冊。

6．在采集、處理、加工、存儲和轉(zhuǎn)運(yùn)的整個過程中，應(yīng)將傳染性和潛在傳染性材料放入耐用的防漏容器中。

7．有危險物溢出或飛濺后，應(yīng)定時對實(shí)驗(yàn)室設(shè)備進(jìn)行消毒。

8．當(dāng)涉及感染性物質(zhì)的泄漏時，應(yīng)由經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的人員來控制和消毒。

9．任何情況下，暴露于感染源的設(shè)備在移出實(shí)驗(yàn)室之前都要進(jìn)行清潔和消毒。

10．有關(guān) BSL2 感染物處理和操作的程序都應(yīng)在生物安全柜或其他物理防護(hù)裝置中進(jìn)行。

11．與實(shí)驗(yàn)室工作無關(guān)的動植物嚴(yán)禁進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

2.2.2 BSL2 的安全設(shè)備

BSL2 實(shí)驗(yàn)室含有用于 BSL1 實(shí)驗(yàn)室的所有安全設(shè)備和預(yù)防措施。這包括所有工程控制、安全設(shè)備和任何特殊的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施。以下是 BSL2 實(shí)驗(yàn)室中使用的主要屏障和個人防護(hù)設(shè)備列表。

1．對于可能產(chǎn)生傳染性氣溶膠的操作，包括對裝有傳染性材料的開放容器進(jìn)行移液、離心、研磨、混合、搖動、超聲處理或常規(guī)處理，必須使用特殊的防護(hù)設(shè)備，如生物安全柜。

2．在使用危險材料時，必須始終穿戴實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服和工作服，并且在離開實(shí)驗(yàn)室之前必須脫掉防護(hù)服。

3．應(yīng)使用眼睛和面部防護(hù)設(shè)備（即護(hù)目鏡、面罩、口罩）來防止任何可能的飛濺、噴霧和其他可能的危險暴露。

2.2.3 BSL2的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施

1．實(shí)驗(yàn)室門應(yīng)可自動關(guān)閉并設(shè)有門禁，僅授權(quán)的工作人員可出入。

2．實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)應(yīng)便于清潔和消毒。

3．地面應(yīng)防滑，不得鋪設(shè)地毯等。

4．不建議窗戶向外開啟。但如果存在，則應(yīng)安裝紗網(wǎng)并密封。

5．應(yīng)將生物安全柜安裝在適當(dāng)?shù)奈恢?，以免干擾房間的空氣供應(yīng)和排氣，并與實(shí)驗(yàn)室的門和人員密集處保持足夠的距離。

6．生物安全柜應(yīng)該每年進(jìn)行認(rèn)證。來自 II 級 BSC 的高效微?？諝膺^濾器（HEPA）排出的空氣可以安全地再循環(huán)回到實(shí)驗(yàn)室。

7．洗眼站應(yīng)隨時可用。

8．高壓滅菌設(shè)施或其他實(shí)驗(yàn)室廢物凈化的裝置（如焚燒爐）應(yīng)備好且便于使用。

9．真空管路應(yīng)上底漆，并用液體消毒劑保護(hù)。

2.3 生物安全等級 3

生物安全等級 3（BSL3）建立在 BSL1 和 BSL2 的安全預(yù)防措施和程序的基礎(chǔ)上。包括所有工程控制、安全設(shè)備和任何特殊的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施。BSL3 類的生物危害物質(zhì)是本土的或外來的，可通過呼吸道傳播導(dǎo)致嚴(yán)重或致命的疾病。例如結(jié)核分枝桿菌、SARS 冠狀病毒、鸚鵡熱衣原體等。BSL3 實(shí)驗(yàn)室與 BSL2 實(shí)驗(yàn)室的區(qū)別在于危險物質(zhì)的傳播性質(zhì)。BSL3 實(shí)驗(yàn)室還要求增加負(fù)壓定向氣流的預(yù)防措施，以確?？諝鈴姆菍?shí)驗(yàn)室區(qū)域流入實(shí)驗(yàn)室區(qū)域。

2.3.1 BSL3 程序和實(shí)踐

1．實(shí)驗(yàn)室人員必須接受有關(guān) BSL3 危險物質(zhì)（具有潛在的致命性）處理和操作的專門培訓(xùn)。

2．所有涉及此類危險物質(zhì)的處理操作步驟都必須在生物安全柜或其他物理密閉設(shè)備中進(jìn)行。

3．需要送出實(shí)驗(yàn)室外消毒的危險物質(zhì)，應(yīng)在防漏、安全和耐用的容器中轉(zhuǎn)運(yùn)。

4．必須在實(shí)驗(yàn)室入口的門上清楚地標(biāo)識通用的生物危害標(biāo)志。

5．在接觸傳染性物質(zhì)后必須立即評估，流程必須遵循實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊。必須將所有突發(fā)事件報告給實(shí)驗(yàn)室主管，并保留實(shí)驗(yàn)室記錄。

2.3.2 BSL3 安全設(shè)備

1．在 BSL3 實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行的所有涉及感染性物質(zhì)的操作，都必須使用 II/III 級生物安全柜。

2．人員防護(hù)設(shè)備（PPE）包括防護(hù)服，配以有系帶的實(shí)驗(yàn)室工作服或包裹罩衫或連體工作服。BSL3 實(shí)驗(yàn)室中穿戴的 PPE 任何時候都不得在實(shí)驗(yàn)室外穿戴。某些 BSL3 PPE 可以重復(fù)使用，但在送洗之前必須進(jìn)行消毒。

3．在裝有感染性動物的房間中，必須使用護(hù)目鏡、面罩和呼吸防護(hù)裝置。

2.3.3 BSL3 的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施

1．進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室僅限于經(jīng)過授權(quán)和培訓(xùn)的人員。

2．BSL3 實(shí)驗(yàn)室必須通過兩個獨(dú)立的自動關(guān)閉和鎖門系統(tǒng)進(jìn)入。建議在兩個自動關(guān)閉門之間的通道中放置一個緩沖前廳，在該處可以換衣服并適當(dāng)整理個人防護(hù)裝備。

3．實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)時必須考慮最少水平占地，便于清潔和消毒。

4．地板、墻壁、天花板、門、通風(fēng)口和表面的所有縫隙均應(yīng)密封。

5．天花板和墻壁的表面應(yīng)光潔，所有表面均應(yīng)易于清潔和消毒。

6．地板必須防滑、防水并且耐化學(xué)腐蝕。應(yīng)考慮安裝無縫、密封、具有彈性的地板。

7．若對實(shí)驗(yàn)室空間進(jìn)行翻新、維護(hù)、關(guān)閉或任何其他重大改變，必須對整個實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行消毒。

8．除疏水閥中的液體消毒劑外，所有真空管路還必須使用 HEPA 過濾器進(jìn)行保護(hù)。

9．BSL3 實(shí)驗(yàn)室必須具有管道通風(fēng)系統(tǒng)，該系統(tǒng)通過將空氣從清潔區(qū)域抽入實(shí)驗(yàn)室并將其移向可能受到污染的區(qū)域，從而提供持續(xù)的定向氣流。該空間的設(shè)計(jì)應(yīng)確保在出現(xiàn)故障的情況下氣流不會反向。需要記住有關(guān)通風(fēng)系統(tǒng)的一些提示：

（a）實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)能夠輕松識別氣流方向。

（b）應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室入口處放置一個指示氣流方向的可見監(jiān)控裝置。最好使用聲音警報來通知?dú)饬髦袛唷?/p>

（c）實(shí)驗(yàn)室排氣不應(yīng)再循環(huán)至建筑物的任何其他區(qū)域。

10．HEPA 過濾器外罩應(yīng)具有氣密性隔離風(fēng)門，消毒端口和（或）袋裝入/袋裝出功能（具有適當(dāng)?shù)南境绦颍?yīng)對每個過濾器和外罩進(jìn)行泄漏測試，且有年度檢測和認(rèn)證。

11．只有經(jīng)過每年重新認(rèn)證和測試并遵從廠商建議而使用的 HEPA 才合格，來自 II 級 BSC 的 HEPA 過濾后的廢氣才能安全地再循環(huán)到實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中。BSC 可以通過硬連接直接排到室外，也可以連接到實(shí)驗(yàn)室的排風(fēng)系統(tǒng)。

12．III 類 BSC 必須硬連接到機(jī)柜的第二個排氣 HEPA 過濾器。

13．必須保持 BSC 的供氣，以保持安全柜的負(fù)壓。

14．含有 HEPA 過濾功能的密閉裝置（即 BSC）將用作可能產(chǎn)生傳染性氣溶膠的設(shè)備的主要屏障裝置。HEPA 過濾器必須每年進(jìn)行測試和更換。

15．根據(jù) BSL3 實(shí)驗(yàn)室的風(fēng)險評估，可能需要實(shí)驗(yàn)室增強(qiáng)功能。包括：用于清潔存儲設(shè)備、物資用品和衣著入出、淋浴功能的前廳；用于實(shí)驗(yàn)室隔離的氣密風(fēng)門；除已在安全外罩設(shè)備上安裝的 HEPA 過濾器外，還需對實(shí)驗(yàn)室廢氣進(jìn)行 HEPA 終端過濾；實(shí)驗(yàn)室廢水消毒；高級訪問控制設(shè)備（即生物認(rèn)證）。

16．設(shè)施設(shè)計(jì)、操作程序和參數(shù)必須在 BSL3 實(shí)驗(yàn)室全面運(yùn)行之前記錄在案。每年須對整個設(shè)施進(jìn)行重新評估和記錄。

2.4 生物安全等級 4

生物安全等級 4（BSL4）是非常罕見的生物安全最高級別實(shí)驗(yàn)室，通常是獨(dú)立的設(shè)施，與其他設(shè)施在物理上是非連接的，且充分隔離。BSL4 是建立在 BSL1、2 和 3 實(shí)驗(yàn)室的安全預(yù)防措施和程序的基礎(chǔ)上，包括所有工程控制、安全設(shè)備和特殊的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施。BSL4 類生物危害物質(zhì)具有危險性和奇特性，在實(shí)驗(yàn)室中通過氣溶膠/呼吸道傳播構(gòu)成高風(fēng)險，可能導(dǎo)致威脅生命的疾病，且通常沒有疫苗和治療方法。BSL4 處理的是某些傳播途徑仍不清楚的有害微生物，包括埃博拉病毒、馬爾堡病毒和拉沙病毒以及克里米亞-剛果出血熱等。

BSL4 實(shí)驗(yàn)室與 BSL3 實(shí)驗(yàn)室的不同之處在于，實(shí)驗(yàn)室人員和工作人員在處理極危險的傳染源時需要進(jìn)行專門的培訓(xùn)。包括一級和二級安全措施，以及涉及處理、操作和存儲這些極危險物質(zhì)的所有標(biāo)準(zhǔn)和特殊做法。BSL4 實(shí)驗(yàn)室分為柜式實(shí)驗(yàn)室和防護(hù)服實(shí)驗(yàn)室兩種類型，兩者之間的差異以及針對 BSL4 的附加保護(hù)措施將在下面詳細(xì)討論。

2.4.1 BSL4 程序和實(shí)踐

1．只有出于科學(xué)研究或受到其他必要支持為目的的人員才有權(quán)進(jìn)入 BSL4 實(shí)驗(yàn)室。

2．所有進(jìn)入 BSL4 實(shí)驗(yàn)室的細(xì)節(jié)都必須正確記錄，包括日期、時間和所有進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室人員的姓名。

3．實(shí)驗(yàn)室人員在進(jìn)入 BSL4 實(shí)驗(yàn)室之前必須更衣。

4．實(shí)驗(yàn)室人員在離開 BSL4 實(shí)驗(yàn)室之前必須淋浴。

5．除非有緊急情況，否則實(shí)驗(yàn)室的人員出入必須通過專門的更衣室。

6．用過的實(shí)驗(yàn)服必須作為污染材料處理，并且不得通過個人淋浴設(shè)備從內(nèi)部更衣室移走。在送洗之前，應(yīng)對它們進(jìn)行徹底消毒。

7．所有從 BSL4 實(shí)驗(yàn)室運(yùn)出的材料都必須徹底消毒。

8．實(shí)驗(yàn)室主管對實(shí)驗(yàn)室人員的監(jiān)督至關(guān)重要，其中包括要確保實(shí)驗(yàn)室人員做到：

（a）接受有關(guān) BSL4 設(shè)施的特定操作和各個 BSL4 設(shè)施相關(guān)操作步驟的相關(guān)培訓(xùn)。

（b）在 BSL4 密閉空間處理致病微生物時，能熟練掌握標(biāo)準(zhǔn)和特殊操作。

（c）接受必要的年度更新培訓(xùn)，并在流程或制度有任何變化時要確保接受額外的培訓(xùn)。

9．從實(shí)驗(yàn)室中取出的生物材料必須在不易破損的密封主容器（一層包裝）中轉(zhuǎn)移，然后再密封在不易破損的密封二級容器中（二層包裝）。這些材料必須通過消毒罐（三級包裝）、熏蒸室或消毒淋浴器消毒后轉(zhuǎn)移。從實(shí)驗(yàn)室中取出的包裝材料必須保持活力和完好無損，并且除非經(jīng)過確認(rèn)的方法滅活，否則不得在 BSL4 密閉容器之外打開。

10．未通過更衣室?guī)?BSL4 實(shí)驗(yàn)室的耗材、設(shè)備和材料，必須通過先前已消毒的雙門高壓滅菌器、熏蒸室或氣閘帶入。鎖緊外門確保安全后，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的人員可以通過打開高壓滅菌器、熏蒸室或氣閘的內(nèi)門來取回材料。熏蒸室或高壓滅菌器的門必須以防止外門打開的方式鎖定，除非高壓滅菌器或熏蒸室已完成凈化循環(huán)。

11．BSL4 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)僅存放必要的設(shè)備和耗材。

12．必須制定緊急程序和規(guī)程，包括醫(yī)療急救、設(shè)施故障、逃走的動物和其他緊急情況。必須向所有實(shí)驗(yàn)室人員提供緊急操作流程培訓(xùn)。

2.4.2 BSL4 安全設(shè)備

柜式實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室中涉及感染材料的所有工作必須在 III 級 BSC 中進(jìn)行。III 級 BSC 特殊流程包括：

（a）從 III 級 BSC 中排出的污染物質(zhì)必須要通過雙門高壓滅菌器。高壓滅菌器門必須聯(lián)鎖（類似孔明鎖），以便在任何指定時間只能打開一個門，并對其進(jìn)行自動控制，以便在徹底完成消毒循環(huán)后方可打開外部高壓滅菌器門。

（b）III 級 BSC 必須通過消毒罐、熏蒸室或等效的方法進(jìn)行消毒，以便將不能被高壓滅菌器消毒的材料和設(shè)備安全地從柜中移出。污染物質(zhì)的外包裝物必須全程保持不受損。

（c）必須將 HEPA 過濾器放置在進(jìn)氣口上，并將兩個 HEPA 過濾器串聯(lián)在設(shè)備的排氣口上。機(jī)柜的供氣和排氣管道上必須有氣密阻尼器，以允許對設(shè)備進(jìn)行氣體或蒸汽凈化。所有 HEPA 過濾器外殼上都必須設(shè)有用于注入測試介質(zhì)的端口。

（d）BSC 內(nèi)部必須具有光滑表面，以便于清潔和消毒；必須消除所有鋒利的邊緣，以減少割傷和手套撕裂的風(fēng)險。BSC 中的所有設(shè)備也不應(yīng)帶鋒利的邊緣。

（e）必須在使用前檢查 III 類機(jī)柜手套，如有損壞，應(yīng)及時更換。機(jī)柜在每年重新認(rèn)證后，應(yīng)同時更換手套。

（f）個人衣物、首飾或其他物品不得通過淋浴區(qū)以外的 BSL4 空間，但眼鏡除外。

（g）機(jī)柜手套下方須存放一次性手套，以增加保護(hù)。手套嚴(yán)禁帶出實(shí)驗(yàn)室外。

防護(hù)服實(shí)驗(yàn)室：在 BSL4 防護(hù)服實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行的所有工作必須在一件連體式正壓供氣式防護(hù)服中進(jìn)行。

（a）必須在經(jīng)過 HEPA 過濾的主要屏障系統(tǒng)（即 BSC）內(nèi)進(jìn)行所有傳染性微生物的操作和處理。來自 II 級BSC 的 HEPA 濾過的空氣可以安全地再循環(huán)回到實(shí)驗(yàn)室空間。

（b）實(shí)驗(yàn)室人員在進(jìn)入室內(nèi)穿戴正壓服之前，必須穿著實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服，如磨砂服。

（c）必須戴一次性手套，以防防護(hù)服手套破損。請勿在更衣區(qū)域外佩戴一次性手套。

（d）在實(shí)驗(yàn)室操作期間，要對防護(hù)服手套進(jìn)行消毒處理。

2.4.3 BSL4的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施

柜式實(shí)驗(yàn)室設(shè)施要求：

（a）BSL4 柜式實(shí)驗(yàn)室通常位于單獨(dú)的建筑物中或在建筑物的一個隔離限制區(qū)。

（b）實(shí)驗(yàn)室必須有專用的供氣和排氣，以及真空管路和指定的消毒系統(tǒng)。

（c）設(shè)施中的房間必須順序布置，離開 BSL4 設(shè)施之前的實(shí)驗(yàn)員有序地從污染的更衣區(qū)到個人淋浴間，最后進(jìn)入潔凈的更衣室。

（d）設(shè)施應(yīng)具有自動啟動的應(yīng)急電源，以在緊急情況下調(diào)控生命支持系統(tǒng)、警報、實(shí)驗(yàn)室排氣系統(tǒng)、照明、進(jìn)出控制、BSCs 和其他門密封墊圈。

（e）BSL4 設(shè)施要求在密閉罩上裝有雙門高壓滅菌器、熏蒸室、儲罐或通風(fēng)氣閘，以便于傳遞物品或設(shè)備。

（f）機(jī)柜室、內(nèi)部更衣室和外部更衣室的門旁必須有醫(yī)用感應(yīng)式洗手池。裝有 III 級 BSC 的房間中的所有水槽必須連接到廢水凈化系統(tǒng)。

（g）實(shí)驗(yàn)室地板的排水管必須直接連接到廢液消毒系統(tǒng)。

（h）穿透實(shí)驗(yàn)室墻壁、地板或天花板的管道安裝或任何其他施工，必須做到密封以確保實(shí)驗(yàn)室沒有回流。環(huán)境通風(fēng)系統(tǒng)必須有兩個串聯(lián)的 HEPA 過濾器，并密封到第二個過濾器。

（i）窗戶必須是防裂碎和密封的。

（j）不建議使用中央抽真空系統(tǒng)，但如果已使用了這樣的系統(tǒng)，則除用于機(jī)柜的房間外，不得將其用于其他任何區(qū)域。

（k）該設(shè)施應(yīng)具有專用的非循環(huán)通風(fēng)系統(tǒng)，并且此類HVAC 系統(tǒng)只能在 BSL4 相同級別實(shí)驗(yàn)室之間共享。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)必須保持相對周圍環(huán)境呈負(fù)壓。

（l）必須有多個排氣風(fēng)扇。建議安裝多個供氣風(fēng)扇，且供氣風(fēng)扇和排氣風(fēng)扇必須聯(lián)鎖，以防止實(shí)驗(yàn)室正壓。

（m）應(yīng)使用具有警報功能的設(shè)備監(jiān)視設(shè)施的通風(fēng)系統(tǒng)，以防系統(tǒng)故障。

（n）所有供給機(jī)柜的氣體和由 BSL4 外排的氣體必須經(jīng)過兩個 HEPA 過濾器。

（o）必須提供熏蒸室、儲罐或等效的消毒方法，以便將不能在高壓滅菌器中消毒的材料和設(shè)備安全地從機(jī)柜室中移出。

（p）來自機(jī)柜室內(nèi)地漏、水槽和機(jī)柜內(nèi)高壓滅菌室的液體廢物必須經(jīng)過消毒處理，最好進(jìn)行加熱處理，然后再排入下水道。淋浴和廁所產(chǎn)生的液體廢物無需處理。

（q）在實(shí)驗(yàn)室外打開的高壓滅菌器必須用耐用、氣密且能夠伸縮的生物材料密封。從高壓滅菌器室排出的氣體也必須進(jìn)行消毒處理。

（r）必須對機(jī)柜 BSL4 設(shè)施進(jìn)行年檢，對運(yùn)行參數(shù)進(jìn)行測試和驗(yàn)證。

防護(hù)服實(shí)驗(yàn)室設(shè)施要求：與柜式實(shí)驗(yàn)室具有相同的要求，還包括以下附加規(guī)定：

（a）BSL4 防護(hù)服實(shí)驗(yàn)室通常位于單獨(dú)的建筑物中或建筑物中的一個隔離區(qū)域中。

（b）必須布置排列好設(shè)施內(nèi)的房間，以確保氣流定向通過化學(xué)淋浴間、內(nèi)部更衣室、個人淋浴間以及最后的外部潔凈更衣區(qū)域。

（c）必須通過裝有氣密門的氣閘才能進(jìn)入 BSL4。

（d）在實(shí)驗(yàn)員離開實(shí)驗(yàn)室之前，需要使用化學(xué)噴淋對正壓防護(hù)服的表面進(jìn)行消毒。一旦需要緊急出口，或者如果化學(xué)淋浴系統(tǒng)發(fā)生故障，則需要無壓供給化學(xué)消毒劑進(jìn)行消毒。

[1] World Health Organization. Laboratory biosafety manual. 3rd ed. Malta: 2004. [2016-01-02]. http://www.who.int/csr/resources/ publications/biosafety/Biosafety7.pdf?ua=1.

[2] United Stated Department of Labor. Bloodborne pathogens. Occupational safety and health standards. (2012-04-03) [2016-01-02]. https://www.osha.gov/pls/oshaweb/owadisp.show_document?p_table=STANDARDS&p_id=10051.

[3] Centers for Disease Control and Prevention. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, 5th ed. (2018-10-24) [2016-01-02]. https://www.cdc.gov/labs/BMBL.html?CDC_AA_refVal =https%3A%2F%2Fwww.cdc.gov%2Fbiosafety%2Fpublications%2Fbmbl5%2Findex.htm.

胡迅，Email：hxxhu99@163.com

2020-03-11

10.3969/j.issn.1673-713X.2020.02.009