藏藥寬筋藤化學成分的研究

楊光忠，李慶慶，徐曉詩，符元澤

(中南民族大學 藥學院，武漢 430074)

寬筋藤為防己科植物中華青牛膽Tinosporasinensis(Lour.) Merr.的藤莖，為傳統(tǒng)藏藥勒折，其性寒，味苦，歸肝經(jīng)，具有舒筋活絡(luò)、清熱利濕、祛風止痛的功效，臨床常用于治療風濕關(guān)節(jié)炎、虛熱以及痛風病等[1].其主要分布于廣西、廣東、云南等地，尤以兩廣地區(qū)分布廣，產(chǎn)量大，資源豐富，在民間沿用歷史悠久，療效顯著[2].寬筋藤含萜類、黃酮類、生物堿類、苯丙素類等多種結(jié)構(gòu)類型的化學成分[3,4].現(xiàn)代藥理學研究表明，寬筋藤提取物具有抗氧化、抗輻射、抗炎、免疫抑制、抗利什曼、保肝等作用[2].為進一步研究藏藥寬筋藤的化學成分、探究其藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，本文利用溶劑提取法，正、反相硅膠柱色譜和半制備高效液相色譜法對其乙醇提取物進行分離純化，并根據(jù)波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物結(jié)構(gòu).從其乙醇提取物中分離得到10個化合物，包含6個酚類以及4個生物堿類化合物，其結(jié)構(gòu)分別鑒定為對羥基苯甲醛 (1)、香草醛(2)、香草乙酮(3)、異莨菪亭(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、偽巴馬汀(7)、trans-N-coumaroyltyramine(8)、trans-N-feruloyltyramine(9)、trans-N-feruloyl-3′-O-methyldopamine (10).化合物3、4和10為首次從寬筋藤中分離得到.

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

核磁共振波譜儀(AVANCE IIITM 600 MHz，德國布魯克)；高效液相色譜儀(Ultimate 3000半制備型，美國戴安，DAD檢測器)；半制備型色譜柱(YMC-Pack ODS-A，250 mm×10.0 mm,5 μm)；三用紫外分析儀(ZF-I型，上海顧村電光儀器廠)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE2000A，上海亞榮生化儀器廠)；循環(huán)水式真空泵(SHB-III，鄭州長城儀器)；正相硅膠(200～300目，青島海洋化工)；反相硅膠(50 μm ,YMC·GEL ODS-A-HG,AAG12S50)；硅膠板GF 254(青島海洋化工)；分析純?nèi)軇?國藥集團化學試劑)；色譜純?nèi)軇?昌泰興業(yè)).

寬筋藤購買于青海西寧，由中南民族大學藥學院劉新橋副教授鑒定為防己科植物中華青牛膽Tinosporasinensis(Lour.) Merr.的藤莖.

1.2 提取與分離

9.4 kg干燥寬筋藤粉碎，70%乙醇室溫浸提3次，每次24 h，提取液真空抽濾后減壓濃縮得乙醇提取物(1.0 kg).乙醇提取物經(jīng)聚酰胺柱層析，依次用純水、30%、50%、70%、100%乙醇梯度洗脫，合并相同組分得5個流份(Fr.1～Fr.5).Fr.2(41.3 g) 經(jīng)反相硅膠柱色譜分離，依次用20%、40%、60%、80%、100%甲醇梯度洗脫，TLC檢測合并得15個組分(Fr.2.1～Fr.2.15).Fr.2.11(4.1 g)經(jīng)正相硅膠柱(200～300目)分離，以二氯甲烷-甲醇(19∶1、9∶1、1∶1)為洗脫劑，TLC檢測合并得9個組分(Fr.2.11.1～Fr.2.11.9).Fr.2.11.1經(jīng)HPLC[流動相，V(甲醇)∶V(水)=37∶63，流速3 mL/min]制備得到化合物1(5 mg,tR=12.13 min)、2(5 mg，tR=13.28 min)、3(5 mg，tR=16.05 min)、4(2.7 mg，tR=15.22 min).Fr.2.11.2經(jīng)HPLC[流動相，V(甲醇)∶V(水)=28.5∶71.5，流速3 mL/min]制備得到化合物5(20.6 mg，tR=18.31 min)、6(12.7 mg，tR=20.43 min).Fr.2.11.6經(jīng)HPLC[流動相，V(乙腈):V(1‰甲酸-水)=25∶75，流速3 mL/min]制備得到化合物7(4 mg，tR=13.00 min).Fr.3(48 g) 經(jīng)正相硅膠柱(200～300目)分離，用石油醚-乙酸乙酯(體積比依次為95∶5，9∶1，8∶2，7∶3，1∶1，3∶7，2∶8，0∶1) 梯度洗脫，TLC檢測合并得7個流份(Fr.3.1～Fr.3.7).Fr.3.6(4.1 g)經(jīng)反相硅膠柱層析分離，30%、50%、70%、80%、100%甲醇依次洗脫，TLC檢測合并得15個組分(Fr.3.6.1～Fr.3.6.15).Fr.3.6.5(100 mg) 經(jīng)HPLC[流動相，V(甲醇)∶V(水)=37∶63，流速3 mL/min]制備得到化合物8(2 mg,tR=36.74 min)、9(29 mg,tR=43.25 min)、10(4.1 mg,tR=46.61 min).化合物1～10的結(jié)構(gòu)式見圖1.

圖1 化合物1～10的化學結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structures of compound 1—10

2 結(jié)果

化合物1:白色粉末，分子式為C7H6O2.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.77(2H,d,J=8.4 Hz,H-2,H-6),6.90(2H,d,J=8.4 Hz,H-3,H-5),9.76(1H,s,-CHO);13C NMR(150 MHz，CD3OD)δC193.0(-CHO),130.3(C-1),133.6(C-2,C-6),117.1(C-3,C-5),165.6(C-4).上述數(shù)據(jù)與文獻[5]報道的對羥基苯甲醛基本一致，故鑒定化合物1為對羥基苯甲醛.

化合物2:白色針狀結(jié)晶，分子式為C8H8O3.1H NMR(600 MHz，CD3OD)δH7.43(1H, s,H-2),6.93(1H,d,J=7.8 Hz,H-5),7.44(1H,d,J=7.8 Hz,H-6),9.73(1H,s,-CHO),3.92(3H,s,3-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC193.0(-CHO),130.5(C-1),111.3(C-2),150.0(C-3),155.4(C-4),116.5(C-5),128.3(C-6),56.5(3-OCH3).上述數(shù)據(jù)與文獻[5]對照基本一致，故鑒定化合物2為香草醛.

化合物4：無色針晶，分子式為C10H8O4.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH6.20(1H,d,J= 9.6 Hz,H-3),7.86(1H,d,J= 9.6 Hz,H-4),7.11(1H,s,H-5),6.76(1H,s,H-8),3.91(3H,s,7-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC164.3(C-2),109.9(C-3),146.4(C-4),113.3(C-5),147.4(C-6),153.6(C-7),104.1(C-8),151.7(C-8a),112.5(C-4a),56.9(7-OCH3).上述數(shù)據(jù)與文獻[7]對照基本一致，故鑒定化合物4為異莨菪亭.

化合物5：白色針晶，分子式為C8H8O4.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.53(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.85(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.57(1H,dd,J=1.8,8.4 Hz,H-6),3.88(3H,s,3-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC123.3(C-1),115.9(C-2),148.7(C-3),152.7(C-4),113.8(C-5),125.4(C-6),170.3(-COOH),56.5(3-OCH3).上述數(shù)據(jù)與文獻[8]對照基本一致，故鑒定化合物5為香草酸.

化合物6：白色粉末，分子式為C9H10O5.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.33(2H，s,H-2,H-6),3.88(6H,s,3,5-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC122.5(C-1),108.3(C-2,C-6),148.9(C-3,C-5),141.6(C-4),170.5(-COOH),56.9(3,5-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道基本一致，故確定化合物6為丁香酸.

化合物7：黃色粉末，分子式為C21H22NO4+.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.62(1H,s，H-1),7.05(1H,s,H-4),3.27(2H,br s,H2-5),4.81(2H,br s,H2-6),9.35(1H,s,H-8),7.64(1H,s,H-9),7.60(1H,s,H-12),8.65(1H,s,H-13),3.99(3H,s,2-OCH3),3.94(3H,s,3-OCH3),4.13(3H,s,10-OCH3),4.06(3H,s,11-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC120.6(C-1a),110.0(C-1),150.9(C-2),153.9(C-3),112.3(C-4),130.2(C-4a),28.0(C-5),56.5(C-6),146.3(C-8),124.2(C-8a),107.3(C-9),154.7(C-10),160.1(C-11),106.4(C-12),139.1(C-12a),119.4(C-13),140.7(C-13a),57.0(2-OCH3),56.8(3-OCH3),57.1(10-OCH3),57.5(11-OCH3).上述數(shù)據(jù)與文獻[10]偽巴馬汀數(shù)據(jù)對照基本一致，故鑒定化合物7為偽巴馬汀.

化合物8：白色固體，分子式為C17H17NO3.1H NMR(600 MHz，CD3OD)δH7.40(2H,d,J=8.4 Hz,H-2,H-6),6.78(2H,d,J=8.4 Hz,H-3,H-5),7.44(1H,d,J=15.6 Hz,H-7),6.38(1H,d,J= 15.6 Hz,H-8),7.05(2H,d,J=7.8 Hz,H-2′,H-6′),6.71(2H,d,J=7.8 Hz,H-3′,H-5′),2.75(2H,t,J=7.2 Hz,H2-7′),3.46(2H,t,J=7.2 Hz,H2-8′);13C NMR(150 MHz, CD3OD)δC127.8(C-1),130.7(C-2,C-6),160.7(C-4),116.4(C-3,C-5),142.7(C-7),118.5(C-8),169.4(C-9),131.4(C-1′),130.9(C-2′,C-6′),116.9(C-3′,C-5′),157.7(C-4′),36.0(C-7′),42.7(C-8′).以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道基本一致，故確定化合物8為trans-N-coumaroyltyramine.

化合物9：白色固體，分子式為C18H19NO4.1H NMR(600 MHz，CD3OD)δH7.10(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.79(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.01(1H,dd,J=8.4,1.8 Hz,H-6),7.44(1H,d,J=16.2Hz,H-7),6.41(1H,d,J=16.2 Hz,H-8),3.86(3H,s,3-OCH3),7.05(2H,d,J=8.4 Hz,H-2′,H-6′),6.72(2H,d,J=8.4 Hz,H-3′,H-5′),2.75(2H,t,J=7.2 Hz,H2-7′),3.46(2H,t,J=7.2 Hz,H2-8′);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC128.3(C-1),111.6(C-2),150.0(C-3),149.4(C-4),116.6(C-5),123.4(C-6),142.2(C-7),118.8(C-8),169.3(C-9),56.4(3-OCH3),131.4(C-1′),130.9(C-2′,C-6′),116.4(C-3′,C-5′),157.0(C-4′),35.9(C-7′),42.7(C-8′).以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道基本一致，故確定化合物9為trans-N-feruloyltyramine.

化合物10：白色粉末，分子式為C19H21NO5.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.12(1H,d,J=1.2 Hz,H-2),6.79(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.02(1H,dd,J=8.4,1.2 Hz,H-6),7.45(1H,d,J=15.6 Hz,H-7),6.41(1H,d,J=15.6 Hz,H-8),3.88(3H,s,3-OCH3),3.83(3H,s,3′-OCH3),6.82(1H,d,J=1.2 Hz,H-2′),6.72(1H,d,J=7.8 Hz,H-5′),6.67(1H,dd,J=7.8,1.2 Hz,H-6′),2.77(2H,t,J=7.2 Hz,Hz-7′),3.48(2H,t,J=7.2 Hz,H2-8′);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC128.4(C-1),111.6(C-2),150.0(C-3),149.4(C-4),116.6(C-5),123.4(C-6),142.2(C-7),118.8(C-8),169.3(C-9),56.5(3-OCH3),56.4(3′-OCH3),132.2(C-1′),113.5(C-2′),149.1(C-3′),146.2(C-4′),116.3(C-5′),122.4(C-6′),36.4(C-7′),42.7(C-8′).以上數(shù)據(jù)與文獻[12,13]報道基本一致，故確定化合物10為trans-N-feruloyl-3′-O-methyldopamine.

3 結(jié)語

通過對寬筋藤乙醇提取物的系統(tǒng)分離，得到10個化合物，包含6個酚類化合物以及4個生物堿類化合物，其結(jié)構(gòu)分別鑒定為對羥基苯甲醛(1)、香草醛(2)、香草乙酮(3)、異莨菪亭(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、偽巴馬汀(7)、trans-N-coumaroyltyramine(8)、trans-N-feruloyltyramine(9)、trans-N-feruloyl-3′-O-methyldopamine(10).其中化合物3、4和10為首次從寬筋藤中分離得到，為寬筋藤質(zhì)量標準的制定和開發(fā)提供了一定的依據(jù).