阿維菌素發(fā)酵染菌問題的探討

王建中

寧夏泰益欣生物科技有限公司 寧夏銀川 750205

阿維菌素在發(fā)酵過程中需要做到純種培養(yǎng)，在管道、發(fā)酵罐、培養(yǎng)基、種子及斜面等各個環(huán)節(jié)，均需要對不良因素進行嚴格消除，以便將各種雜菌除去，同時還需要通入經(jīng)過處理的無菌空氣，且需要做到無菌操作取樣系統(tǒng)、補料系統(tǒng)、發(fā)酵廢氣排放系統(tǒng)及機械攪拌系統(tǒng)，從而保證雜菌不會對生產(chǎn)產(chǎn)生污染。

1 分析阿維菌素發(fā)酵過程中出現(xiàn)染菌問題的原因

1.1 染菌時間

早期出現(xiàn)染菌的原因可能與設(shè)備不徹底滅菌、培養(yǎng)基滅菌不良、操作不當(dāng)和種子中帶雜菌等相關(guān)因素有關(guān)；中后期出現(xiàn)的染菌，可能與取樣操作不合理、中間補料操作不良、設(shè)備滲漏等因素有關(guān)。

1.2 染菌類型

染耐熱性芽孢桿菌的原因可能與設(shè)備有死角和培養(yǎng)基不徹底滅菌等因素有關(guān)；染酵母菌、小球菌的原因可能與閥門滲漏、空氣過濾系統(tǒng)不嚴密等相關(guān)因素有關(guān)；染霉菌的原因可能為無菌操作不嚴格和滅菌不徹底[1]。

2 在阿維菌素發(fā)酵過程中避免出現(xiàn)染菌問題的相關(guān)措施

2.1 避免菌種帶菌

菌種的優(yōu)良性能夠使生產(chǎn)的正常運行得到保證，在擴大培養(yǎng)、優(yōu)選、復(fù)壯及純化菌種期間，需要做到嚴格控制，使無雜菌污染情況得到保證。在制備斜面種子期間，若斜面培養(yǎng)基存在不徹底的滅菌情況，或者菌種操作人員在制備種子懸液和實行斜面接種過程中存在不嚴格的無菌操作情況，就會導(dǎo)致斜面種子發(fā)生帶菌情況，從而出現(xiàn)種子罐染菌。按照放線菌、種子罐體基本結(jié)構(gòu)及種子制備工藝的相關(guān)特點，可以從以下幾方面加強對染菌問題的有效避免。

（1）積極預(yù)防：從菌種的保藏至一級罐種子，具有較多的操作環(huán)節(jié)，且在操作過程中具有較多的參與人員，一旦有染菌情況出現(xiàn)，將會增加染菌原因查找的難度。為使染菌問題從根本上得到消除，需要對各個環(huán)節(jié)進行積極預(yù)防，使全體操作人員將無菌意識積極樹立，防止出現(xiàn)技術(shù)管理不良和操作失誤情況發(fā)生。按照放線菌特性、設(shè)備特征及無菌要求，將科學(xué)的崗位SOP制定，同時對其進行充分落實[2]。

（2）對關(guān)鍵操作進行嚴格控制：在制備一級種子期間，操作人員需要具備較強的操作水平，有利于使種子罐染菌問題的出現(xiàn)得到避免，特別是制備一級種子和斜面種子的相關(guān)人員，他們的實踐經(jīng)驗應(yīng)當(dāng)豐富，且具備較強的理論基礎(chǔ)。

在制備斜面種子過程中需要將關(guān)鍵的技術(shù)問題解決：制備菌種期間需要確保培養(yǎng)基的配制不存在較大顆粒，消毒滅菌培養(yǎng)基過程中需要使蒸汽流動性得到保證，同時使溫度計和壓力計保持一致性，有利于避免假壓形成。滅菌以后，為避免培養(yǎng)基出現(xiàn)二次染菌情況，在對培養(yǎng)基滅菌以后，需要對其立即使用。在無菌操作過程中，需要在使用前對無菌室進行徹底滅菌處理，保證所用的器具不存在帶菌情況。在操作過程中，需要在上風(fēng)處放置無菌物品，在下風(fēng)處放置可能帶菌或帶菌的物品；操作人員要做到減少說話頻率，防止打噴嚏、咳嗽等相關(guān)動作。

在接種一級種子過程中應(yīng)當(dāng)將關(guān)鍵問題解決：在開始接種前需要將一級種子罐區(qū)門窗關(guān)閉，通過過氧乙酸等消毒液進行滅菌處理；將接種帽打開之前，需要運用75%的酒精對接種帽進行擦拭處理。在接種過程中需要保證具有較快的倒種速度，同時接種口和種子瓶需要保證有火焰的保護；此外，在接種期間需要關(guān)閉排風(fēng)閥門，并將少量的無菌風(fēng)通入罐內(nèi)，使正壓得到有效維持[3]。

（3）促進工藝管理不斷加強，使操作人員有效固定：在制備種子期間，導(dǎo)致一級種子罐染菌率較高的原因包括：操作人員存在不強的責(zé)任心、不熟練的配合、更換頻繁及環(huán)境潔凈度較差等。即便存在崗位SOP，然而不同的人存在不同的操作手法，這些細微的差別不容易被改變和察覺，操作的不規(guī)范會使染菌問題出現(xiàn)，再在操作項目不固定和操作人員不固定的影響作用下，較易暴露上述隱患，導(dǎo)致很難分辨出染菌的原因。所以，需要對操作專業(yè)化不斷強化，也就是說在接種、制備一級種子無菌培養(yǎng)基和斜面種子過程中，需要具有固定的操作內(nèi)容和操作人員，促進操作管理實現(xiàn)一條龍。

2.2 避免空氣帶菌

在阿維菌素發(fā)酵過程中需要將大量的無菌空氣持續(xù)通入，因此染菌和過濾介質(zhì)效能之間具有十分密切的關(guān)系。針對空氣過濾系統(tǒng)，需要定期將其設(shè)備的排污閥打開，將里面的油污、水等污物及時排掉，防止對空氣除菌效果產(chǎn)生影響。對操作規(guī)程嚴格執(zhí)行，定期消毒滅菌無菌空氣系統(tǒng)。在結(jié)束罐體的滅菌以后，需要保證發(fā)酵罐、種子罐的罐壓低于無菌空氣壓力，以免培養(yǎng)液向空氣過濾系統(tǒng)內(nèi)倒流的情況發(fā)生。需要將罐前高效過濾器安裝于進入發(fā)酵罐和種子罐的空氣管道上，通過生物鑒定方法和檢測儀器及時、準確的判斷過濾器的失效情況，同時按照檢測結(jié)果，對高效過濾器芯適時更換[4]。

3 結(jié)語

綜上所述，在阿維菌素發(fā)酵過程中，導(dǎo)致染菌問題出現(xiàn)的原因十分復(fù)雜，主要包括操作不當(dāng)、滅菌不良、空氣帶菌及種子帶菌等。在阿維菌素生產(chǎn)發(fā)酵過程中，染菌問題會對其產(chǎn)生不利影響，輕者會對質(zhì)量和產(chǎn)量產(chǎn)生影響，重者會出現(xiàn)倒灌情況，甚者導(dǎo)致停產(chǎn)情況發(fā)生。所以，在阿維菌素發(fā)酵過程中，防止染菌問題出現(xiàn)是一項十分關(guān)鍵的內(nèi)容，生產(chǎn)技術(shù)人員需要對這方面內(nèi)容高度重視。在發(fā)酵生產(chǎn)阿維菌素期間，需要嚴格控制每個環(huán)節(jié)，將防治工作和常規(guī)檢查工作做好。如果有染菌問題出現(xiàn)，需要對出現(xiàn)的原因進行認真分析，并采取合理措施有效解決。在深入發(fā)展發(fā)酵工業(yè)的影響下，會將發(fā)酵染菌的防治向更廣的范疇擴大，從而有效降低損失。