外周血T淋巴細(xì)胞亞群在不同致敏原因哮喘兒童中的表達(dá)研究

曾建興，林利平，李國花，黃世杰，蔡明雅，蘇銀鳳

(福建省晉江市醫(yī)院，福建 晉江362200)

哮喘主要是由于大量炎癥細(xì)胞浸潤氣道黏膜并釋放炎性介質(zhì)，使得氣道纖毛細(xì)胞、上皮細(xì)胞壞死導(dǎo)致的，屬于異質(zhì)性疾病，其主要特征為氣道高反應(yīng)性和慢性氣道炎癥，在臨床上主要表現(xiàn)為氣喘、胸悶、咳嗽等[1,2]。有研究指出，不同致敏原因(單一致敏原因和多重致敏原因)的哮喘患者其外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)方式不同，但相關(guān)報(bào)道較少[3]，本次研究目的是探究單一致敏原因和多重致敏原因所導(dǎo)致的哮喘患者的外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)方式，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2016年4月至2018年4月于我院接受治療的84例哮喘兒童為研究對(duì)象，年齡5-14歲，平均年齡8.52±4.74歲，男性55例，女性29例，其中觀察組43例，年齡5-13歲，平均年齡8.45±4.38歲，男性28例，女性15例，對(duì)照組41例，年齡5-14歲，平均年齡8.54±4.55歲，男性27例，女性14例，兩組患者的年齡、性別無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。納入標(biāo)準(zhǔn)：①兩組患者過敏原免疫印跡法試驗(yàn)顯示屋塵螨或粉塵螨≥(++)以上；②患者哮喘均非急性期哮喘；③患者哮喘程度為輕中度；④所有患者家屬均同意參與本次研究。

1.2 方法首先準(zhǔn)備2 ml肝素鉀抗凝血將其分成兩部分，一部分采用流式細(xì)胞儀用于測(cè)定CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞以及Tregs細(xì)胞亞群：分別取100 μl的肝素鉀抗凝血置于3支試管中并放置到室溫避光環(huán)境中，各加入10 μl熒光素標(biāo)記的抗體試劑，孵育20 min后分別加入500 μl溶血?jiǎng)跤?0 min后上機(jī)，分別計(jì)算CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞以及Tregs細(xì)胞的百分比；另一部分用于測(cè)定Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞以及Th17細(xì)胞亞群：首先進(jìn)行細(xì)胞染色，取24孔培養(yǎng)板，每孔加入10 μl離子霉素和2 μl佛波酯，將其置于溫箱中，調(diào)整溫度為37℃，孵育1 h，其次向其中加入1u高爾基抑制劑繼續(xù)進(jìn)行孵育，4 h后取500 μl收集的細(xì)胞置于流失專用試管中，依次加入5 μl CD4-APC和10 μl IL-17A-PE，使用四色分選流式細(xì)胞儀(產(chǎn)自美國貝克曼庫爾特公司，型號(hào)為FC500MPL)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)比較兩組患者的CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞及兩者的比值、Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞及兩者的比值、Tregs細(xì)胞和Th17細(xì)胞及兩者的比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0軟件對(duì)研究中得到數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。兩組計(jì)量結(jié)果比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)， <0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞比較

通過對(duì)兩組患者的CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞比較可以發(fā)現(xiàn)，觀察組患者的CD4+細(xì)胞與CD8+細(xì)胞比值更大，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者的CD4+ 細(xì)胞和CD8+細(xì)胞比較

2.2 兩組患者的Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞比較

通過對(duì)兩組患者的Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞比較可以發(fā)現(xiàn)，兩組患者的Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞及其比值差別不大，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 兩組患者的Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞比較

2.3 兩組患者的Tregs細(xì)胞和Th17細(xì)胞比較

通過對(duì)兩組患者的Tregs細(xì)胞和Th17細(xì)胞比較可以發(fā)現(xiàn)，兩組患者Tregs細(xì)胞差別不大，但觀察組患者Th17細(xì)胞更高，兩者比值更低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組患者的Tregs細(xì)胞和Th17細(xì)胞比較

3 討論

過敏原是導(dǎo)致兒童發(fā)生哮喘、引發(fā)變態(tài)反應(yīng)的起點(diǎn)，也是關(guān)鍵所在，哮喘主要經(jīng)歷了致敏、激發(fā)、效應(yīng)三個(gè)階段，截止最近的一份兒科哮喘調(diào)查結(jié)果顯示，我國兒童哮喘發(fā)病率為0.42%-5.73%，美國報(bào)道指出，室內(nèi)環(huán)境過敏引起的哮喘約占總數(shù)的80%，多種過敏原是發(fā)生哮喘的高危因素[4,5]。

哮喘的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，受環(huán)境、遺傳和免疫因素多個(gè)因素共同影響，目前臨床上普遍認(rèn)為Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞的比例失衡是導(dǎo)致哮喘發(fā)生的主要發(fā)病機(jī)制，本次研究的數(shù)據(jù)顯示，兩組哮喘患者的Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞及其比例差別不大，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明不同致敏原因不會(huì)對(duì)哮喘患者體內(nèi)的Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞的比例產(chǎn)生影響，近年來，醫(yī)學(xué)家逐漸重視系統(tǒng)免疫學(xué)，強(qiáng)調(diào)免疫系統(tǒng)一體化，指出Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞的比例失調(diào)用于解釋哮喘病過于簡(jiǎn)單化[6]，因此，本次研究對(duì)患者細(xì)胞免疫應(yīng)答狀態(tài)進(jìn)行細(xì)化，分析其差異。

本次研究的數(shù)據(jù)顯示，觀察組患者的CD4+細(xì)胞增多，CD8+細(xì)胞減少，CD4+與CD8+細(xì)胞比值更大，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明多重致敏原因會(huì)使哮喘患者體內(nèi)CD4+細(xì)胞CD8+細(xì)胞的比例失衡更加嚴(yán)重。T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫的主要執(zhí)行者，包含CD4+和CD8+兩大細(xì)胞亞群，近期有研究指出，CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞在哮喘的免疫調(diào)節(jié)中作用重大，維持機(jī)體免疫平衡的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是保持CD4+細(xì)胞CD8+細(xì)胞的比值平衡，多重過敏原刺激與單一過敏原刺激相比，CD4+細(xì)胞水平增多，CD8+細(xì)胞水平減少，與本次研究的數(shù)據(jù)一致[7,8]。

Th17細(xì)胞是活化的CD4+T細(xì)胞亞群，其能夠促進(jìn)上皮細(xì)胞、支氣管纖維母細(xì)胞以及平滑肌細(xì)胞的活化，促進(jìn)IL-6、IL-8的高表達(dá)，加強(qiáng)中性粒細(xì)胞浸潤氣道黏膜，Tregs細(xì)胞作為與Th17同期發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞，具有免疫抑制效應(yīng)，能夠分泌TGF-β和IL-10降低抗原特異性免疫應(yīng)答，有研究指出，Tregs細(xì)胞與Th17細(xì)胞的比例失衡也是哮喘的重要作用機(jī)制之一[9]，本次研究的數(shù)據(jù)顯示，觀察組患者Tregs細(xì)胞和Th17細(xì)胞比值更小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明多重致敏原因更容易造成哮喘，當(dāng)過敏原增多時(shí)，多種過敏原中的蛋白酶活性能夠?qū)⑸掀ぜ?xì)胞裂解，加速上皮細(xì)胞的凋亡，破損的上皮細(xì)胞會(huì)分泌IL-25、TSLP等內(nèi)源性危險(xiǎn)信號(hào)分子，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生[10]。

單一致敏原因和多重致敏原因?qū)е碌南瓋和w內(nèi)Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞比例差不大，但CD4+細(xì)胞CD8+細(xì)胞的比值更大，Tregs細(xì)胞和Th17細(xì)胞比值更小。