姜黃素對人舌癌Tca8113細胞增殖周期及凋亡的影響

金 月,金明光,魏 來,崔云峰

(1.長春工業(yè)大學(xué) 口腔科,吉林 長春130012;2.吉林大學(xué) 口腔醫(yī)院;3.長春市中醫(yī)院 口腔科;4.北京勁松口腔醫(yī)院)

舌癌是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤，治療比較棘手[1]，因此有必要進一步研究舌癌的發(fā)病抑制以及發(fā)現(xiàn)及探求有價值的治療藥物，為舌癌的治療提供依據(jù)。姜黃素(curcumin)是從草本植物姜黃根莖中提取出的一種酚性色素，具有抗腫瘤，抗氧化，抗突變等多種生物學(xué)作用，且毒副作用小，獲取方便，對多種腫瘤細胞增殖有明顯抑制作用[2]。因此，本研究依Tca8113細胞為靶點探討姜黃素的生物學(xué)機制，為舌癌治療開辟一新治療途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

人舌癌細胞株(Tca8113)由北京大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院惠贈。姜黃素試劑購于北京化工二廠。96孔細胞培養(yǎng)板。四甲基偶氮唑藍(MTT)購于美國sigma公司，胎牛血清購于長春生物制品研究所。

1.2 方法

1.2.1細胞培養(yǎng)，分組，MTT試驗，流式細胞術(shù)等實驗方法參照文獻[3],并略加改進。

2 結(jié)果

2.1MTT結(jié)果顯示，不同濃度的姜黃素制劑對Tca8113細胞增殖均有抑制作用，且呈劑量依賴性，與對照組相比細胞存活率顯著降低?？梢种芓ca8113細胞生長，誘導(dǎo)細胞凋亡。差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01(表1)。

表1 不同濃度的姜黃素制劑對Tca8113細胞增殖抑制率

2.2流式細胞術(shù)結(jié)果，不同濃度的姜黃素制劑作用于Tca8113細胞后，G0/G1期細胞顯著增多，G0/G1期細胞阻滯，從而使S期細胞減少，導(dǎo)致G2/M期細胞相對增多,細胞凋亡率升高。組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01，提示姜黃素制劑可阻滯Tca8113細胞周期進程改變及誘導(dǎo)細胞凋亡(表2)。

表2 不同濃度的姜黃素制劑對Tca8113細胞周期進程改變及凋亡率

2 討論

舌癌的基礎(chǔ)研究和臨床治療是口腔頜面——頭頸腫瘤外科的重點研究內(nèi)容。五年生存率為50-60%左右，且一直徘徊遲滯不前[3]。因此，尋找不良反應(yīng)小或無不良反應(yīng)的藥物成為目前舌癌綜合治療的熱點和難點，近年來姜黃素抗腫瘤研究方面受到重視：一方面因其來源廣泛，價格低廉，不良反應(yīng)小，抗腫瘤譜廣，具較大的開發(fā)潛力。

MTT實驗結(jié)果表明，不同濃度姜黃素制劑對Tca8113細胞增殖均有抑制作用。呈明顯劑量依賴性，與對照組細胞相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，MTT實驗檢測細胞存活率，具有一定的客觀性。被廣泛用于抗腫瘤藥物篩選和細胞毒性的試驗研究。姜黃素抗腫瘤機制比較復(fù)雜，主要包括抑制腫瘤細胞增殖，誘導(dǎo)凋亡，阻滯細胞周期進程，抑制新生血管生成，抑制環(huán)氧合酶-2(cox2)等多個方面[4]。

流式細胞術(shù)結(jié)果顯示，姜黃素能使Tca8113細胞周期發(fā)生明顯改變，G0/G1細胞阻滯，不能進入S期，故S期細胞減少，從而造成G2/M期細胞相對增多，細胞各期間比例失衡，G0/G1期細胞為DNA合成期。是制造和產(chǎn)生的mRNA.tRNA.rRNA和核蛋白體，故一旦G0/G1期受阻，細胞則不能順利進入G2/M期，從而使腫瘤細胞生長延遲并逐漸走向凋亡或死亡，姜黃素的這種作用主要是通過抑制胸腺嘧啶脫氧核苷激酶的活性來實現(xiàn)的，由于G1期細胞是發(fā)育完成增值周期的啟動點[5]。細胞周期由G1期進入S期，存在G1→S阻滯點。如果這一調(diào)控功能一旦喪失，導(dǎo)致細胞增殖失控，從而形成腫瘤[6]。研究結(jié)果表明，姜黃素能降低Tca8113細胞停滯于G1→S阻滯點，引起G1期細胞的阻滯，從而起到抑制腫瘤細胞增殖的作用。

綜上所述，本實驗證實了姜黃素制劑能夠抑制Tca8113細胞增殖，引起細胞損傷，阻滯細胞周期進程，誘導(dǎo)細胞凋亡，但是，由于細胞生物學(xué)機制十分復(fù)雜仍然需要更深入的研究[7]，以進一步明確姜黃素誘導(dǎo)Tca8113細胞周期阻滯及凋亡機制。以期達到提高療效及其治療應(yīng)用的順應(yīng)性。