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    環(huán)狀RNA PTENP1、HIPK3在甲胎蛋白陰性的肝細胞癌患者中的表達及意義

    2020-01-08 09:07:38
    國際消化病雜志 2019年6期
    關(guān)鍵詞:肝細胞良性陰性

    肝細胞癌患者約占原發(fā)性肝癌患者的85%,中國肝細胞癌發(fā)病和病死人數(shù)占世界總數(shù)的50%[1],及早診斷和準確評估病情是提高療效和改善預(yù)后的關(guān)鍵。目前臨床上主要依靠影像學(xué)和甲胎蛋白(AFP)對肝細胞癌進行診斷和病情評估,但約有30%~40%肝細胞癌患者的血清AFP處于正常水平(AFP<25 μg/L),這類患者稱之為AFP陰性肝細胞癌患者,因此,單獨檢測血清AFP存在較高的誤診及漏診率[2]。以往研究顯示,AFP陰性肝細胞癌患者的瘤體通常較小,易漏診[3]。因此,尋找可靠的診斷標志物一直是臨床研究的熱點。有研究發(fā)現(xiàn)環(huán)狀RNA(circRNA)PTENP1、HIPK3通過多種途徑參與了肝細胞癌的發(fā)生、進展[4-5],在肝細胞癌患者血清中異常表達,但其在AFP陰性肝細胞癌中的研究較少。本研究檢測了AFP陰性肝細胞癌患者、肝臟良性病變患者及健康人群血清中PTENP1、HIPK3表達情況,并初步探討了其在AFP陰性肝細胞癌診治中的價值。

    1 對象與方法

    1.1 研究對象

    選擇2016年6月至2019年3月期間在西安大興醫(yī)院收治并確診的51例AFP陰性(AFP≤30 μg/L)肝細胞癌患者設(shè)為肝細胞癌組,38例肝臟良性病變患者設(shè)為良性病變組(肝細胞腺瘤8例,肝炎后肝硬化21例,先天性肝囊腫9例),另選擇35名同期健康體檢者設(shè)為對照組。肝細胞癌組和良性病變組均經(jīng)肝穿刺活組織檢查或術(shù)中病理切片確診。納入標準:(1)精神正常,意識清楚,能配合完成本研究;(2)年齡>18歲。排除標準:(1)合并其他部位腫瘤者;(2)入組前曾接受放射治療、化學(xué)治療或其他抗腫瘤治療者;(3)精神疾病患者。所有入組者均知情同意,本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會核準。收集研究對象的基本資料,包括年齡、性別、煙酒史及既往疾病史等,測量體質(zhì)量、身高,計算體質(zhì)指數(shù)(BMI)。3組的基本資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,見表1。

    表1 3組的基本資料比較

    1.2 方法

    采集研究對象的清晨空腹外周靜脈血5 mL,3 000 r/min離心15 min,分離血清,置于-80 ℃冰箱保存待測。采用qRT-PCR法檢測3組的血清PTENP1、HIPK3表達水平:根據(jù)試劑盒要求和步驟提取血清總微RNA(miRNA)后,進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),以cDNA為模板,進行PCR擴增及熒光定量檢測。miRNA試劑盒購自天根生化科技(北京)有限公司,采用2-△△Ct法計算PTENP1、HIPK3相對表達水平,重復(fù)檢測3次,取平均值。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

    采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,計量資料組間比較采用t檢驗,多組間比較采用方差分析,計數(shù)資料采用卡方檢驗,二元Logistic回歸計算PTENP1、HIPK3預(yù)測AFP陰性肝細胞癌的OR和95%CI,受試者工作特征(ROC)曲線分析PTENP1、HIPK3鑒別AFP陰性肝細胞癌的價值,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 3組的血清PTENP1、HIPK3表達水平比較

    與對照組和良性病變組比較,肝細胞癌組的血清PTENP1表達水平明顯降低,而血清HIPK3表達水平明顯升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05);良性病變組的血清PTENP1、HIPK3表達水平與對照組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。見表2。

    表2 3組的血清PTENP1、HIPK3表達水平比較()

    注:與對照組比較,aP<0.05;與良性病變組比較,bP<0.05

    2.2 血清PTENP1、HIPK3對AFP陰性肝細胞癌的發(fā)病風險預(yù)測

    校正表1中基本資料后,單因素和多因素分析顯示,血清PTENP1低表達水平和血清HIPK3高表達水平是AFP陰性肝細胞癌發(fā)病的獨立危險因素(P<0.05)。見表3。

    表3 血清PTENP1、HIPK3對AFP陰性肝細胞癌的發(fā)病風險預(yù)測

    2.3 血清PTENP1、HIPK3對AFP陰性肝細胞癌患者的鑒別診斷效能分析

    因變量為分類二變量,肝細胞癌組標記為1,對照組和良性病變組標記為0,自變量為血清PTENP1、HIPK3表達水平,ROC曲線分析提示,PTENP1、HIPK3聯(lián)合檢測的受試者工作特征曲線下面積(AUC)為0.951,大于PTENP1、HIPK3單獨檢測的0.756、0.855(Z=4.527,P=0.000;Z=3.561,P=0.000),且聯(lián)合檢測可提高診斷的靈敏度和特異度(P<0.05)。見圖1和表4。

    圖1 血清RNA PTENP1、HIPK3診斷AFP陰性肝細胞癌的ROC曲線

    表4 血清PTENP1、HIPK3單獨及聯(lián)合鑒別診斷AFP陰性肝細胞癌的價值比較

    3 討論

    肝癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,具有發(fā)病率高、侵襲性強及預(yù)后較差等特點,因其發(fā)病隱匿,多數(shù)患者確診時已進展至中晚期,是威脅人類健康甚至生命安全的主要疾病[6-8]。肝細胞癌早期診斷標志物的相關(guān)研究較多[9-12],目前臨床上仍采用AFP結(jié)合影像學(xué)檢查的模式來診斷和評估病情。然而,對于肝細胞癌中30%~40%的AFP陰性患者,此模式局限性極大,易漏診、誤診,且不能準確判斷療效及預(yù)后[13]。因此,另尋找有價值的指標來提高AFP陰性肝細胞癌的診斷、療效監(jiān)測及預(yù)后評估效能顯得尤為重要。

    隨著分子基因研究領(lǐng)域的不斷進展,各種分子基因作為標志物在各種腫瘤中的異常表達陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)。circRNA是長鏈非編碼RNA中的一種,具有種類豐富、進化保守及在機體中表達相對穩(wěn)定等特性,具有作為標志物的潛質(zhì)。以往研究發(fā)現(xiàn),HIPK3異常表達與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),并參與了腫瘤化學(xué)治療耐藥及胃癌的發(fā)生、進展等生物調(diào)控[14];而PTENP1與miR-193a-3p相互作用,通過PTEN途徑抑制肝細胞癌的遷移和侵襲,有望成為肝細胞癌的生物標志物[15]。目前這兩種circRNA在AFP陰性肝細胞癌中的相關(guān)研究較少。本研究檢測了AFP陰性肝細胞癌患者、肝臟良性病變患者及健康人群的血清PTENP1、HIPK3表達情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組和良性病變組相比,肝細胞癌組的血清PTENP1表達水平明顯降低,而血清HIPK3表達水平明顯升高(P<0.05),良性病變組與對照組之間的差異則無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),這提示血清PTENP1、HIPK3在AFP陰性肝細胞癌患者中差異表達,具備作為此類患者鑒別診斷的有價值的指標。進一步分析發(fā)現(xiàn),血清PTENP1低表達水平和血清HIPK3高表達水平是AFP陰性肝細胞癌發(fā)病的獨立危險因素(P<0.05),這提示血清PTENP1、HIPK3在AFP陰性肝細胞癌的發(fā)病風險評估中具有較高的潛在價值。此外,本研究應(yīng)用ROC曲線分析了血清PTENP1、HIPK3對AFP陰性肝細胞癌的鑒別診斷效能,結(jié)果顯示血清PTENP1、HIPK3聯(lián)合檢測的AUC為0.951,大于PTENP1、HIPK3單獨檢測的AUC(0.756、0.855),聯(lián)合檢測的敏感度為88.24%,特異度為91.07%,均高于單獨檢測,這提示血清PTENP1、HIPK3檢測在AFP陰性肝細胞癌的鑒別診斷中均具有較高參考價值,且兩者聯(lián)合檢測可提高診斷的敏感度和特異度。

    本研究尚存在不足:為單中心研究,納入病例可能會造成偏倚,影響結(jié)果的準確性;樣本例數(shù)偏少;未能就PTENP1、HIPK3對AFP陰性肝細胞癌的具體作用機制進行探討;未進行長時間隨訪不同的血清PTENP1、HIPK3表達水平對AFP陰性肝細胞癌患者預(yù)后的影響。這為后續(xù)研究指明了方向,為臨床靶向治療提供了參考。

    綜上所述,AFP陰性肝細胞癌患者存在血清PTENP1、HIPK3異常表達,兩者聯(lián)合檢測具有較高的鑒別診斷和發(fā)病風險評估價值。

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