MicroRNAs 對精原干細(xì)胞自我更新與分化調(diào)控的機(jī)制研究進(jìn)展

張林林，馬天天，王愛華，靳亞平，湯克瓊

（西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，陜西楊陵 712100）

精原干細(xì)胞（Spermatogonial Stem Cells，SSCs）是生物體內(nèi)唯一能將遺傳信息傳遞至子代的成體干細(xì)胞，是精子發(fā)生的基礎(chǔ)。SSCs 通過自我更新和分化保持雄性體內(nèi)SSCs 和精子數(shù)量的穩(wěn)定，SSCs 增殖活動過強(qiáng)將導(dǎo)致其過度積累，影響正常的精子形成；反之將導(dǎo)致SSCs 的耗竭。因此，自我更新與分化之間的動態(tài)平衡對SSCs 群體數(shù)量的穩(wěn)定具有重要作用。SSCs 的調(diào)節(jié)需要內(nèi)源因子和外源信號的共同作用[1]，包括RNA 誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物（RISC）成分和大量MicroRNAs（miRNAs）的表達(dá)[2-3]。RISC 組件Dicer 在生殖細(xì)胞或支持細(xì)胞中丟失，干擾生殖細(xì)胞的發(fā)育和導(dǎo)致不孕，表明miRNAs 在精子發(fā)生過程中具有重要功能[4-5]。

miRNAs 是一類長度為20～25 個核苷酸的非編碼內(nèi)源性RNA，在細(xì)胞增殖、分化和凋亡等許多生理過程中起著重要調(diào)節(jié)作用[6-9]。miRNAs 基因在細(xì)胞基因組中高度保守。在細(xì)胞核中經(jīng)RNA 聚合酶Ⅱ的作用，miRNA 基因轉(zhuǎn)錄成為具有核苷酸尾和帽子結(jié)構(gòu)的發(fā)夾環(huán)狀原始miRNA（pri-miRNA），之后經(jīng)核蛋白DGCR8識別并由核酸內(nèi)切酶Ⅲ—Drosha 剪切成為前體miRNA（pre-miRNA）[10]。pre-miRNA 在輸出蛋白—Exportin5與Ran-GTP 復(fù)合物體的作用下進(jìn)入胞漿，由Dicer 酶剪切形成約22 個核苷酸長度的成熟miRNA。成熟miRNA與Argonaute 蛋白及多種酶類結(jié)合形成RISC，通過識別靶mRNA 的3′-非翻譯區(qū)（3′UTR）并與之結(jié)合，誘導(dǎo)其切割或翻譯抑制[11]。另外，miRNAs 還具有組織和發(fā)育時間特異性，可在不同器官組織或發(fā)育階段調(diào)控不同基因的表達(dá)，因此，miRNAs 可能在精子的不同發(fā)育階段起重要調(diào)控作用。

1 miRNAs 參與調(diào)控精原干細(xì)胞的自我更新與分化

研究表明，人類超過60% 的基因帶有miRNAs 結(jié)合位點，而許多miRNAs 在雄性睪丸組織中高度或特異性表達(dá)，且具有發(fā)育和時間特異性，暗示miRNAs 在精子發(fā)生過程中發(fā)揮著重要作用[12]。近年來，隨著SSCs特異性標(biāo)記基因細(xì)胞分選技術(shù)、體外培養(yǎng)技術(shù)的逐漸成熟以及高通量測序和miRNA 微陣列技術(shù)的快速發(fā)展，研究人員檢測到一些在SSCs 中特異性表達(dá)或高表達(dá)的miRNAs，并發(fā)現(xiàn)miRNAs 可通過靶向相關(guān)基因來參與SSCs 自我更新和分化調(diào)控過程（表1）。

1.1 與SSCs 增殖相關(guān)的miRNAs SSCs 的自我更新受到支持細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子調(diào)控，同時也受其自身miRNAs 的影響。作為一種負(fù)調(diào)控因子，miRNAs 在轉(zhuǎn)錄后水平靶向增殖分化相關(guān)基因，參與SSCs 自我更新和增殖的調(diào)控。

Thy1為SSCs 標(biāo)記基因。Niu 等[13]研究發(fā)現(xiàn)，miR-21、miR-34c、miR-182、miR-183 和miR-146a 等 特 異表達(dá)于Thy1+細(xì)胞中。其中，抑制miR-21 表達(dá)，SSCs凋亡數(shù)量顯著增多，暗示miR-21 對SSCs 數(shù)量的維持具有重要作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，miR-21 啟動子區(qū)具有多個保守的ETS 結(jié)合位點，過表達(dá)ETV5，miR-21 轉(zhuǎn)錄活性顯著增強(qiáng)[13]。ETV5 是ETS 轉(zhuǎn)錄因子家族的一個成員，其在SSCs 和支持細(xì)胞中均有表達(dá)。在SSCs 中，ETV5 可調(diào)節(jié)miR-201、Brachyury 和CXCR4，及 其他已知SSCs 自我更新相關(guān)基因（如Bcl6b、Lhx1等）的表達(dá)，促進(jìn)SSCs 自我更新[30]。Etv5基因缺失常常伴有精子進(jìn)行性缺失或唯支持細(xì)胞綜合征的產(chǎn)生。因此，伴隨著ETV5 在SSCs 中的表達(dá)，miR-21 表達(dá)水平顯著上調(diào)，從而維持SSCs 自我更新。另外，在miR-21 增強(qiáng)子區(qū)也發(fā)現(xiàn)了Pou3f1 和STAT3 的結(jié)合位點，提示多種轉(zhuǎn)錄因子可增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性，參與SSCs 的自我更新過程。

轉(zhuǎn)錄抑制因子PLZF 由Zfp145基因編碼，特異性表達(dá)于精原干細(xì)胞中。在特異性敲除小鼠實驗中發(fā)現(xiàn)，Plzf缺失可導(dǎo)致SSCs 進(jìn)行性減少，細(xì)胞凋亡數(shù)量增多，因此PLZF 對SSCs 數(shù)量的維持具有重要作用[31]。Song 等[14]研究指出，miR-554 可直接靶向Plzf，下調(diào)SSCs 自我更新相關(guān)基因Gfra1、Vasa和C-Myc等表達(dá)，從而抑制SSCs 增殖。另外，部分miRNAs 的表達(dá)還受到PLZF 調(diào)控。Mu 等[15]研究指出miR-146a為PLZF 的靶基因。miR-146a 通過調(diào)控SSCs 自我更新相關(guān)基因Cxcr4的表達(dá)，參與山羊SSCs 的增殖調(diào)控過程。CXCR4 為趨化因子配體12（Chemokine ligand 12，CXCL12）的 受 體，CXCL12 通 過 與CXCR4 結(jié)合，磷酸化ERK1/2，并激活下游SSCs 自我更新相關(guān)基因C-Myc的表達(dá)，促進(jìn)SSCs 的增殖[32]。由此揭示，PLZF 可通過直接結(jié)合miR-146a 的啟動子區(qū)，間接促進(jìn)CXCR4 的表達(dá)，從而維持SSCs 的自我更新。此外，還有研究指出，在已分化成熟巨核細(xì)胞中，PLZF 可直接抑制miR-146 的表達(dá)和起始CXCR4 的翻譯[33]。推測miR-146 對SSCs 的分化具有重要的作用。然而，Huszar 等[16]研究指出，miR-146 高表達(dá)于THY1+/GFRA1+精原細(xì)胞并靶向Med1基因。Med1 作為RA的核激素受體異二聚體RARs 和RXRs 的共調(diào)節(jié)因子，在RA 促進(jìn)SSCs 分化過程中具有重要的作用。過表達(dá)miR-146，Med1及其他SSCs 分化相關(guān)基因（如Kit和Sohlh2）的表達(dá)均顯著性下調(diào)，而SSCs 自我更新相關(guān)基因（如Plzf與Gfrα1）的表達(dá)并無顯著性差異，表明miR-146 可抑制SSCs 的分化，參與SSCs 數(shù)量的維持[16]。

表1 SSCs 內(nèi)miRNAs 的表達(dá)及功能

Moritoki 等[17]應(yīng)用microRNA 微陣列分析了隱睪和正常雄鼠睪丸中miRNAs 的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)miR-135a 在隱睪雄鼠SSCs 中的表達(dá)顯著下調(diào)，并可靶向FoxO1基因。FOXO1 是叉頭轉(zhuǎn)錄因子（FOX）家族成員之一。Goertz等[34]研究表明，F(xiàn)OXO1 特異表達(dá)于SSCs，通過由細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核轉(zhuǎn)移并聚集而活化，增強(qiáng)RetmRNA 的轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞表面蛋白的表達(dá)，促進(jìn)SSCs 的自我更新。在miR-135a 過表達(dá)的SSCs 中，F(xiàn)OXO1 表達(dá)下調(diào)，揭示其可通過調(diào)控FOXO1 的表達(dá)參與SSCs 數(shù)量的維持。

Li 等[18]研究指出，miR-10b 高表達(dá)于Thy+SSCs，可顯著下調(diào)真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Klf4 的表達(dá)。Klf4 是體細(xì)胞重編程中誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的因子之一，高表達(dá)于生殖細(xì)胞，參與細(xì)胞增殖、分化和胚胎發(fā)育的調(diào)控[35]。Klf4的表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯在G1/S 與G2/M 期，從而抑制細(xì)胞增殖并促進(jìn)凋亡[36-37]。過表達(dá)miR-10b，Klf4 的表達(dá)顯著下調(diào)，并伴有SSCs 增殖活動增強(qiáng)，揭示miR-10b 對SSCs 增殖活動的維持具有重要作用。

miR-20 與miR-106a 為miRNA17-92 簇家族的成員。He 等[19]研究表明，miR-20 與miR-106a 特異表達(dá)于GFRA1+SSCs 中，Stat3和Ccnd1為其 潛在靶基因。轉(zhuǎn)錄因子STAT3 是STAT 家族的一員，在胚胎干細(xì)胞的自我更新與分化過程中發(fā)揮著重要作用，并參與SSCs 分化起始過程。過表達(dá)miR-20 與miR-106a，SSCs 標(biāo)志基因Gfrα1、Pouf1、Plzf、Ret和增殖相關(guān)基因Pcna的表達(dá)顯著增強(qiáng)，Stat3和Ccnd1的表達(dá)顯著降低，表明miR-20 與miR-106a 可促進(jìn)SSCs 的自我更新與增殖[19]。此外，Huang 等[20]研究指出，miR-100 也可間接調(diào)節(jié)STAT3 的表達(dá)，促進(jìn)SSCs 的增殖。

Zhou 等[21]研究表明，miR-663a 在SSCs中的表達(dá)量顯著高于粗線期精母細(xì)胞，且可靶向NFIX基因。NFIX 為核因子I（NFI）家族的一員。NFI 是一種雙向轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，通過調(diào)控下游基因的表達(dá)從而在不同的組織或細(xì)胞中發(fā)揮不同功能。研究指出，神經(jīng)干細(xì)胞在由增殖狀態(tài)轉(zhuǎn)為休眠狀態(tài)的過程中，NFIX 表達(dá)水平顯著升高，表明NFIX 在誘導(dǎo)干細(xì)胞休眠的過程中具有重要的作用[38]。過表達(dá)miR-663a，NFIX 表達(dá)水平顯著降低，增殖相關(guān)基因Pcna和細(xì)胞周期調(diào)控因子Cyclin A2、Cyclin B1 和Cyclin E1 的表達(dá)升高，表明miR-663a 可通過調(diào)控NFIX 的表達(dá)，促進(jìn)SSCs 的增殖[21]。

除此之外，miRNAs 還可調(diào)控其他相關(guān)蛋白的表達(dá)，參與SSCs 自我更新和增殖過程。Fu 等[39]研究指出，PAK1可通過PDK1-KDR-ZNF367 和ERK1/2 以及AKT信號通路促進(jìn)人SSCs 增殖并抑制其凋亡。而沉默PAK1的表達(dá)，miR-31-5p 的表達(dá)量顯著上升，因此miR-31-5p 在調(diào)控SSCs 增殖和凋亡方面具有重要作用。后續(xù)實驗發(fā)現(xiàn)，miR-31-5p 可靶向Jazf1基因[22]。JAZF1 是一種具有3 個C2H2 型鋅指結(jié)構(gòu)的核蛋白，其在調(diào)控SSCs增殖發(fā)育過程中的作用機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。過表達(dá)miR-31-5p，JAZF1 的表達(dá)顯著降低，并伴有周期調(diào)控因子Cyclin A2 的表達(dá)下調(diào)；且隨著miR-31-5p 的表達(dá)升高，SSCs 增殖和DNA 合成均受到了不同程度的阻滯，并伴有早期和晚期凋亡細(xì)胞數(shù)量的增多，表明miR-31-5p 通過抑制JAZF1 的表達(dá)參與人SSCs 增殖和凋亡過程的調(diào)控[22]。

KIT 受體是第1 個在分化精原細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn)的標(biāo)志蛋白，且在未分化SSCs 中未見表達(dá)，因此可作為哺乳動物SSCs 開始分化的標(biāo)志。但在SSCs 中檢測到了KitmRNA 的表達(dá)，因此必定存在某種機(jī)制調(diào)控KIT 蛋白在SSCs 中的翻譯過程[40]。miR-221 和miR-222 屬于X 染色體簇miRNAs 家族，可在多種癌細(xì)胞中調(diào)控KitmRNA 的表達(dá)。Yang 等[23]發(fā)現(xiàn)，miR-221 和miR-222特異性表達(dá)于THY1+SSCs 細(xì)胞中，過表達(dá)miR-221 和miR-222 可顯著拮抗RA 誘導(dǎo)的SSCs 的分化過程，而抑制miR-221 和miR-222 的表達(dá)，SSCs 干細(xì)胞活性顯著下調(diào)，說明miR-221 和miR-222 在維持SSCs 自我更新中的重要作用。

Chen 等[24]研究指出，miR-202 高度且特異表達(dá)于SSCs中，可直接靶向Rbfox2、Cpeb1、Ercc2和Nid2。其中，RBFOX2 與CPEB1 均為哺乳動物體內(nèi)保守的RNA 結(jié)合蛋白，分別介導(dǎo)組織特異性剪切和靶RNA 的穩(wěn)定翻譯。體外減數(shù)分裂模型結(jié)果顯示，RBFOX2 在 SSCs 分化的起始過程中具有重要作用。抑制miR-202 的表達(dá)，SSCs 自我更新相關(guān)基因Plzf表達(dá)降低，分化相關(guān)基因Stral、Dazl和Sycp3的表達(dá)均顯著升高；而下調(diào)Rbfox2基因的表達(dá)，分化精原細(xì)胞數(shù)量顯著降低，表明miR-202 可通過介導(dǎo)RBFOX2 的表達(dá)，抑制SSCs 分化的起始，維持SSCs 的增殖活性[24]。1.2 與SSCs 分化相關(guān)的miRNAs LIN28 是一種保守性的RNA 結(jié)合蛋白。Heo 等[41]研究指出，LIN28 可結(jié)合miR-let7 前體的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，抑制DROSHA-DICER 酶的加工處理，從而抑制其成熟，加速其在體內(nèi)的降解過程。Tong 等[25]研究發(fā)現(xiàn)，RA 可顯著下調(diào)LIN28 的表達(dá)，從而減弱其對miR-let7 的抑制作用；RA 處理后，miR-let7的表達(dá)上調(diào)，并伴有SSCs 自我更新相關(guān)基因Ccnd1、Colla2、Mycn以及Myc的表達(dá)抑制，表明miR-let7 在介導(dǎo)RA 信號、誘導(dǎo)SSCs 分化的過程中具有重要作用。此外，Tong 等[26]研究表明，MYC 和MYCN 可誘導(dǎo) mir-17-92（Mirc1）和mir-106b-25（Mirc3）簇miRNAs 的表達(dá)，且這些miRNAs 可靶向促凋亡和分化基因如Bcl2l11、Kit、Socs3和Stat3，參與SSCs 自我更新狀態(tài)的維持。因此，隨著miR-let7 的表達(dá)上調(diào)，Mycn以及Myc的表達(dá)也相繼受到影響，并接著抑制mir-17-92（Mirc1）和mir-106b-25（Mirc3）簇miRNAs 的表達(dá)，從而促進(jìn)SSCs 的分化。說明在SSCs 分化調(diào)控過程中，miRNAs 并非單獨起作用，而是存在一個極其復(fù)雜的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)來參與此過程。

Yu 等[27]研究表明，miR-34c 在成年小鼠睪丸中高度表達(dá)并可靶向Nanos2基因。NANOS2 是NANOS 家族一員，富含編碼RNA 結(jié)合蛋白的鋅指結(jié)構(gòu)基序，因其可抑制雄性生殖干細(xì)胞的減數(shù)分裂過程，因此對SSCs 數(shù)量的維持具有重要作用[42]。過表達(dá)miR-34c，NANOS2表達(dá)受抑制，而SSCs 分化相關(guān)基因Nanos3、Stra8和Scp3的表達(dá)水平均顯著上調(diào)。表明miR-34c 可通過調(diào)控NANOS2 的表達(dá)促進(jìn)SSCs 的分化。此外，還有研究指出，miR-34c、miR-34b、miR-449a、miR-449b、miR-449c均屬于同一家族，具有相似的種子序列，可作用于相同的靶基因[43-45]。因此，miR-34b、miR-449a/b/c 等可能在SSCs 的分化調(diào)控過程中也具有重要作用。

CD49f 為SSCs 的特異性標(biāo)記基因。Niu 等[28]研究指出，miR-204 高度表達(dá)于CD49f-細(xì)胞中，且可直接靶向Sirt1基因。Sirt1 是Sirtuin 家族一員，在小鼠SSCs 中高度表達(dá)，調(diào)控FoxOs和Bcl6等的轉(zhuǎn)錄活動。在過表達(dá)Sirt1 的SSCs 中，SSCs 自我更新和細(xì)胞增殖相關(guān)基因（如Plzf、Oct4、Myc和Pcna）的表達(dá)均明顯上調(diào)。因此，Sirt1 對維持SSCs 的自我更新具有重要作用[46-48]。過表達(dá)miR-204，Sirt1 表達(dá)下調(diào)，同時伴隨著增殖相關(guān)基因Plzf、Oct4、Sox2和Myc的表達(dá)顯著降低[28]。說明miR-204 可通過調(diào)控Sirt1 的表達(dá)促進(jìn)SSCs 的分化。

2 調(diào)控SSCs 中miRNAs 表達(dá)的因素

SSCs 的自我更新與分化是一個動態(tài)平衡過程，受到極度復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)。精子發(fā)生不只受到內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控，SSCs 還是許多細(xì)胞因子作用的靶細(xì)胞，因此，當(dāng)內(nèi)外環(huán)境發(fā)生改變時，SSCs 內(nèi) miRNAs的表達(dá)水平也將發(fā)生變化。目前，研究較多的細(xì)胞因子為GDNF、FGF2、CSF1 和RA。

SSCs 的自我更新依賴于GDNF，GDNF 是由支持細(xì)胞分泌的一種細(xì)胞因子，屬于轉(zhuǎn)化生長因子β家族一員。GDNF 可與Gfra1 和受體酪氨酸激酶Ret 組成的共受體結(jié)合，激活下游磷脂酰肌醇3 激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信號通路、Ras/細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（Ras/ERK）信號通路、Src 家族激酶（SFK）信號通路等多條通路，在SSCs 自我更新的調(diào)控過程中具有重要作用[49-51]。其中，SFK 信號的激活可促進(jìn)SSCs 增殖所必須的特異性基因，如轉(zhuǎn)錄因子B 細(xì)胞CLL/淋巴瘤6 成員B（Bcl6b）、ETS 變異體5（Erm）和Lim 同源盒1（Lhx1）的表達(dá)；而Ras/ERK 1/2 通路的激活可導(dǎo)致cAMP 反應(yīng)元件結(jié)合蛋白1（CREB-1）、活化轉(zhuǎn)錄因子1（ATF-1）、cAMP 反應(yīng)元件調(diào)節(jié)蛋白1（CREM-1）的磷酸化并促進(jìn)早期基因c-fos的轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞周期蛋白A 與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2（CDK-2）的表達(dá)，從而促進(jìn)SSCs 的DNA 合成和自我更新。

此外，F(xiàn)GF2 對SSCs 的自我更新也具有重要作用。FGF2 來源于睪丸的各種細(xì)胞類型，包括支持細(xì)胞、睪丸間質(zhì)細(xì)胞和分化的精子細(xì)胞。Ishii 等[52]研究發(fā)現(xiàn)，支持細(xì)胞分泌的FGF2 與膜上成纖維細(xì)胞生長因子受體（FGFR）結(jié)合，相繼激活SRC/Ras/MEK 通路各因子，并通過磷酸化MAP2K1 激活MAP2K1 信號通路上調(diào)Etv 5和Bcl6b的表達(dá)；而Etv5 的缺失造成受體酪氨酸激酶Ret 的表達(dá)下降，導(dǎo)致SSCs 對GDNF 的應(yīng)答反應(yīng)減弱，進(jìn)一步表明這2 種細(xì)胞因子在SSCs 自我更新過程中的重要作用[53]。

與前2 種細(xì)胞因子相比，對CSF1 在SSCs 自我更新中的作用知之甚少。研究發(fā)現(xiàn)，CSF1 由間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，通過作用于SSCs 上的CSF1 受體CSF1R，從而刺激 GFRα1+精原細(xì)胞的增殖[54]。

RA 是維生素A 的活性代謝物，在調(diào)控SSCs 分化過程中至關(guān)重要[55]。研究發(fā)現(xiàn)，大鼠和小鼠缺乏維生素A 時，其SSCs 分化過程被阻斷，外源注射視黃醇或維甲酸則恢復(fù)SSCs 分化過程[49]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，RA 可通過PI3K/AKT/mTOR 信號通路抑制GDNF 受體亞基Ret 的表達(dá)，并促進(jìn)其靶向基因（如Stra8、Kit、Ccnd2等）編碼的蛋白質(zhì)表達(dá)，直接參與SSCs 的分化過程[34,56]。

miR-100、miR-221、miR-222、miR-146、miR-202-3p、miR-let7 的表達(dá)受到細(xì)胞因子GNDF、FGF2、CSF1 或RA 的調(diào)控；同時，細(xì)胞因子GDNF 可通過正向調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子ETV5 和PLZF 來間接調(diào)節(jié)miR-21 和miR-146a 的表達(dá)，說明細(xì)胞因子可通過對轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控間接調(diào)節(jié)miRNAs 的表達(dá)，從而參與到SSCs 自我更新及分化的調(diào)控過程中，為研究這些細(xì)胞因子對SSCs 作用的分子機(jī)制提供其他思路。

3 miRNAs 調(diào)控SSCs 增殖與分化的其他方式

綜上可知，miRNAs 通過直接和間接調(diào)控SSCs 增殖分化相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)節(jié)SSCs 增殖分化過程。此外，SSCs 自我更新與分化還受到其微環(huán)境的調(diào)控。SSCs 微環(huán)境由SSCs 周圍的支持細(xì)胞、血睪屏障、血管網(wǎng)及其他體細(xì)胞所構(gòu)成。其中支持細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞是主要組成部分，且上述調(diào)控miRNAs 表達(dá)的細(xì)胞因子（如GDNF、FGF2、CSF、RA 等）均由其分泌，因此研究這些細(xì)胞因子的合成和分泌機(jī)制及miRNAs 在該過程所發(fā)揮的作用，對進(jìn)一步揭示miRNAs 對SSCs 增殖與分化的影響具有重要作用。

Yang 等[12]研究指出，miR-202-3p 可靶向脂蛋白受體相關(guān)蛋白6（Lipoprotein Receptor-Related Protein 6，LRP6）抑制支持細(xì)胞增殖分化相關(guān)基因Gndf、Scf、Bmp4、Fgf2、Cxcl12等的表達(dá)，同時miR-202-3p 的過表達(dá)也可促進(jìn)支持細(xì)胞凋亡數(shù)量增加。此外，Zhang 等[57]研究指出，miR-1285 可通過AMPK 通路抑制支持細(xì)胞的增 殖。miR-133b 和miR-762分別靶向GLI3 和RNF4 促進(jìn)支持細(xì)胞增殖[58-59]。也有研究指出，miR-140-5p/3p 缺失的胚胎，間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯增加[60]。miR-150 可抑制STAR 的表達(dá)，降低睪酮的合成，最終影響精子發(fā)生[61]。目前，miRNAs 對SSCs 微環(huán)境調(diào)控方面的研究大多聚焦于miRNAs 對其增殖和凋亡過程的影響，而miRNAs 對支持細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞GNDF、SCF、BMP4、CSF、FGF2、RA 等SSCs 增殖分化相關(guān)細(xì)胞因子分泌的調(diào)節(jié)及深層次調(diào)控機(jī)制方面的研究還較少，加大此方面的研究將有助于全面認(rèn)識miRNAs 在SSCs 增殖分化過程中的作用。

4 結(jié) 語

miRNAs 可通過與細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)錄因子、蛋白受體等多種因素的相互表達(dá)調(diào)控，參與SSCs 自我更新和分化的調(diào)控過程。目前，大多數(shù)研究都聚焦于miRNAs 對SSCs 增殖與分化的直接調(diào)控作用，而其對生殖輔助細(xì)胞睪丸支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞等其他細(xì)胞中多種細(xì)胞因子的合成和分泌的調(diào)控機(jī)制還知之甚少。因此，后續(xù)加大miRNAs 對雄性生殖輔助細(xì)胞中細(xì)胞因子的合成和分泌的調(diào)控機(jī)制研究，將有利于更進(jìn)一步揭示miRNAs 對SSCs 增殖與分化的作用機(jī)制。