韓麗麗,韓性運
1周口市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科,河南 周口 466000
2周口職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)科,河南 周口 466000
非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是臨床常見的一種惡性腫瘤,嚴(yán)重威脅著患者的生命健康,導(dǎo)致患者的生活質(zhì)量明顯下降[1-2]。在揭示NSCLC發(fā)病機(jī)制的過程中可以發(fā)現(xiàn),腫瘤調(diào)控相關(guān)因子的改變能夠通過影響肺上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征,導(dǎo)致細(xì)胞增殖、分化及浸潤過程異常,進(jìn)而促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生[3]。組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶hMOF能夠通過參與上皮細(xì)胞的分化、DNA損傷性修復(fù)或癌基因的突變誘導(dǎo)過程,增加上皮細(xì)胞惡性病變的風(fēng)險[4];p53是一種重要的抑癌基因,能夠通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的激活,抑制腫瘤細(xì)胞的持續(xù)性增殖,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡[5-6]。一項關(guān)于p53蛋白與生殖系統(tǒng)惡性腫瘤關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn),p53蛋白表達(dá)水平升高與晚期卵巢漿液性腺癌患者的臨床分期密切相關(guān)[7]。目前,關(guān)于hMOF、p53蛋白表達(dá)與NSCLC關(guān)系的研究尚少。本研究對hMOF、p53蛋白在NSCLC患者中的表達(dá)情況進(jìn)行分析,并對其與NSCLC患者臨床特征的關(guān)系進(jìn)行探討,現(xiàn)報道如下。
選取2015年1月至2018年1月周口市中心醫(yī)院收治的NSCLC患者。納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為NSCLC;②手術(shù)前未行放化療等抗腫瘤治療;③病歷資料及手術(shù)標(biāo)本保存完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤;②合并肝腎功能障礙、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病等其他嚴(yán)重疾病。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn),本研究共納入NSCLC患者89例作為NSCLC組,并收集患者的NSCLC組織標(biāo)本。另外,選取同期于周口市中心醫(yī)院行手術(shù)切除的肺良性病變患者47例作為對照組,所有患者均經(jīng)病理組織學(xué)確診,且均未合并肝腎功能障礙、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病等其他嚴(yán)重疾病;其中肺大皰14例,肺結(jié)核12例,炎性假瘤15例,支氣管擴(kuò)張6例,收集肺良性病變患者的肺良性病變組織標(biāo)本。NSCLC組和對照組患者的性別、年齡、體重指數(shù)比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表1),具有可比性。
表1 兩組患者的基本臨床特征
采用免疫組織化學(xué)法對NSCLC組織和肺良性病變組織中hMOF和p53蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行檢測。石蠟包埋組織,行連續(xù)性切片,厚度為3 μm,60℃烤片60 min,常規(guī)脫水后,采用乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid,EDTA)進(jìn)行抗原修復(fù),加入 10 μl蒸餾水,加入 10%過氧化氫 5 μl,室溫下孵育30 min,磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)洗滌3次,每次3 min,加 入hMOF、p53單克隆抗體(1∶1000,購自羅氏公司),37℃孵育60 min,PBS洗滌3次,每次3 min,加入辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)標(biāo)記的hMOF、p53二抗(1∶2000,購自羅氏公司),37 ℃孵育20 min,PBS洗滌3次,每次3 min,加入二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine,DAB)后,PBS沖洗和復(fù)染,脫水后在顯微鏡下進(jìn)行觀察。
hMOF、p53蛋白定位于細(xì)胞核,呈黃色顆粒狀;隨機(jī)選取5個高倍鏡視野,每個視野計數(shù)100個細(xì)胞,總計500個細(xì)胞,采用半定量積分法對染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例進(jìn)行評分。染色強(qiáng)度評分:無著色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分;陽性細(xì)胞比例評分:<10%為1分,11%~30%為2分,31%~50%為3分,≥51%為4分。最終得分為染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例得分之積,分?jǐn)?shù)≥4分為陽性表達(dá)。
采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料以例數(shù)和率(%)表示,組間比較采用χ2檢驗;采用多元Logistic回歸分析法對影響NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白表達(dá)的因素進(jìn)行分析;相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
hMOF、p53蛋白均定位于細(xì)胞核,呈黃色顆粒狀。NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的陽性表達(dá)率分別為58.4%(52/89)和61.8%(55/89),均高于肺良性病變組織的14.9%(7/47)和12.8%(6/47),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=23.732、29.894,P<0.05)。(圖1)
圖1 NSCLC 組織和肺良性病變組織中hMOF和p53蛋白的表達(dá)情況(免疫組化染色,×400)
TNM分期為Ⅲ~Ⅳ期、分化程度為中低分化NSCLC患者NSCLC組織中hMOF蛋白的陽性表達(dá)率分別高于TNM分期為Ⅰ~Ⅱ期、分化程度為高分化的患者,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=14.634、17.311,P<0.05);TNM分期為Ⅲ~Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白的陽性表達(dá)率分別高于TNM分期為Ⅰ~Ⅱ期、分化程度為高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=21.515、18.495、11.855,P<0.05)。(表2)
表2 不同臨床特征NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的表達(dá)情況(n=89)
多元Logistic回歸分析結(jié)果顯示:TNM分期、分化程度均為NSCLC患者NSCLC組織中hMOF蛋白表達(dá)的獨立影響因素(OR=2.67、2.39,P<0.01);TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均為NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白表達(dá)的獨立影響因素(OR=2.41、2.49、2.63,P<0.01)。(表3、表4)
表3 89例NSCLC患者NSCLC組織中hMOF蛋白表達(dá)影響因素的多因素分析
表4 89例NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白表達(dá)影響因素的多因素分析
NSCLC組織中hMOF和p53蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.838,P<0.05)。(表5)
表5 NSCLC組織中hMOF和p53蛋白表達(dá)的相關(guān)性
遺傳易感因素、長期吸煙等均能夠促進(jìn)肺泡上皮細(xì)胞的持續(xù)性病變,增加NSCLC的發(fā)生風(fēng)險。在合并有呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤家族史的人群中,NSCLC的發(fā)病率可進(jìn)一步上升[8]。NSCLC患者臨床預(yù)后較差,其中位生存時間不足34個月,采用綜合性措施治療后,NSCLC患者的病死率仍超過35%[9-11]。免疫靶向治療能夠在肺癌患者的輔助治療過程中發(fā)揮重要作用,而本研究對NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行探討,不僅能夠為深入揭示NSCLC的發(fā)病機(jī)制提供參考,同時還能夠為NSCLC患者免疫靶向治療的靶點選擇提供參考。
hMOF為組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶家族成員,其能夠通過激活上皮細(xì)胞內(nèi)的不同信號通路,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的異常增殖和分化,進(jìn)而導(dǎo)致上皮來源惡性腫瘤的發(fā)生。hMOF蛋白可以通過乙?;揎椖[瘤細(xì)胞的DNA,提高癌基因上游轉(zhuǎn)錄因子的活性,進(jìn)而增加癌基因的擴(kuò)增風(fēng)險。hMOF蛋白表達(dá)水平升高時,能夠通過誘導(dǎo)癌基因突變,降低癌基因的錯配修復(fù)能力,促進(jìn)惡性腫瘤的病情進(jìn)展。p53是抑癌基因家族成員,能夠判斷DNA的變異程度。當(dāng)DNA變異較小時,p53可以促進(jìn)細(xì)胞的自我修復(fù);但當(dāng)DNA變異較大時,p53則會誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[12]。姜愛英等[13]對hMOF、p53蛋白在NSCLC患者中的表達(dá)情況進(jìn)行研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)hMOF、p53蛋白表達(dá)水平升高與NSCLC的發(fā)生過程密切相關(guān),但缺乏對hMOF、p53蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床特征關(guān)系的研究。
本研究通過免疫組織化學(xué)法檢測了hMOF、p53蛋白在NSCLC患者NSCLC組織中的表達(dá)情況,并探討了hMOF、p53蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床特征的關(guān)系,結(jié)果顯示NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的陽性表達(dá)率均高于肺良性病變組織,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),提示hMOF、p53蛋白的表達(dá)水平升高均能影響NSCLC的發(fā)生過程,究其原因可能與hMOF、p53蛋白的下述幾個方面的作用有關(guān)[14-16]:①hMOF表達(dá)水平升高會導(dǎo)致組蛋白酶的修飾異常,過度的乙?;揎椖軌蛱岣呱嫌螁幼釉谀[瘤細(xì)胞中的活性,提高腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)增速度;②p53蛋白具有抑癌作用,但在NSCLC患者中p53蛋白的表達(dá)水平升高,這主要由于腫瘤細(xì)胞的過度增殖,能夠反饋性誘導(dǎo)p53蛋白的釋放,從而參與到腫瘤細(xì)胞的增殖調(diào)控過程。郁俊[17]研究表明,NSCLC患者NSCLC組織中,p53蛋白的陽性表達(dá)率可平均上升40%以上,特別是在合并有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或腫瘤病情進(jìn)展較為明顯的患者中,p53蛋白的表達(dá)水平升高更為明顯。在探討hMOF、p53蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床特征的關(guān)系中發(fā)現(xiàn),TNM分期為Ⅲ~Ⅳ期、分化程度為中低分化NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的陽性表達(dá)率均分別高于TNM分期為Ⅰ~Ⅱ期、分化程度為高分化的患者,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白的陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),提示hMOF、p53蛋白表達(dá)水平均與NSCLC患者的病情進(jìn)展有關(guān),究其原因可能為hMOF、p53蛋白的表達(dá)水平升高能夠影響肺泡上皮細(xì)胞分化成熟,從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞低分化的發(fā)生;而hMOF和p53蛋白可使腫瘤細(xì)胞的浸潤及侵襲能力發(fā)生改變,從而促進(jìn)肺癌患者臨床分期的進(jìn)展。多因素分析結(jié)果顯示,TNM分期、分化程度均為NSCLC患者NSCLC組織中hMOF蛋白表達(dá)的獨立影響因素(P<0.05),而TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均為NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白表達(dá)的獨立影響因素(P<0.05),提示不同臨床病理因素可能對hMOF、p53的表達(dá)水平產(chǎn)生影響,而這主要由于相關(guān)臨床病理特征的進(jìn)展能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞內(nèi)腫瘤信號通路的激活,最終導(dǎo)致hMOF、p53的異常表達(dá)。本研究結(jié)果還顯示,NSCLC組織中hMOF和p53蛋白的表達(dá)呈正相關(guān),提示兩者在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定的協(xié)同作用,但具體作用機(jī)制尚未明確。
綜上所述,NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白表達(dá)水平均明顯升高,且hMOF、p53蛋白的表達(dá)水平均與NSCLC患者的臨床分期及腫瘤細(xì)胞分化程度有關(guān)。